Cromatografía en columna
Metanol
Sílice
Introducir con ayuda de un embudo, unos mililitros de
fase móvil suficiente para eliminar el aire del algodón,
presionando éste con una varilla, terminada ésta
acción, llenar la columna con la fase móvil.
Preparar una mezcla espesa de sílice con eluyente
suficiente para obtener una suspensión y verterla a la
columna; simultáneamente, permitir la salida de la fase
móvil y empacar la columna hasta la altura que se
desee, procurando tener un nivel más alto que la fase
móvil.
Adicionar inmediatamente después de empacar la
columna, sulfato de sodio anhidro en cantidad
suficiente que cubra una altura de 0.5-1.0 cm
aproximadamente por arriba del sílice, verificar que el
eluyente cubra ambos sistemas.
Disolver la mínima cantidad de la fase móvil
justamente cuando la muestra problema e introducirla
a la columna mediante una pipeta Pasteur. Procurar
que, al momento de la adición, exista la cantidad
mínima de eluyente, de sulfato de sodio anhidro y que
se adicione en el centro de la columna sin que llegue a
adherirse a las paredes de la columna.
Continuar con las indicaciones del Tonsil Actisil FF.
Cloroformo
Seleccionar el sistema de
Sulfato de sodio anhidro
elución adecuado,
mediante la forma descrita
en la técnica de CCF
Montar una columna cromatográfica sujetándola con
unas pinzas de tres dedos en un soporte universal, y
colocar un trozo pequeño en el cuello de algodón de la Tonsil Actisil FF
salida con ayuda de una varilla.
Introducir a la columna el Tonsil Actisil FF con ayuda de
un embudo hasta ocupar ¾ partes de ésta, procurando
una suficiente compresión , ayudándose de succión
mediante la línea de vacío.
Eligió empacar la
columna con sílice
Añadir sulfato de sodio anhidro en cantidad suficiente
o usó el Tonsil que cubra una altura de 0.5-1.0 cm aproximadamente
Actisil FF
por arriba del Tonsil Actisil FF.
Introducir a la columna mediante una pipeta Pasteur,
la muestra problema disuelta a la mínima cantidad de
fase móvil, dejando que ésta descienda por la columna,
con las precauciones señaladas en el penúltimo cuadro
de sílice.
Adicionar fase móvil justamente cuando la muestra
problema se encuentre por debajo del nivel superior
del sulfato de sodio anhidro para que ésta sea eludida
a través de la columna. Procurar que la parte superior
de la columna siempre contenga fase móvil hasta
terminar de recolectar las fracciones, evitando con
esto la formación de burbujas de aire o grietas a lo
largo de la columna.
Recolectar las fracciones en recipientes adecuados