de compuestos que son insolubles en agua pero solubles en disolventes orgánicos tales como éter, cloroformo, benceno o acetona. Métodos de extracción y cuantificación El contenido total de lípidos se determina comúnmente por métodos de: 1.- Extracción con disolventes orgánicos (por ejemplo Soxhlet, Goldfish, Mojonnier), sin embargo también puede cuantificarse por métodos de : 2.-Extracción que no incluyen disolventes (por ejemplo, Babcock, Gerber) y por: 3.- Métodos instrumentales que se basan en propiedades físicas o químicas de los lípidos (por ejemplo, infrarrojo, densidad y absorción en rayos X) 1.- Extracción con Disolventes Orgánicos
-Método de Soxhlet
-Es una extracción semi-continua con
un disolvente orgánico. En este método el disolvente se calienta, se volatiliza y condensa goteando sobre la muestra la cual queda sumergida en el disolvente. Posteriormente éste es sifonado al matraz de calentamiento para empezar de nuevo el proceso. El contenido de grasa se cuantifica por Esquema de extracción Soxhlet. diferencia de peso Método de Soxhlet Agregar dos cargas del disolvente Colocar a peso constante un (generalmente éter etílico) por el matraz bola de fondo plano con refrigerante y calentar el matraz perlas o piedras de con parrilla a ebullición suave. Para ebullición en la estufa a 100ºC, verificar que se ha extraído toda la aproximadamente 2 hrs. grasa, dejar caer una gota de la Pesar de 4 a 5 g de muestra descarga sobre papel filtro, al sobre un papel, enrollarlo y evaporarse el disolvente no debe colocarlo en un cartucho de dejar residuo de grasa. celulosa, tapar con un algodón Una vez extraída toda la grasa, (No apretar el algodón contra la quitar el cartucho con la muestra muestra) y colocar el cartucho desengrasada, seguir calentando en el extractor. Conectar el hasta la casi total eliminación del matraz al extractor, en el que se disolvente, recuperándolo antes de debe encontrar el cartucho con que se descargue. Quitar el matraz y la muestra, y posteriormente secar el extracto en la estufa a conectar éste al refrigerante. 100ºC por 30 min., enfriar y pesar. (No poner grasa en las juntas). Método de Goldfish Es una extracción continua con un disolvente orgánico. Éste se calienta, volatiliza para posteriormente condensarse sobre la muestra. El disolvente gotea continuamente a través de la muestra para extraer la grasa. El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso entre la muestra o la grasa removida Colocar un vaso para Goldfish en la estufa a 100ºC hasta peso constante, aproximadamente 2 hrs. Pesar de 4 a 5 g de muestra sobre un papel, enrollarlo y colocarlo en un cartucho de celulosa, tapar con un algodón. Situar el cartucho en un recipiente con el fondo perforado y colocarlo en el sostenedor del equipo. Adicionar en el vaso para Goldfish aproximadamente 40 mL del disolvente éter etílico) y colocarlo en el equipo mediante un anillo de hierro con empaque de hule. Subir la parrilla girando hacia un lado y al contrario. Calentar hasta la extracción completa de la grasa. Para verificar que se ha extraído toda la grasa, dejar caer una gota de la descarga sobre papel filtro, al evaporarse el disolvente no debe dejar residuo de grasa.
Al finalizar, cambiar el sostenedor del cartucho por un recipiente sin
perforación y calentar de nuevo para recuperar el disolvente del vaso. Quitar el vaso del equipo y secar el extracto en una estufa a 100ºC por 30 min., enfriar y pesar. Calcular el porcentaje de grasa. MÉTODO DE SOXHLET CÁLCULOS
%GRASA=gr. GRASA EN LA MUESTRAx100
gr. EN LA MUESTRA SECA Método de Mojonnier
La grasa es extraída con una
mezcla de éter etílico y éter de petróleo en un matraz de Mojonnier, la grasa extraída se pone a peso constante y es expresada en porcentaje de grasa por peso. La prueba de Mojonnier es un ejemplo de extracción discontinua con disolvente. Esta extracción no requiere Matraz de extracción remover previamente la Mojonnier humedad de la muestra. PROCEDIMIENTO Decantar la fase etérea en un matraz bola previamente Pesar 10g de muestra y colocarla en puesto a peso constante. el tubo de extracción Mojonnier Repetir la extracción 3 Adicionar 1 mL de hidróxido de veces usando una mezcla amonio 0.88 N y mezclar. Adicionar 10 mL de etanol, mezclar y enfriar. de 5 mL de etanol, 25 mL Adicionar 25 mL de éter etílico, de éter etílico y 25 mL de tapar el tubo y agitar vigorosamente éter de petróleo. por un minuto. Adicionando el extracto en Enfriar, adicionar 25 mL de éter de el matraz bola. petróleo, agitar vigorosamente por 30 s). Dejar reposar por 30 min o Evaporar el disolvente en hasta que esté completamente rotavapor, secar el extracto separada la fase orgánica. Si es lipídico en la estufa a 100ºC necesario, adicione agua destilada durante 1 h y pesar. para establecer una interfase entre Calcular el porcentaje de los 2 líquidos en la parte mas angosta del tubo. grasa. 2.-EXTRACCIÓN QUE NO INCLUYEN DISOLVENTES ORGANICOS Método de Gerber. Éste, así como los demás métodos volumétricos presentan un carácter un tanto empírico ya que varios factores afectan la gravedad específica de la grasa separada, variaciones propias de la grasa, ácidos grasos presentes, solubilidad de la grasa en los disolventes, etc. Con estos métodos volumétricos la muestra se sitúa en un butirómetro y se descompone utilizando ácidos o álcalis de manera que la grasa es liberada, esta se separa por métodos mecánicos (centrifuga) y se colecta en el cuello calibrado. Medir, en una probeta, 10 mL de ácido sulfúrico Gerber y añadirlos dentro del butirómetro. La grasa está en la leche en forma de pequeños glóbulos rodeados por una capa protectora. La separación completa de la grasa precisa la destrucción de esta envoltura protectora. Este proceso se lleva a cabo por medio del ácido sulfúrico concentrado, de entre el 90 y el 91 % de masa (ácido sulfúrico Gerber). Una vez preparada la muestra, tomar 11 mL de leche e introducirlos en el butirómetro
En este paso, el butirómetro se calienta considerablemente y
los productos que se forman tiñen la disolución de color marrón. La grasa liberada en este proceso será separada posteriormente por centrifugación. Añadir 1 mL de alcohol amílico al butirómetro y cerrarlo. Agitar bien la mezcla.
Centrifugar los butirómetros
Los butirómetros se introducen en la centrifugadora y se centrifugan durante unos cinco minutos.
Lectura del resultado
En la escala del butirómetro se puede leer el contenido en grasa de la leche como contenido de masa en tanto por ciento (en la imagen 1,9%). TAREA