UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

CULTIVO IN VITRO

ASIGNATURA:
BIOTECNOLOGIA
DOCENTE:
ING. MS. NANCY PÁRRAGA
MELGAREJO
INTEGRANTES:
AMARO TRINIDAD CHRIS
HUAMAN ESPINOZA WINDON
PECEROZ SAUÑI ANTONELA
ZURITA VALDEZ YADIRA
 CULTIVO IN
VITRO

Conjunto de técnicas que permiten el

mantenimiento y/o crecimiento de células
o tejidos en un medio nutritivo y en
condiciones ambientales controladas.

El cultivo se desarrolla en condiciones de

temperatura, humedad, fotoperiodos e
irrigacion controlados

Los cultivos in vitro permiten obviar

los inconvenientes derivados de
condiciones geograficas, climaticas y
de tiempos de produccion.
Cada fragmento origina
una planta idéntica a
aquella de donde se tomó
el fragmento, aunque,
también puede ser
modificada
genéticamente para
tener variedades
artificiales (Mroginski
et al., 2010).

La célula retiene
toda la información
para
regenerar una
planta completa
 MICROPROPAGACIÓN (Multiplicación
masiva de plantas para especies de difícil  La micropropagación in vitro, en un
propagación por otros métodos). proceso donde a partir de un fragmento
 Rescate de especies en vías de extinción. (explante) de una planta madre, se
 Producción de plantas libres de obtiene una descendencia uniforme, con
enfermedades. plantas genéticamente idénticas,
 Germinación de semillas. denominadas clones.
 Generación de variabilidad en mejora  La micropropagación in vitro, utilizados
genética (incluyendo la obtención de plantas para obtener plantas asexualmente en
transgénicas). forma rápida, eficiente, libres de
 Selección, cruzamiento, control de enfermedades y en grandes cantidades.
enfermedades y producción en masa de  El explante más usado para los procesos
cultivos de cosecha e involucra diferentes de propagación in vitro son las yemas
plantas en agricultura, horticultura, forestales vegetativas de las plantas.
y frutales.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO DE
CELULAS Y TEJIDOS VEGETALES
 MEDIO DE CULTIVO.

La micropropagación de especies exige el uso de medios de cultivo más o

menos complejos que están compuestos por macro y micronutrientes,
aminoácidos y vitaminas, fitohormonas o reguladores de crecimiento,
compuestos orgánicos complejos, carbohidratos y eventualmente un
gelificante.

a. Macronutrimentes: Los
elementos más utilizados son
principalmente N, P, K, Ca, Mg y S.
b. Micronutrimentes: Para una
adecuada actividad metabólica, las
células vegetales requieren de Fe,
Mn, Zn, B, Cu, Co y Mo. Los últimos
cinco elementos son fundamentales
para la síntesis de clorofila y la
función de cloroplastos
VITAMINAS: son necesarias para AMINOÁCIDOS: Son una fuente
llevar a cabo una serie de adicional de nitrógeno, su
reacciones catalíticas del asimilación puede ser más rápida
metabolismo. B1, B2, B6,vitamina que el nitrógeno inorgánico
H, vitamina E, A cido aportado el medio, pueden actuar
(folico,nicotinico,etc). como agentes quelantes.

CARBOHIDRATOS: Son utilizados AGUA: El agua para preparar

como fuente de energía y osmo- medios de cultivo deberá ser
reguladores. La sacarosa es el destilada. el agua potable contiene
azúcar empleado comunmemnte,. sales en solución que pueden
La concentración a la que se modicar la respuesta de los tejidos
emplea la sacarosa es de 20 a 45 en cultivo.
g.l-1.

