PESO MOLECULAR

PROMEDIO
CENTRIFUGAL o Z
• Es el peso molecular medio que menos se utiliza, otras formas de llamarlo son;
Medida z del peso molecular o peso molecular promedio centrifugal. Este último
hace alusión al método usual por el cual se determina.
• Matemáticamente se expresa como sigue
• Los métodos por los cuales se determina son la ultra centrifugación y la fotometría
de dispersión de la luz. En el primero, una solución diluida de un polímero se
centrifuga y eventualmente se establecerá un equilibrio termodinámico donde las
moléculas se distribuyen según su tamaño molecular. Dado las potencias a las cuales
están elevados los Mi , Mz es altamente sensible a cambios en el número de las
especies de mayor tamaño.
• La muestra homogeneizada ahora esta lista para la centrifugación en una ultracentrifugadora. Una
ultracentrifugadora consiste en una cámara al vacío y refrigerada que contiene un rotor, el cual es
manejado por un motor eléctrico capaz de girar a alta velocidad. Las muestras son ubicadas en tubos que
se encuentran dentro del rotor o sujetos a este. La velocidad rotacional puede alcanzar más de 100.000
rpm para el modelo “floor”, 150.000 rpm para el modelo “bench-top” (Beckman Optima Max-XP),
generando fuerzas centrífugas entre 800.000g y 1.000.000g. Esta fuerza causa la sedimentación de
macromoléculas e incluso puede causar una distribución no uniforme de moléculas pequeñas. Como los
diferentes fragmentos de la célula tienen diferentes tamaños y densidades, cada fragmento se va a depositar
en un precipitado con diferentes fuerzas centrífugas mínimas Cada vez, una porción de diferente densidad
es precipitada a la parte inferior del tubo y es extraída. Algunos pasos adicionales pueden realizarse para
refinar aún más cada uno de los precipitados obtenidos. La sedimentación depende de la masa, la forma y
el volumen específico parcial de una macromolécula, así como también de la densidad del solvente, el
tamaño del rotor y la tasa de rotación. La velocidad de sedimentación puede ser monitoreada durante el
experimento para calcular la masa molecular, así como el coeficiente de sedimentación. Valores grandes de
S (mayor tasa de sedimentación) corresponden a un mayor peso molecular. Partículas más densas se
sedimentan a mayor velocidad. Las proteínas largas tienen mayores coeficientes de fricción y se sedimentan
más lentamente para asegurar mayor precisión.
La tasa de sedimentación de partículas en suspensión en virtud de la gravedad acción es muy pequeña. Sin embargo,
se puede aumentar considerablemente mediante la aplicación de la técnica desarrollada por ultracentrifugación de
Svedberg. A la sedimentación de partículas en un campo centrífugo se somete a una aceleración dada por 𝑤 2 𝑥 dónde
𝑤 es la velocidad angular de la centrífuga (dada por 2 π x número de revoluciones por segundo) y 𝑥 es la distancia de
la es la distancia de la es la distancia de la es la distancia de la es la distancia de la es la distancia de la es la distancia de
la es la distancia de la partícula desde el eje de rotación. La tasa de sedimentación puede, por lo tanto, puede aumentar
considerablemente por el aumento del número de revoluciones por segundo. En algunos de los ultracentrífugas, el
número de revoluciones es tan alta como 1.000 por segundo.
Si la partícula está en una distancia de 10 cm desde el eje de rotación (es decir, x = 10 cm), la aceleración en el campo
centrífugo sería 3.94 x 10^8 cm por sec^2 . Esto es casi 400.000 veces mayor que la aceleración debido a la gravedad
normal, que es solamente 2 981cm por seg.
Cuando una solución de polímero se coloca en la célula de una ultracentrífuga, las moléculas de polímero
tienden a distribuirse durante de rotación perpendicular al eje de rotación a lo largo de la célula es de acuerdo
con su masa molar individual. En algún fuerza constante, las moléculas más grandes se mueven rápidamente
hacia la periferia, las moléculas más grandes que se encontraron más cercano a la periferia, en el equilibrio. Si un
fuerte haz de luz que pasa paralelo al eje de rotación y perpendicular al eje de la célula, se utiliza para medir el
índice de refracción, a continuación, la concentración de la solución de polímero cualquier sección dada se
puede medir. Esto permite la determinación de la velocidad del movimiento molecular hacia la periferia, en el
equilibrio. La técnica de ultracentrifugación para la técnica para la determinación de la masa molar de un
polímero puede implicar (a) El método de velocidad de sedimentación (b) Metodo de equilibrio de
sedimentación.
Si bien el primer método produce el peso moleciular en numero promedio, el segundo método proporciona el
peso molecular promedio en peso
En el método de sedimentación de equilibrio, la velocidad del rotor es más baja (aproximadamente 10.000
rpm) que en el método de la velocidad de sedimentación, donde la velocidad del rotor del orden de 60000
rpm. Cuando se alcanza un equilibrio entre la sedimentación y la difusión, hay un flujo neto. Ahora, de
acuerdo con la ley de difusión de Fick, la velocidad de difusión, es decir, el número de partículas de soluto
que cruzan un plano vertical por segundo, desde una concentración más alta a una concentración más baja,
es directamente proporcional al área de la sección transversal, A y el gradiente de concentración dc / dr es
decir,

Donde D es el coeficiente de diusividad y se asume un Area = 1

El signo negativo en la ec. 33 se ha omitido ya que el gradiente de concentración aumenta al aumentar el valor de r.
De la ecuación de Nernst-Einstein D = kT/f

A partir de la ecuación. la tasa de sedimentación de la solución de polímero

está dada por
Dado que, en equilibrio, la velocidad de difusión es igual a la velocidad de sedimentación, tenemos de las
ecuaciones

Cancelando f desde ambos lados de la ec. y

Donde w es la velocidad angular del rotor (en radianes 𝑠 −1 ); ρ es la densidad de la solución 1. c1 es la

concentración en la distancia r1 y c2 es la concentración en la distancia r2 del eje. La relación de concentración (c1
/ c2) se determina por medición fotométrica. A diferencia del método de velocidad de sedimentación, este método
no requiere un conocimiento previo de la forma de la macromolécula o su coeficiente de difusión. Por lo tanto, es
uno de los mejores métodos para la determinación de masas molares de polímeros. Sin embargo, el método de
sedimentación de equilibrio requiere mucho tiempo (hasta varios días o semanas) para completarse.
Si los datos se procesan en función del incremento de la refracción η la diferencia entre los
índices de refracción de la solución y el disolvente dan como resultado el peso
molecular promedio en z