INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA

INDUCCIÓN DE MUTANTES EN Escherichia coli

GRUPO 5QM2

SECCIÓN 1

Integrante Profesores
CASTRO ALTAMIRANO SAÚL GARCIA RANGEL MARIA VIRGEN
CORTES BASURTO CECILIA ESTEVA GARCIA MARTHA ELENA

1
Mutación
Cambio en la secuencia de nucleótidos en el DNA que es
heredable y no está relacionado con la recombinación.

Mutación en la cadena del DNA.

2
Mutante
Organismo del cual su genotipo difiere al de la cepa
silvestre.

Mutagénesis
Proceso mediante el cual se llevan a cabo las mutaciones.

3
Importancia de las mutaciones

• Aumentan la probabilidad de supervivencia.

• Variabilidad biológica o genética en las poblaciones.
• Perjudicial si se pierde un metabolismo.
• En algunos casos pueden ser letales.

Resistencia a fármacos. Producción de pigmento bacteriano.

4
 Clasificación de los tipos de mutación

Espontáneas Errores en la replicación

Origen

Por agentes físicos, químicos y

Inducidas
biológicos

5
 Clasificación de los tipos de mutación

● Transición
● Por sustitución de
bases ● Transversión

Microlesiones
● Cambios en marco ● Deleción
Grado de lectura ● Inserción
de lesión

Macrolesiones

❖ Con sentido equivocado

Efecto en el fenotipo ❖ Sin sentido

❖ Silenciosa

6
Macrolesiones
Mutaciones que afectan a miles o millones de pares de bases.

Microlesiones
Mutaciones que afectan a una o dos bases , causando un efecto
perjudicial.

Mutación puntual debido a un cambio en una base nitrogenada.

7
 Frecuencia de las mutaciones
Mutación espontánea
Es producida por errores en la replicación del DNA y es del orden
de 10-7 – 10-10 por número de células.

Mutación inducida
Los medios físicos, químicos y biológicos permiten aumentarla
dentro de un rango de 10-4– 10-7 por número de células.

8
 Mutaciones por sustitución de bases
Transición

Es el reemplazamiento de una base púrica o pirimídica en una cadena del

DNA por otra del mismo tipo, en la cadena complementaria.

Transversión

Es el reemplazamiento de una base púrica o pirimídica en una cadena del

DNA por otra de tipo diferente en la cadena complementaria.

Doce diferentes sustituciones pueden ocurrir en el DNA. 9

10
 Inserción de base (s). Microlesión puntual

Cuando se añade o se elimina una o más bases nucleotídicas se ocasiona

una cambio en el marco de lectura de los codones.

Inserciones de 1 o 2 pares de bases alteran el marco de lectura del gen distal al

sitio de la mutación.
11
 Deleción de base (s). Microlesión puntual

Deleciones de 1 o 2 pares de bases alteran el marco de lectura del gen distal al

sitio de la mutación.

12
Consecuencias de las mutaciones
puntuales

13
Mutación silenciosa
El codón que ha sido alterado produce el mismo aminoácido.

14
 Mutación con sentido equivocado
Se produce un cambio en un nucleótido, provocando la aparición
de un codón que codifica para un aminoácido distinto.

15
Mutación sin sentido
Provoca la aparición de un codón de terminación.

16
 Clasificación de los tipos de mutación

● Cambios tautoméricos

● Despurinización

Espontánea ● Desaminación

● Daño oxidativo

● Errores en replicación

● Físicos
Inducida por agentes mutágenos ● Químicos
Elementos genéticos
● Biológicos
móviles

17
Tautomerización
Intercambio de un átomo de hidrógeno entre otros dos átomos de la misma
molécula, en ambos casos formando un enlace covalente.

Tautomerismo ceto- enólico en guanina y timina, y amino- imino en citosina y

adenina.
18
Apareamiento incorrecto entre bases, debido al tautomerismo.

19
Mecanismo por el cual los cambios tautoméricos causan mutaciones en el
DNA.

20
 Despurinización

Consiste en la interrupción del enlace glucosídico entre la base y

desoxirribosa y la subsecuente pérdida de un residuo de guanina
o adenina del DNA.

Pérdida de un residuo de purina de una sola hebra del ADN (Griffiths et al,
2015., p. 589).
21
 Desaminación
Los residuos de uracilo no reparados se emparejarán con adenina en
la replicación.

Causa transiciones G:C→ A:T (Griffiths et al,

2015., p. 590)

22
 Daño oxidativo
Especies activas de oxígeno, tal como radicales superóxido (O2 • − ),
peróxido de hidrógeno (H2O2), y radicales hidroxilo ( • OH), se
producen como subproducto del metabolismo aeróbico normal y
causan daño oxidativo.