HORMONAS DEL DESARROLLO VEGETAL: AGENTES GELIFICANTES: son

Existen tres grupos principales:
a) Auxinas: vinculadas al alargamiento celular,
inducción de callo, neoformación de meristemos
radicales. (AIA, AIB, 2,4D y ANA). b) Citocininas:
promueven la división celular y organización y
diferenciación de callos, estimulan la proliferación.
c) Giberel: promueven el alargamiento celular,
además de utilizar ácido abscísico, poliaminas
gelificadas comúnmente con Agar, el cual
forma un complejo coloidal con débil poder
de retención iónica. Se utiliza agar-agar en
concentraciones de 6-8 g/L, Gelrite en
concentraciones de 1,5-3 g/L y otros
gelificantes alternativos.
CONDICIONES AMBIENTALES DE CULTIVO

pH:
El medio de cultivo, debe presentar entre 5.2 y 5.8. se puede ajustar el pH final,
añadiendo NaOH 0.1N, para obtener un pH de 5.8. Los valores bajos, inferiores
a 3.5 impiden la solidificación de los agentes gelificantes añadidos a los
medios sólidos, si la evolución del pH del medio lo hace bajar por debajo de 3.5
se puede producir su licuación.

El valor del pH puede afectar a la solubilidad de algunos componentes del

medio de cultivo, la absorción de determinados nutrientes por parte del explanto
(p.e. la absorción de iones NO3 aumenta con la acidez del medio), al pH del
citoplasma y como consecuencia a la actividad de enzimas
TEMPERATURA:
La temperatura a la que está expuesto el explante cultivado in vitro afecta a la mayoría de los
procesos fisiológicos y por lo tanto es un factor fundamental que se debe controlar. Cada
especie tiene un intervalo de temperaturas en el que se produce el crecimiento óptimo (20ºC-
28ºC). Este intervalo puede variar de acuerdo con el genotipo, tipo de explante, época del año,
edad de la planta madre, fotoperiodo, etc.

LUZ Y FOTOPERIODO:
El ciclo de luz oscuridad generalmente es de 16/8 horas. La luz es uno de los factores
determinantes del desarrollo de los organismos autótrofos, por ello es importante controlar el
factor luz en los cultivos in vitro. La luz proporciona la energía para la fotosíntesis. Las
necesidades de luz in vitro son menores que in vivo, dado que el medio de cultivo tiene cantidades
importantes de sacarosa, los cultivos in vitro se portan parcialmente como autótrofos

HUMEDAD:

La humedad relativa debe estar entre 80% y 90%.

EQUIPO NECESARIO PARA EL CULTIVO IN VITRO

Cámara de flujo laminnar

Autoclave

Es donde se "esteriliza" Es donde se realizan todas las

todo lo que vamos a manipulaciones con la planta. Es un
utilizar: agua, algunos habitáculo con un operario en un ambiente
nutrientes, material, etc. estéril. Se usan rayos ultravioletas para
No se pueden meter esterilizar el aire.
proteínas.

Planta Cámara de cultivo

El material vegetal recomendada La cámara de cultivo es una habitación de

utilizar son brotes que crecen en dimensiones muy variables, en la que se
condiciones controlada para que controlan las condiciones de luz, temperatura,
halla menos infecciones. humedad, variación día-noche, etc.
LA ORGANOGÉNESIS DIRECTA: La
multiplicación de brotes provenientes de
yemas axilares, terminales o laterales. El
tejido usado como inicial es meristemático.

En la yema apical se encuentran un grupo de

células que conforman el meristema apical
(tiene un tamaño entre 0,01 y 0,3 mm), tejido
embrionario que tiene la capacidad de formar
todos los tejidos de la planta. A partir de ellos
se pueden regenerar plantas completas.

Las aplicaciones del cultivo de meristemas es

la obtención de plantas libres de virus, ya que
esta pequeña zona de tejido generalmente no es
afectada por estos patógenos vegetales. Y la
multiplicación vegetal. un ejemplo: a partir de
una yema apical, se pueden obtener 4.000.000
de claveles en un año.
 LA ORGANOGÉNESIS INDIRECTA. En
este caso la formación del brote adventicio o
de la raíz ocurre en el callo; éste ha derivado
inicialmente de un órgano, tejido u otra
parte escindida de la planta. El tejido usado
como inicial es parenquimático.
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA.

