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PURIFICACION DE PRODUCTOS
BIOTECNOLOGICOS
INDUSTRIALES
Microbiología industrial
I.- PRODUCTOS Y SERVICIOS DE LA
MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
•Los bioprocesos generan muchos productos útiles que
pueden tener uso comercial.
•Estos difieren mucho unos de otros, pero también tienen en
común que son productos biológicos, generalmente
degradables
•Agroquímicos.
•La producción de insecticidas biológicos, por: Bacillus
thuringiensis y el Bacillus popilliae.
4. Depuración de residuos.
•Aguas residuales. Se tratan biológicamente, para
eliminar la materia orgánica disuelta, por metabolismo
oxidativo.
•- Residuos sólidos. Procesos de digestión anaerobia, que
reduce el volumen de los residuos, convirtiéndolos a biogás:
CH4 y CO2.
•- Xenobióticos. (Producidos solo por síntesis química),
como los fenoles que pueden degradarse por
cometabolismo.
Construçáo
do vetor Lise
0 Celular
Seleçáo
de cepa
Etapas de
Purificaçáo
Otimizaçáo
do meio
Bioproduto
III.- SEPARACION DEL PRODUCTO
•Existen diversos requerimientos de separación.
•En algunos casos los productos industriales son utilizados
sin requerir purificación alguna, como en la producción de
yogurt.
•En las aplicaciones ambientales como el tratamiento de
aguas residuales y la degradación de residuos solidos,
el producto es ya un efluente purificado.
•Shock osmótico,
congelamiento/descongel
amiento, descompresión,
termólisis,
•Shock osmótico.
•Se produce cuando las
células son sometidas a
medios hipertónicos ó
hipotónicos
•Las células con pared
celular, son mas difíciles
de romper.
Congelamiento/descongelamiento
•Los cristales de hielo que se forman y crecen durante el
congelamiento, si se desarrollan en el citoplasma,
rompen la membrana celular de eucariotas.
•La congelación lenta es mas efectiva que la rápida.
b.3.- Métodos enzimáticos.
•Disrupción enzimática.
•Es un método muy preciso pero requiere una clara
comprensión de la estructura de la pared celular de las
células que se quiere lisar.
•La principal limitación del método es el costo
•Ejemplo: enzima Lisozima (muramidasa)
•Autolisis:
•Método en el cual las células inducen su propia
disrupción, por que se producen señales que inducen la
liberación de enzimas que degradan los organelos y
membranas celulares.
•Es un método lento.
•Se inducen mutaciones en la célula, introduciendo genes
que codifican antibióticos o enzimas que degradan sus
propios organelos y membrana celular
5.2.1.2.- Medida de la Eficiencia de la
disrupción
•Metodos directos
•Se cuenta las células destruidas y las intactas, por
recuento en cámara, recuento en placa.
•Metodos indirectos.
•Determinación del grado de liberación de un metabolito al
medio externo.
5.2.2.- ETAPAS EN LA SEPARACION DE
METABOLITOS
–Separación solido-liquido. Filtración y centrifugación
–Ruptura celular.
–Separación de restos celulares: filtración y
centrifugación.
–Concentración: los métodos dependen de: la
concentración del metabolito, y su solubilidad.
– Purificación del producto: Se busca separar las
impurezas mas abundantes y eliminar la mayor cantidad
de agua.
5.2.2.1.- Concentración del producto.
•Separación de compuestos insolubles.
•Existen técnicas basadas en diferentes principios, ya sean
el tamaño, la carga, el peso.
–a. Sedimentación: es el método más fácil y barato. Si el
producto es estable, se deja sedimentar en el propio
fermentador, pero puede requerir tiempos, de 24 a 48 horas.
–b. Floculación: Las partículas sedimentan si son mayores a
3 μm, caso contrario se añade un floculante, provocando que
aumenten de tamaño y sedimenten. Si lo que sedimenta es
residuo no hay problema, pero si es el producto llevará el
floculante, pudiendo contaminar.
–c. Filtración: es un método efectivo, pero requiere equipos y
gasto de energía.
