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(Fig.1)
Definiciones
El tiempo térmico letal (el tiempo más
corto que lleva destruir los microorga-
nismos a una temperatura
determinada) y el punto térmico letal
(la temperatura más baja que se
necesita para matar a los organismos
en 10 minutos) son frecuentemente
citados, pero a menos que sean
conocidos el tamaño inicial de la pobla-
ción y las condiciones precisas, no son
particularmente útiles.
Un parámetro más útil es el tiempo de
reducción decimal o valor D, tiempo (en
minutos, a una temperatura
determinada) que se requiere para
reducir la población viable al 10 % de
su valor previo.
Fig. 2: Curvas de superviviencia de Bacillus subtilis MD2 tratado con calor húmedo a
105°C y crecido en agar con extracto de triptona y glucosa, expresada como fracción de
supervivientes a fin de mostrar el número de extrapolación (3,0), el valor D (0,55 min) y el
tiempo de hombro x (15 s).
Fig. 3: Curva del tiempo térmico letal de esporas de B. subtilis tratadas con calor húmedo,
el valor Z es de 11 º C.
El valor-Z es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un
factor de 10
Cinética de muerte
Bajo condiciones letales, los organismos de una población no mueren sincróni-
camente. Estadísticamente la inactivación durante un período finito (es decir a
medida que la dosis letal aumenta) es proporcional al número de células viables
al principio del período, es decir, la población muere exponencialmente. Por
tanto una gráfica del logaritmo del número de supervivientes a cualquier tiempo
(dosis) durante el tratamiento contra el tiempo transcurrido de tratamiento
(dosis), producirá una línea recta (Fig. 1). Cuando el descenso logarítmico es
constante desde el tiempo cero, como en la (Fig. 1), la curva es una forma de
cinética de «choque único» (es decir, una lesión irreversible es suficiente para
matar a una célula) y se describe mediante la ecuación:
N/No=e-kd
Donde:
No: población inicial
N: número de supervivientes después de la dosis o tiempo de tratamiento
d: dosis o tiempo de tratamiento
k: velocidad constante de muerte específica.
No todas las poblaciones exhiben cinética de «choque único» y la (Fig. 2)
muestra una curva con un hombro antes del comienzo de la inactivación
logarítmica. Cuando se encuentra un hombro, las cinéticas de supervivencia
son de la forma:
N/No = 1- (1- e-kd) n
Donde:
n: es un número de extrapolación igual a la intersección sobre el eje N/No que
da el número de «choques» requeridos para la letalidad
O bien existe un requerimiento de choques múltiples para letalidad o
alternativamente, cada «unidad» viable puede consistir en varias células o
esporas diferentes y la in activación de la unidad no se observa hasta que cada
componente sea inactivado. (En la práctica también se encuentran curvas de
supervivientes no lineales).
El valor D también se obtiene por interpolación como el tiempo transcurrido
durante cualquier unidad de reducción logarítmica de los supervivientes sobre
la parte recta de la gráfica, como se muestra en la (Fig .2). Cuando los
logaritmos de los valores D a diferentes temperaturas se trazan frente a la
temperatura, se encuentra que la relación es generalmente una línea recta de
la cual puede ser obtenido directamente el valor z por interpolación (Fig. 3).
Mientras los valores D son muy dependientes de las condiciones, tanto de
tratamiento como de recuperación (Fig. 1), los valores z son bastante menos
dependientes de estos factores (Fig. 3). Los valores z pueden ser importantes
para determinar los límites de un proceso ya que los materiales pueden ser
incapaces de soportar ciertas temperaturas. Sin embargo, los valores z no
pueden ser verdaderamente constantes a lo largo de un amplio rango de
temperatura, ya que por debajo de una temperatura particular no ocurrirá
ningún daño y el valor D sería infinito.
Determinación de las condiciones de esterilización
La dosis de esterilización requerida dependerá del nivel inicial de
contaminación. Para una población que exhiba curvas de «choque único» (Fig. 1)
a varias temperaturas o dosis de radiación, para cualquier número de esporas
en la población.