Los embriones pueden formarse directamente en el explante

primario, o indirectamente de células cultivadas en suspensión o en
un medio líquido.

una técnica que permite obtener embrioides a partir de células

somáticas desde cualquier tipo de tejido. Como en este proceso no
hay fusión de gametos, no hay combinación genética, por lo tanto el
embrioide obtenido es idéntico al árbol donador de tejidos. Hay una
clonación ciento por ciento del individuo de donde se obtuvo el
material
 Las etapas
multiplicació
n; puede ser
aplicada a
diferentes
1.Selección especies
y
Preparación vegetales, en
de la planta cada caso se
6.Aclimat
madre podrán
acion
incluir
simplificacio
nes o
2.Desinfecc cambios de
ión de las acuerdo a las
yemas de la
característic
planta y/o
desinfección 4. 5. as de las
3.Introducc Multiplicac Enraizami
de semillas plantas.
ión del
ión de ento
material
seleccionad brotes
o in vitro
MODALIDADES DE CULTIVO IN
VITRO
EL CULTIVO DE MERISTEMAS
En la yema apical se encuentran un grupo de células que conforman el meristema apical
(tiene un tamaño entre 0,01 y 0,3 mm), tejido embrionario que tiene la capacidad de formar
todos los tejidos de la planta. A partir de ellos se pueden regenerar plantas completas.
El cultivo de meristemas tiene numerosas aplicaciones. Una de las más importantes es la
obtención de plantas libres de virus, ya que esta pequeña zona de tejido generalmente no es
afectada por estos patógenos vegetales. Otra muy importante es la multiplicación vegetal. La
potencialidad de la técnica se demuestra con un ejemplo: a partir de una yema apical, se
pueden obtener 4.000.000 de claveles en un año. La técnica permite también multiplicar
especies de plantas con reproducción lenta o dificultosa (como las orquídeas), o acelerar la
producción de plantas bianuales.
 EL CULTIVO DE YEMAS
YEMA se conoce como yema a
alguna parte de la planta capaz
de brotar y crecer.
YEMA TERMINAL la yema terminal es
aquella parte final de una rama que crece o
puede crecer, generalmente constituida por un
cúmulo de hojas pequeñas y en crecimiento
YEMA AXILAR O LATERAL Las yemas
laterales o axilares son generalmente pequeñas
protuberancias a los lados de las ramas que
tienen la capacidad de brotar, pero que pueden
estar en estado latente (sin brote o retoño).Es
muy común que cuando se corte la yema
terminal de una rama, las yemas laterales
broten y empiecen a crecer.

MULTIPLICACIÓN La multiplicación de brotes de

yemas es una producción a partir de partes de la planta
en la cual se utilizan tejidos vegetales que conserven la
potencialidad de multiplicación y diferenciación celular
para generar nuevos tallos y raíces a partir de cúmulos
celulares presentes en algunos órganos. Una de las
formas de multiplicación ocurre cuando el extremo libre
de un tallo largo alcanza el suelo, y la yema de
crecimiento da lugar a un tallo erecto, lo que se conoce
como acodadura.
CULTIVO DE ANTERAS
El cultivo de anteras (CA)es una técnica por medio de la cual es posible producir
líneas homocigotas a partir de poblaciones segregantes,mediante el doblamiento
cromosómico del polen haploide y la regeneración de plantas en un ciclo de cultivo in
vitro. En contraste por los métodos estándar de fitomejoramiento normalmente se
requieren seis generaciones de autofecundación para alcanzar la completa
homocigosis en plantas autogamas.

DESARROLLO DEL
CULTIVO DE
ANTERAS
Se desarrolla en dos
etapas principales :
* Inducción de
microcallos
* Regeneración de
plantas
CULTIVO DE ANTERAS
El cultivo de embriones es la excisión aséptica de un embrión inmaduro de un
óvulo y su posterior cultivo in vitro en un medio nutritivo apropiado. Los
embriones híbridos que resultan de cruzas entre especies con parentesco lejano
suelen ser débiles e incapaces de sobrevivir a causa de la inadecuada nutrición
por el endospermo. Dichos embriones pueden abortar o disminuir de volumen
poco después de que se ha formado el cigoto y no llegan a formar semillas
viables. Muchas veces, es posible salvar estos embriones inmaduros y lograr que
crezcan, germinen y desarrollen en plántulas mediante técnicas de cultivo de
embriones.

Cultivo de embriones.
A) Proembrión separado de tres a cinco días después de la polinización.
B) Proembrión cultivado en agar sólido.
C) Desarrollo de la plántula a partir del embrión.
D) Plántula trasplantada en suelo.