–d. Centrifugación: es un proceso más rápido que la
sedimentación, pero es de mayor costo por los aparatos que
usa y los gastos de energía.
Separación de compuestos solubles
•Ventajas:
•1. Operación que se adapta
fácilmente a gran escala
•1. Puede realizase en
forma continua
•2. El equipo que se utiliza
es sencillo
•3. Se dispone de diversos
agentes precipitantes: sales,
isoeléctrica, con solventes.
Precipitación salina (Salting-out)
•En altas concentraciones
salinas (o alta fuerza iónica)
algunos solutos como proteínas
ó polímeros precipitan debido al
aumento de las interacciones
hidrofóbicas entre ellos.
•La concentración salina y el
tipo de sal requerida para la
precipitación varían con el
soluto.
•
•Mecanismo: La adición de
sales elimina el agua de la
proteína hidratada, dejando las
regiones hidrofóbicas en
libertad de combinarse
intermolecularmente y presipitar
Ecuación de la precipitación con sales
•Log S = A−m[Sal]
•Donde: S = Solubilidad de la proteína a un valor dado de
concentración salina.
•A = Constante que depende la proteína, del pH y la temperatura.
(toma un valor mínimo en el punto isoeléctrico)
•m = Pendiente de la curva de solubilización por salado. Ésta es
independiente del pH y la temperatura, pero varía con el tipo de
sal y de proteína.
•Las sales con aniones polivalentes como sulfatos y fosfatos
tienen m mayores que las sales univalentes, y los cationes
polivalentes como calcio y magnesio disminuyen el valor de m
•Naturaleza de la sal:
•Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series de
Hofmeister):
•Mecanismo
•Las proteínas por su
naturaleza anfotérica
presentan una carga neta
negativa a pH altos y una
carga neta positiva a pH
bajos.
•En el pH isoeléctrico, la
carga neta de la proteína es
cero.
•A este pH la repulsión entre
moléculas es mínima y se
produce agregación.
Precipitación con solventes
•Constantes dieléctricas a 20 oC
•Disminución de la solubilidad
por adición de un solvente
orgánico ligeramente polar
•Mecanismo
•El agua se caracteriza por su
alta constante dieléctrica, lo cual
significa que los iones en
solución acuosa presentan
interacciones débiles entre si.
•Un solvente orgánico (etanol o
acetona), tienen menor •logS= logSo + K/D2S
constante dieléctrica que la del •S = Solubilidad de la proteína
agua, lo cual produce una •DS = Constante dieléctrica de la
disminución en la solubilidad de mezcla solvente-agua.
ésta. •K = Constante dieléctrica
original del medio acuoso.
•So = Es la solubilidad
extrapolada
b.- Técnicas de membrana.
•(microfiltración, ultrafiltración, y
osmosis inversa).
•a.1.- Ultrafiltración (o filtración de
flujo cruzado)
•Se usa en la separación de células,
restos celulares o proteínas.
•La desventaja principal es el
ensuciamiento de la membrana.
Aplicación:
-Clarificación de jarabe de maíz
como dextrosa y fructosa
-Concentración del agua de
lavado de almidón
- Enriquecimiento de dextrosa
a.2.- Osmosis inversa (RO)
•Osmosis. Proceso natural •R.O. Se revierte el flujo de
mediante el cual moléculas de moléculas de agua a través de la
membrana semipermeable, como
agua fluyen a través de una
resultado de aplicar presión a la
membrana semipermeable, solución de mayor concentración.
desde una solución de baja •Es posible obtener agua pura a
concentración a otra de mayor partir de una solución de alta
concentración. concentración.
Algunas aplicaciones
•Industria Azucarera
•La industria de azúcar, adiciona cal y floculan, para clarificar el
jugo y remover impurezas como ceras, dextrinas y gomas, previo
al refinamiento del jugo para su evaporación y cristalización.
•La filtración por membranas puede clarificar el jugo natural,
eliminando el uso de químicos y mejorando la calidad y el
rendimiento del jugo.