Inicialmente el cálculo de las condiciones del proceso que se requieren para
cualquier grado de probabilidad de éxito en la esterilización se realiza
fácilmente. Por ejemplo para una población contaminante de 108 organismos, la
aplicación de 8 valores D de tiempo de procesamiento a una temperatura
determinada reduciría el logaritmo del número de supervivientes a cero, es
decir, a un organismo, y asumiendo un descenso logarítmico continuo en la
población, un valor D adicional de tiempo de procesamiento representaría la
probabilidad de 1 en 10 de encontrar un superviviente, es decir, de no
esterilizar.
Unidad de letalidad
Para comparar las capacidades relativas de esterilización de los diferentes
procesos de calentamiento se requiere de una unidad de letalidad. La unidad
escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento a la temperatura de
121 °C. La letalidad relativa puede ser expresada en términos de valores F
basados en la relación:
F= t x 1O (T-121)/z
donde:
t: tiempo de aplicación del tratamiento letal
T: temperatura en ° C
z: aumento de temperatura requerido para reducir el período de
calentamiento en un 90 % (es decir el valor z).
En el caso modelo t = 1 minuto de calentamiento y T = 121 ° C de forma que F
= 1. En casos prácticos, donde la resistencia relativa de los organismos a
diferentes temperaturas varía, se emplea el valor z de los contaminantes más
resistentes a la temperatura. Las esporas más resistentes al calor que se
encuentran normalmente, tienen un valor z de 10 ° C y este valor se utiliza si
no se pueden llevar a cabo experimentos específicos. Utilizando z = 10 el valor
patrón de F se denomina F0 a la temperatura de 121 °C.
Tiempo de tratamiento y Ciclo de tiempo
(19)
donde:
(20)
puesto que:
Efecto de diferentes
tipos de flujo (valores de
Nº de PeB diferentes)
sobre la destrucción de
los microorganismos
(N/N0) a velocidades
diferentes de
destrucción (medidas
como Nr = k L / u
Se define un grado de
esterilidad, N / N0 que
se grafica vs Nr (k L/u) ,
que está de acuerdo con
la ecuación (20),
PeB (uL / Ez)
Cuando el nº de PeB tiende a infinito (flujo pistón ideal), las condiciones son
más favorables para diseñar esterilizadores continuos, ya que es posible
reducir la longitud de la tubería requerida para producir un cierto grado de
esterilidad para una masa de medio determinada.
El tiempo requerido para partículas microbianas en un esterilizador continuo
para alcanzar la T de esterilización, después de la inyección de vapor es del
orden de microsegundos para partículas de algunos micrones de tamaño.
El tiempo de respuesta se define como: 0.632 (TH – T0), donde TH es la T de la
fuente de calor, y T0 es la T del medio, será del orden de seg para sólidos de
algunos mm de tamaño.
Por lo tanto es importante que el medio sea clarificado antes de entrar a un
sistema de esterilización continua.
Ez : coeficiente de dispersión axial
n : nº de esporos
Χ: x / L
x: dirección axial
L: longitud de la tubería del reactor, m
n: n / n0
n0 : concentración a la entrada
PeB: Nº de Péclet = u L / Ez
u: velocidad promedio del fluído a través de la tubería, m/hr , m/seg
Nr: k L / u adimensional
t = L / u tiempo de mantenimiento nominal
Esterilización por radiaciones
La esterilización por radiaciones se lleva normalmente a cabo con una fuente de
cobalto-60 o de cesio-137. En cualquier caso deben aplicarse precauciones de
seguridad muy estrictas y tales instalaciones son encontradas rara vez en los
laboratorios normales.
La longitud de onda más corta (de alta energía) de los rayos X los hace
altamente penetrantes.
Las células vegetati vas son menos resistentes que las esporas bacterianas, pero
se encuentran variaciones considerables en los niveles de resistencia,
dependiendo de la eficiencia de los sistemas de reparación.
La atmósfera anoxigénica y la baja humedad relativa protegen contra la
radiación, siendo el efecto letal siempre más grande en presencia de oxígeno y
de alto contenido en agua.
Como con la esterilización química los efectos sobre los medios de cultivo son
complejos y difíciles de controlar y los cambios pueden continuar después de
que la irradiación ha sido completada.
Esterilización química
El formaldehído es efectivo solamente si puede garantizarse que entre en
contacto con los organismos contaminantes. Tiene una difusibilidad y un poder
de penetración muy pobres y un olor picante y duradero; solamente puede
usarse en circunstancias especiales.
