de aplicación en especies de propagación sexual con semillas recalcitrantes y en especies de propagación vegetativa Utilización de temperaturas ultra bajas como nitrógeno liquido (NL), que alcanza los - 196ºc, cuya ventaja es que el material sea conservado por muy largos periodos de tiempo, eliminando los riesgos y desventajas de otros métodos. *Pre-tratamiento o aclimatación: su objetivo es maximizar la tolerancia natural de las especies y del FASES explante a una condición baja de temperatura, previo al congelamiento. *Crioprotección: utilización de agentes protectores químicos. Las sustancias mayormente utilizadas han sido el DMSO (5 a 10%) y glicerina (5 a 20%). En otros casos mezclas como PEG 10%, glucosa 8% y DMSO 10% en caña de azúcar y arroz. Congelamiento: -C. rápido en NL y congelarlo lo más rápido a 500- 1000ªC/min para evitar la formación de cristales intracelular. -C. lento: A velocidad de 0.1 – 3ªC/min hasta alcanzar una temperatura que oscila de -25 a - 40ªC, luego se transfiere a NL. -C. escalonado: someter sucesivamente a varias temperaturas por debajo de 0ªC y mantenerlas en cada una de ellas durante cierto tiempo antes de transferirlas a NL *Almacenaje: almacenaje en NL (-196ªC). *Descongelamiento: de -196ªC pase directamente a 37ªC, por medio de baño en agua a 40ªC en periodo de 1 a 2 minutos de duración. INTERCAMBIO DE GERMOPLASMA
Transferencia del material genético de una región
geográfica para otro, dentro de un país o entre países.
cultivo de meristemos, ápices caulinares y nudos, mejor forma
de intercambio de germoplasma, por estabilidad citogenética de estructuras vegetales.
Ventaja: es la reducción y minimización de los riesgos de
transferir plagas y enfermedades de insectos.
Desventajas: deterioro de la planta in vitro cuando resulta prolongado el periodo de transferencia, específicamente por dificultades aduaneras, autorización fitosanitarias, etc.