El producto (8- oxo dG) frecuentemente se une con A, resultando transversiones

G→T.
23
 Errores en la replicación

La Dna polimerasa retrocede para eliminar el desapareamiento de A-C

usando su actividad exonucleasa de 3´ a 5´.
24
Mutación por agentes Físicos

25
 Mecanismo de acción de Luz Ultravioleta (UV)
Une residuos adyacentes de pirimidina en la misma hebra.

(Griffiths et al, 2015., p. 594-595) 26

 5- Bromouracilo (5-BU)
Análogos de bases

2- Aminopurina (2-AP)
Mutagénos Químicos

Agentes Ácido nitroso

desaminantes (HNO2)

Modificadores Etilmetanosulfonato
de bases (EMS)
Agentes alquilantes
N- Metil- N´-nitro-
N-
nitrosoguanidina
Hidroxilamina (NH2OH) (NTG)

Intercalantes Acridinas 2,8-Diaminoacridina (Proflavin)

27
Tabla 1. Características específicas de los mutágenos químicos

28
 Mecanismo de acción del 5- bromouracilo (5-BU)
El bromo en la posición 5 es similar al metil de la timina en la
misma posición, por lo cual el bromo incrementa la frecuencia de
los cambios tautoméricos.

Emparejamiento de bases entre 5-bromouracilo y (a) adenina o

(b) guanina.
29
Incorporación Incorporación
en forma enol en forma ceto

Causa Causa
transiciones transiciones
G:C→ A:T A:T→ G:C

Resultando
transiciones
A:T <-> G:C

30
 Mecanismo de acción del Ácido nitroso (HNO2)
Causa desaminación oxidativa de los grupos amino en adenina,
guanina y citosina, convirtiéndolos a grupos ceto y cambia el
potencial del puente de hidrógeno.

Causa transiciones A:T→ G:C

31
 Resultando
Causa transiciones G:C→ A:T transiciones
A:T <-> G:C

No es mutagénico debido a que xantina al igual que “G” se une con

citosina. 32
33
Un análogo de adenina es 2-Aminopurina la cual en su forma estable se
une a timina (a) y cuando se protona se une con citosina (b).

34
 Mecanismo de acción del Etilmetanosulfonato (EMS) y
Nitrosoguanidina (NTG).
Transferencia de los grupos metil o etil a las bases nitrogenadas, dando como
resultado potenciales de emparejamiento de bases alterados.

Causa
transiciones

35
 Mecanismo de acción de la Hidroxilamina (NH2OH)

Cuando el DNA es tratado con hidroxilamina, el grupo amino de la

citosina es hidroxilado ( grupo hidroxiamino).

Causa únicamente transiciones G:C→ A:T

36
 Mecanismo de acción de 2,8- Diaminoacridina (Proflavin)

Las moléculas de acridina con carga positiva se intercalan entre los

pares de bases del DNA y provocan cambios en el marco de
lectura provocados por inserciones o deleciones.

ICR- 170

37
Inserción

Deleción

Mutagénesis de desalineación causada por la intercalación de una

molécula de acridina (Freidelfer, 1987., p. 231). 38
Mutación causada por agentes
biológicos

39
 Mecanismo de acción de los elementos genéticos
transponibles

La inserción de un transposón hacia un gen de tipo salvaje provocará que el gen

sea no funcional. 40
 Reversión verdadera

Mutante que ha revertido a su

genotipo de la cepa silvestre.

Supresión intragénica
Reversión Reversión no
verdadera ( por Mutación dentro del mismo
Segunda mutación gen en donde se originó la
generada para supresión)
primer mutación.
restaurar el
Reversión al fenotipo Supresión intergénica
genotipo y/o
fenotipo. de la cepa silvestre por
una mutación en un Mutación en un gen distinto
gen. al que ocasionó la primer
mutación.

41
Métodos para aislar mutantes

42
Réplica de placas

Réplica de placas para aislar mutantes auxótrofas. 43

Enriquecimiento de penicilina para mutante auxótrofo

Detección de mutantes usando enriquecimiento de penicilina.

44
Referencias

1.- Griffiths et al, (2015). Introduction to Genetics Analysis, USA. Ed. W. H.

FREEMAN & COMPANY.

2.- Freidelfer, A. et al, 1987. Microbial Genetics. Ed. Jones and Bartlett
Publishers. Inc. Boston.

3.- Malling. H. V. 1966. Hydroxylamine as a mutagenic for Neurospora

crassa. pags. 470-746.

4.- Espinosa, A. L., et al, 2018. Experimentos en Genética Microbiana.

Ciudad de México. Ed. Alicia Espinoza Lara. pags. 12-18.

45