El peróxido de hidrógeno ha encontrado un uso creciente en la industria
alimentaria. Es un poderoso agente oxidante, que mata células vegetativas y
esporas con actividad creciente con la concentración, temperatura y pH.
Tiene la ventaja de que sus últimos productos de degradación, agua y oxígeno,
son inofensivos y se utiliza a concentraciones entre 10-25 % w/v en la
esterilización de la leche y de los recipientes utilizados para los productos
alimenticios.
El óxido de etileno (punto de ebullición 10,7 °C) y el óxido de propileno (punto
de ebullición 33,9 °C) se usan en forma gaseosa en instalaciones apropiadas. El
óxido de etileno es mucho más efectivo pero es altamente tóxico, irritante y
explosivo en mezclas con aire. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la
humedad; las condiciones óptimas incluyen 40-80 % de humedad relativa y una
temperatura de 60°C durante 3-4 h para una concentración de gas de 800-1.000
mg / 1. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser dañado por
temperaturas altas .
Esterilización por filtración (aire)
La filtración difiere de otros métodos de esterilización en el hecho de que los
microorganismos no mueren, sino que son eliminados físicamente. El filtro
debe ser esterilizado por algún otro procedimiento antes de que pueda ser
utilizado para esterilizar un líquido o un gas.
Existen dos tipos fundamentales: (a) filtros profundos y (b) filtros de
pantalla.
(a) Los filtros profundos están hechos de materiales fibrosos o en polvo,
presionados o unidos, en una capa relativamente gruesa a fin de formar una
trama de canales interconectados de tamaño variable. Están fabricados de
fibra de vidrio, algodón, lana mineral, celulosa o fibra de asbestos y
moldeados como planchas, tapones, pilas o cilindros dependiendo del diseño.
Durante su uso las partículas penetran dentro del filtro y son atrapadas
como resultado de un conjunto de factores que incluye la intercepción
directa por las fibras, el impacto inercial, el movimiento Browniano, la
convención y efectos electrostáticos.
La eficiencia del filtro está relacionada en términos generales con la
profundidad del lecho.
La proporción de las partículas que pasan a través de una profundidad
determinada del filtro, está dada por la relación siguiente:
N / N0 = e – K x
Donde:
No : concentración de partículas que entran en el filtro
N : concentración de partículas que pasan a través de una profundidad
determinada de filtro
x : profundidad del filtro
K : constante que dependerá de muchos factores como el tamaño de las
partículas, el diámetro de las fibras, la porosidad, etc.
Esta ecuación, en forma similar a la que describe la cinética de muerte, permite
el cálculo de la profundidad de filtro necesaria para retener las partículas para
cualquier probabilidad de fallo que se desee.
Cuanto más grueso es el lecho del filtro, es más eficiente, pero también es mayor
la resistencia a fluir, medida por ∆P, la caída de presión que causa.
La (Fig. 6) muestra la dependencia de la penetración y de la caída de presión en
filtros de fibra de vidrio respecto de la velocidad de flujo del aire.
Fig. 6: Relación entre la penetración del cloruro sódico y el flujo del aire y entre
la velocidad de flujo y la caída de presión para filtros Microflow.
Los diseños modernos de filtros profundos consisten en cilindros hechos de
microfibras unidas de borosilicato, en los que las capas aumentan en finura y
densidad de adentro hacia afuera, de forma que el área de mayor filtración está
en las capas del filtro de las etapas finales, y el cilindro entero está encamisado
en una malla de polipropileno que lo refuerza.
Las graduaciones se dan hasta un 98 % de captura (nominal) a 0,1 μm que en
montajes apropiados permite velocidades de flujo de agua tan altas como
6.0001- 1 a 0,4 bar (5,5 p.s.i.) ∆P . Las eficiencias y las velocidades de filtración
de los gases son mucho más altas y se pueden obtener fácilmente diseños que
suministren más de 3 m3 s - 1 a 0,1 bar ∆P (a partir de un suministro de 7 bar).
La eficiencia de filtración del gas disminuye fuertemente si se condensa líquido
sobre el filtro, aumentando la resistencia y permitiendo que existan «canales»
de forma que los organismos «crezcan a través» del lecho del filtro originando
una contaminación más abajo en la línea.
Frecuentemente se requieren suministros muy altos de aire estéril ya que una
fermentación aeróbica puede requerir 1 volumen de aire (volumen de líquido)-1
min - 1 de forma que un reactor de 30.000 galones puede consumir casi 200.000
m3 de aire por día.
