7. UNIT.

Azido nukleikoen
klonazioa
Miriam Aguado
 Unitate didaktikoaren eskema
7.1. Klonazio molekularreko metodoak

7.2. Klonazioaren osagaiak

7.3. Klonazio prozesuaren faseak

7.4. DNA bankuak

7.5. Klonazio molekularraren aplikazioak

 7.1. KLONAZIO MOLEKULARREKO METODOAK
Klonazio molekularra,izatez, DNA genomiko edo DNAo
sekuentziak in vivo anplifikatzeko prozesu bat da, DNA
birkonbinatuaren teknologian oinarritzen dena.

Klonazio prozesua
 7.1. KLONAZIO MOLEKULARREKO METODOAK
Klonazio prozesuaren abantailak

1. Intereseko sekuentziaren kantitate mugagabeak eskuratzeko

aukera ematen du.
2. Tamaina handiko sekuentziak klona daitezke.
3. Banku genomikoen sorkuntza.
4. Proteinak, hormonak… produzitzen dira.
 7.2. KLONAZIOAREN OSAGAIAK
7.2.1. Klonazio bektoreak

- Klonazio bektoreak zelula ostalari batean era autonomoan

erreplika daitezkeen DNA molekulak dira; gainera,
erreplikazio autonomorako gaitasuna galdu gabe, DNA arrotza
sartzen uzten dute.
- Ezaugarriak:
- Erreplikazio iturburu bat
- DNA arrotza sartzeko leku bat
- Hautapen markatzailea
- Identifikazio markatzailea
7.2. KLONAZIOAREN OSAGAIAK
FAGOAK
PLASMIDOAK (bakteriofagoak)

BEKTORE MOTAK KOSMIDOAK

KROMOSOMA
FAGEMIDOAK ARTIFIZIALAK

Anezka bektoreak
 7.2. KLONAZIOAREN OSAGAIAK
7.2.2. Zelula ostalariak

Zelula ostalariak klonazio bektorea sartzen zaien zelulak dira, erreplikazio

bidezko anplifikazioa egiteko.

- ZELULA OSTALARI PROKARIOTAK (bakterioak)

- ZELULA OSTALARI EUKARIOTAK
- Legamiak
- Landare eta animalia zelulak
 7.3. KLONAZIO PROZESUAREN FASEAK
I. FASEA: bektore birkonbinatu bat sortzea

II. FASEA: zelula ostalarian bektore birkonbinatu bat

txertatzea

III. FASEA: intereseko sekuentzia daramaten klonak hautatu

eta identifikatzea
 7.3. KLONAZIO PROZESUAREN FASEAK
I. FASEA: bektore birkonbinatu bat sortzea

Bektore birkonbinatu bat da DNA arrotzaren txertaketa bat

daukana.

- Klonatu beharreko DNA prestatzea

- Klonazio bektorea prestatzea
- DNA arrotza bektorean txertatzea (LIGASA)
 7.3. KLONAZIO PROZESUAREN FASEAK
II. FASEA: zelula ostalarian bektore birkonbinatu bat sartzea

-Eraldaketa bakterianoa: bakterio batek kanpo ingurunean dauden DNA molekula

biluziak bereganatu eta barneratzea.

-Transfekzioa: zelula eukariotetan zenbait bektore birkonbinatu sartzea,

tartean birusik egon gabe.

-Transdukzioa: birusaren eraginez zelula batean material genetiko arrotza

sartzea.

-Elektroporazioa: goi tentsioko pultsu elektriko laburrak aplikatzea zelula

ostalari esekien eta disoluzioko bektore birkonbinatuen nahaste bati.
 7.3. KLONAZIO PROZESUAREN FASEAK
III. FASEA: intereseko sekuentzia daramaten klonak hautatu
eta identifikatzea

- Antibiotikoekiko erresistentzia geneak

- Estrategia kromogenikoa
- Proteina fluoreszenteak
- Gene letalak

ERALDAKETA TASA UFC.Vt

C. Vs
 7.4. DNA BANKUAK
ADN BANKUA: bektore birkonbinatu klonatuen bilduma bat da,
zeintzuen DNA arrotzaren sekuentziak organismo bakar batetik
eskuratu diren.

7.4.1. DNA BANKUEN MOTAK

- Banku genomikoak
- Banku kromosomikoak
- DNAo BANKUAK
 7.4. DNA BANKUAK
DNA BANKU BATEN ANALISIA

1. Klon baten identifikazioa

2. Paseo kromosomikoa
3. Sekuentziazioa
 7.5. Klonazio molekularraren aplikazioak
IKERKETA APLIKATUA

- Proteina birkonbinatuak
- GMO
- Sagu transgenikoak
- Terapia genikoa