Los filtros de pantalla (filtros absolutos) se basan en un principio sencillo de
tamización. Son membranas hechas de ésteres de celulosa u otros polímeros
que tienen poros más o menos rectilíneos, de diámetro bastante uniforme, que
excluyen las partículas contaminantes atrapándolas sobre la superficie del
filtro.
Puesto que las bacterias contaminantes más pequeñas tienen
aproximadamente 0,5 μm o más de diámetro, un filtro de membrana de 0,45
μm de tamaño de poro eliminará las bacterias (pero no los virus).
Para conseguir velocidades de flujo altas se necesita una gran superficie de
membrana y debe darse a las membranas un apoyo rígido para que soporten las
presiones utilizadas.
Las unidades modernas de filtros de aire consiguen ambos propósitos
construyendo las membranas dentro de cilindros sobre un soporte rígido
central, tal como el polipropileno, que tiene ranuras para permitir el paso del
aire filtrado al núcleo central.
La membrana está normalmente protegida además por una malla de material
sobre la cual, en su capa más externa, existe otra malla de polipropileno
encamisada en un prefiltro de microfibra de vidrio y nylon. Cualquiera que sea
el tipo de filtro usado, debe ser esterilizado y muchos están diseñados para ser
esterilizados directamente (en línea) ya sea con vapor de agua o con óxido de
etileno.
Las unidades pequeñas para suministro de aire estéril a un fermentador de
laboratorio pueden ser esterilizadas in situ.
Los filtros son también utilizados para esterilizar los gases emitidos por los
fermentadores que contenen microorganismos en aerosol. En los cultivos de
virus patógenos las partículas que escapan pueden ser tan pequeñas como de
0,05 μm de diámetro.
En general debe recordarse que las partículas con un diámetro inferior a 5 μm
de diámetro penetran fácilmente en los pulmones y que la mayor parte de los
organismos patógenos son considerablemente más infecciosos por inhalación
que por ingestión.
Evaluación de la eficiencia de esterilización
• Termosensores con cartas registradoras asociadas permitirán la valoración
fiable de un proceso térmico de acuerdo con los principios indicados
anteriormente para la obtención de los valores F totales. Este es el método de
elección para procesos en gran escala.
• Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados conteniendo 0,15 ml de un fluido
rojo que cambiará gradualmente a verde a medida que la dosis de calor
aumente. Son útiles para comprobar los procesos de calor húmedo y seco y dan
una indicación precisa de los tratamientos tiempo-temperatura recomendados
clínicamente que se han listado con anterioridad.
• Tiras de papel impregnadas de esporas. Estas son bioindicadores para los
métodos de calentamiento, químicos o por radiaciones. Tiras de papel de filtro
impregnadas con aproximadamente 105 esporas de Bacillus stearothermophilus
para calor humedo y de Bacillus subtilis var niger para tratamientos por calor
seco. Para comprobar el crecimiento de supervivientes después del tratamiento,
se incuban las primeras a 55 º C durante 5-7 días en caldo de triptona, glucosa y
extracto de levadura y las segundas a 37 º C. La indicación de la esterilidad es
retrospectiva. Existen también varios tipos de ampollas con esporas.
• Tiras indicadoras Termalog S. Estos dispositivos responden al calor húmedo
en el rango de 115-123 º C, indicándose la dosis de calor por la distancia de
migración (en mm) de un colorante azul.
Cinta adhesiva de autoclave. Indica que el vapor, a un mínimo de 120 °C, ha
alcanzado la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. No da una
seguridad de esterilidad sino que simplemente indica que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.
Pruebas de eficiencia de filtración
• Prueba del azul de metileno. Descripta en el British Standard 2831 la nube de
prueba tiene una distribución de tamaño de partícula de 0,02-2 μm y 99 % de
las partículas están por debajo de 0,6 μm de diámetro.
•Prueba del cloruro sódico. Descripta en el British Standard 3928 la
distribución del tamaño de partícula de la nube de prueba es similar a la de la
nube de azul de metileno. Para que haya esterilización, el filtro debe tener una
prueba de eficiencia de sodio del 99,997 % o mayor, es decir, una penetración de
menos de 0,003 % de NaCl a la máxima velocidad de flujo permitida por el
diseño.
• Esporas de Bacillus. Una prueba diseñada en MRE (ahora CAMR), Porton,
que utiliza esporas monodispersas de B. subtilis (rango de tamaño 0,7 a 1,0 μm)
inyectadas en la corriente de aire suministrada al filtro y a partir de las cuentas
obtenidas se calcula el valor del porcentaje de eficiencia.
•Prueba del bacteriófago D. La nube de la prueba son bacteriófagos
monodispersos (0,03 μm) y las muestras se recogen por precipitación mediante
impacto electrostático, se cuentan por la formación de placas de fago y se
calcula el porcentaje de penetración. Un filtro con una penetración de llama de
sodio de 0,001 % tiene un equivalente de penetración de esporas de B. subtilis
de aproximadamente 5 10 -6 % y una penetración de T3 de 5 10 -5 %.
Esterilización de Reactores
Los líquidos, usualmente acuosos, pueden ser esterilizados por medios diversos,
incluyendo radiación (ultravioleta, rayos x), ultrasonido, filtración,
calentamiento, y adición de químicos. Solamente los dos últimos se usan
ampliamente en procesos de gran escala. Pequeñas cantidades de líquidos que
contienen vitaminas y otras moléculas complejas a veces se esterilizan
pasándolas a través de membranas porosas.
Nosotros nos vamos a dedicar al diseño de procesos de tratamiento con calor.
Los requisitos para la destrucción de microorganismos viables y virus varían,
dependiendo ampliamente del material y de su uso posterior. Ej: en la
fabricación de la chucrut y en tratamiento de aguas de desecho biológico, la
presencia de los microorganismos es necesaria para las reacciones deseadas.
Inhibidores para el crecimiento de organismos no deseados desarrollan
rápidamente en el alcohol, vinagre, y producción del forraje conservado en silos,
por lo tanto aquí, los requisitos de la esterilización no son extremos. La
pasteurización de leche involucra la muerte de la mayoría, pero no de todos los
microbios que crecen activamente.
Se debe evitar la destrucción de compuestos útiles y eliminar los
microorganismos indeseables en el diseño de un equipo de esterilización y
pasteurización.
Las fermentaciones de cultivos puros, de cultivos de tejidos , y algunos
productos alimenticios requieren medidas más severas de esterilización.
Esencialmente toda vida microbiana deben ser eliminada , aunque el grado de
"perfección" también varía un poco.
Por ejemplo, se pueden indicar consideraciones económicas: una probabilidad
de contaminación [1 - Po en la ecuación 1 – P0 (t) = 1 – e -Nt] de 10-2 es aceptable
para un proceso de fermentación batch. En este caso nosotros esperaríamos 1 la
pérdida de un lote por cada 100 debido a la contaminación.
Los requisitos mucho más severos se dan en la industria del enlatando. Una
sola espora superviviente de Clostridium botulinum puede causar una
contaminación letal, tal que se requiere la eliminación completa de los mismos.
Típicamente, un criterio de diseño especifica que la probabilidad de
supervivencia de una espora (1 – P0 ) debe reducirse al menos a 10 – 12.
(2)
(1)
N0: nº de organismos viables iniciales en el fluído a ser esterilizado
En un modelo estocástico kd puede interpretarse como la recíproca del tiempo
de vida media del organismo.
A medida que el nº de organismos cae a valores bajos, la suposición de una
población uniforme que se pueda caracterizar por un valor de kd simple
comienza a fallar.
Mientras un nº considerable de organismos supervivientes son aceptables en
algunas aplicaciones (en leche pasteurizada debe ser < 30000 células / ml), se
debe aplicar requerimientos más severos en la mayoría de las fermentaciones
de cultivos puros.
En estos casos es importante examinar la probabilidad de extinsión, ej: la
probabilidad de que todos los organismos sean inactivados.
Para N = 0 en la ecuación (1) se obtiene la probabilidad de extinsión:
En el gráfico siguiente de la
destrucción térmica de S.
aureus en un buffer neutro
fosfato, se observan las
desviaciones positivas de las
distribución al azar
resultantes de la ecuación
(1), sugiriendo que una
fracción menor de la
población es más resistente a
la muerte térmica que la
inmensa mayoría.
La probabilidad de que al menos un microorganismo sobreviva es:
donde:
donde:
k es un factor de normalización
Considerando que:
(2)
El valor máximo de Pr para una distribución life span se calcula a partir de las
ecuaciones (1 y 2) por el método de Lagrange.
Como N0 es grande, se obtiene:
α´ y β´ son constantes empíricas
(3)
Si los valores de Ni y ti son continuos más que discretos, la ecuación (3) se
modifica según:
(4)
(5) (6)
(7)
De las ecuaciones (4 y 7):
(8)
Integrando:
(9)
(10)
(11)
Luego:
(12)
(13)
De la ecuación (14):
(15)
Para valores grandes de n (n> = 10), el lado derecho de la ecuación (15) puede
aproximarse a:
γ es la constante de Euler (s / M)
n: nº de esporos
s: flujo de masa del vapor en kg / seg, kg / min, kg / hr
M: masa inicial del medio en una esterilización batch, kg
Un ejemplo de cálculo de la
distribución de life span y
valor promedio de t ,
usando las ecuaciones (13 y
14), con un valor de k = 1
min -1 , se ontiene el
gráfico siguiente:
f(t) n vs t , k = 1 min -1
El valor promedio tn en la life span de aglomerados bacterianos aumenta
apreciablemente con la adición de esporos únicos, n, al aglomerado.
(16)
Para N0 >> 1:
(17)
donde:
Usando la ecuación
(17) se puede graficar
(1 – P) vs kt para N0
distintos.
De la ec (17) se ve que
aumentando kt , la
probabilidad de una
esterilización no
exitosa, (1 – P) coincide
con el nº de esporos
viables, N, se expresa
por la reacción de 1º
orden (N = N0 e – kt).
Por otra parte , la
correlación (1 – P) vs
kt , se desvía de la
ecuación de 1º orden, a
medida que el término
1 – P se aproxima a 1.
Generalmente la velocidad de muerte de los esporos bacterianos a una dada T se
miden graficando N ó N / N0 vs tiempo. Esta expresión se puede comparar con la
carta de supervivencia extrapolando hacia (1 – P) = 1 , se observa un desacuerdo
entre la carta de supervivencia con el gráfico (1 –P) vs kt, este último se llama
carta de esterilización.
Los primeros investigadores usaban una extrapolación de la carta de
supervivencia cerca de valores de N>= 1, para estimar el tiempo requerido para
una esterilización específica, pero se debe incluir también el concepto de
probabilidad.
Hay que establecer el valor de N0 como un criterio severo para alcanzar el grado
de esterilización.
En la industria de la fermentación se usa el punto de muerte térmica (tdp),
tiempo de muerte térmica (tdt), y velocidad de muerte térmica (tdr) para
comprobar la esterilidad.
El tdp determina el punto de muerte térmica de una suspensión de esporos
bacterianos que se exponen al calor durante un período de tiempo finito, lo más
común es usar tdt para medir la longitud del tiempo requerido para inactivar
una suspensión de esporos a una temperatura dada.
Datos experimentales ya sea de tdp ó tdt se usan para las curvas de
esterilización de la Fig. anterior.
Esterilización Batch de Medios
Integrando:
(18)
donde:
∆ total es el criterio de diseño
Los valores de T absoluta, T, son funciones del tiempo de exposición, t. En
el diseño de esterilizadores batch, aplicando la ecuación (18) se puede
determinar t.
Debe tenerse en cuenta que algunos de los microorganismos
contaminantes serán inactivados durante el tiempo requerido de al
calentamiento (t1), y enfriamiento (t3) del volumen de medio.
La ecuación (18) la puedo subdividir en:
donde:
N: nivel de esterilidad (nº de microorganismos contaminantes después de la
esterilización)
N0: nivel de contaminación (nº de microorganismos contaminantes antes de la
esterilización)
N1: nº de microorganismos contaminantes después del período de
calentamiento, t1
N2: nº de microorganismos contaminantes después del período de
mantenimiento, t2
Supongamos que disponemos del perfil de tiempo y temperatura (Tabla) ,
entonces es posible calcular ∆ para el calentamiento y el enfriamiento, como la
solución analítica es tediosa se recurre a una solución gráfica:
k en min -1 y temperatura en º C vs tiempo en min
Bibliografía
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• Aiba Suichi, Humphrey Arthur E, Millis Nancy M. “Biochemical Engineering”
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