Vous êtes sur la page 1sur 59

Pontificia Universidad Católica de Chile

Facultad de Ciencias Biológicas

Enzimas

Dra. Paulina Bull


2013
Por qué estudiamos las enzimas?

En la boca tenemos:
• Ptialina o amilasa salival
Polisacárido a monosacárido
• Lisozima
Mata bacterias
• Bacterias presentes en la boca:

– Streptococcus sanguis.
– Streptococcus acidophilus.
– Actinomyces viscosus

Cuando se come limón, el pH ácido rompe el


esmalte, facilitando la formación de caries.
TEMARIO
• Generalidades
• Sitio activo
• Catálisis enzimática
• Efecto de variables en una reacción enzimática
in vitro
• Cinética enzimática
• Efecto de Inhibidores
• Enzimas alostéricas
CONCEPTOS GENERALES
ENZIMAS
• Actúan en pequeña cantidad y se recuperan
indefinidamente
• Son catalizadores específicos: cada enzima
cataliza un solo tipo de reacción
• Llevan a cabo reacciones energéticamente
favorables, solamente aceleran las reacciones que
espontáneamente podrían producirse.
• La gran mayoría son proteínas
COFACTORES
SITIO ACTIVO
ESTRUCTURA PRIMARIA DE
LA QUIMOTRIPSINA
UNIÓN DE SUSTRATO A LA
QUIMOTRIPSINA

Sustrato: rojo en el sitio activo


ESTRUCTURA TERCIARIA DE
LA QUIMOTRIPSINA

Serina 195
Histidina 57
Aspártico 102

Puentes S-S:
amarillo
Sitio activo: rojo
Cadena polipeptídica como cinta
ESTRUCTURA DEL SITIO ACTIVO DE
LA QUIMOTRIPSINA
SITIO ACTIVO
Cavidad donde se ubica el
sustrato y donde se produce
la catálisis
Formas complementarias de un sustrato
y su sitio de unión de una E

Dihidrofolato
reductasa

Rojo: sustrato NADP


Amarillo: sustrato tetrahidrofolato
HEXOKINASA

Glucosa + ATP glucosa-6- fosfato + ADP

Rojo glucosa
Hexokinasa sin
sustrato
Hexokinasa con
sustrato
La enzima se une específicamente a sus sustratos,
formando un complejo enzima-sustrato y favoreciendo su
transformación en productos
REACCION ENZIMATICA

k1 k2
E + S ES E+P
k-1
VELOCIDAD DE UNA REACCION

La mayoría de los procesos bioquímicos son reversibles


k1
[A] [B]
k-1

k1 y k-1 son constantes de velocidad de 1°


orden directa e inversa y que se relacionan en
una constante de equilibrio Keq
Constante
Catalítica
Seg-1
CATÁLISIS ENZIMÁTICA
DIAGRAMA DE UNA REACCIÓN NO CATALIZADA

Progreso de la reacción de S Producto


ESTADO DE TRANSICIÓN
PODER CATALÍTICO

• Grupos funcionales catalíticos de los enzimas


interactúan transitoriamente con el sustrato,
activándolo para la reacción.

– Puentes de hidrógeno
Optimas
– Interacciones iónicas en Estado de
transición
– Interacciones hidrofóbicas
– Fuerzas de van der Waals
Primera etapa de la reacción de la quimotripsina

His57
VARIABLES EN UNA REACCIÓN
ENZIMÁTICA
Concentración
Enzima

pH

Concentraciónde
Concentración
sustrato
sustrato

Temperatura
EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA

Curva de progreso

Concentración de S
saturada, pH y t°
constante
La velocidad es mayor al aumentar la
concentración de sustrato

Pero la velocidad no aumenta


indefinidamente; cuando no hay más
enzima libre toda está completamente
saturada con sustrato, se forma el complejo
enzima-sustrato (ES)
EFECTO DE LA TEMPERATURA
En general, los aumentos de temperatura aceleran
las reacciones químicas
EFECTO DEL pH
Los enzimas poseen grupos químicos ionizables
(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos
CINETICA ENZIMATICA
(in vitro)
ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN
CURVA DE SATURACION de 1 SUSTRATO

KM es característica de
cada reacción

Tiene unidades de
concentración

KM=[S] cuando
V= ½ Vmax

HIPERBOLA
Fórmula de Michaelis Menten

Vo Velocidad inicial
V máx Velocidad Máxima
Km Constante de Michaelis
S Concentración de susptrato
DETERMINACION DE LOS PARAMETROS CINETICOS
Gráfico de Lineweaver- Burk

Pendiente

Intercepto
de las Y

Intercepto
de las X
Fórmula de Lineweaver- Burk

Vo Velocidad inicial
V máx Velocidad Máxima
Km Constante de Michaelis
S Concentración de susptrato
EFECTO DE INHIBIDORES
INHIBIDOR COMPETITIVO
Cambia Km pero no Vmax

Curva de saturación

Dobles recíprocos
INHIBICIÓN COMPETITIVA

Tanto sustrato como inhibidor se unen al mismo sitio


INHIBIDOR INCOMPETITIVO
Cambia Km y Vmax

Dobles recíprocos
INHIBICIÓN INCOMPETITIVA

El sustrato se une a un sitio, y el inhibidor, a otro


ENZIMAS REGULATORIAS o
ALOSTERICAS
SUBUNIDADES DE UNA ENZIMA REGULATORIA

C) Subunidad catalítica

R) Subunidad regulatoria
Gráfico de velocidad versus concentración de
Sustrato de una enzima regulatoria
Gráfico de velocidad versus concentración de
sustrato de una enzima regulatoria

+: modulador positivo - : Modulador negativo


Activador alostérico: Inhibidor alostérico:
favorece la unión del impide la unión del
sustrato sustrato
Inhibición por
Retroalimentación
o
FEEDBACK
MODIFICACIÓN QUÍMICA DE LAS ENZIMAS

Fosforilación Tyr, Ser, Thr, His

Adenililación Tyr

Uridililación Tyr

ADP-ribosilación Arg, Gln, Cys

Metilación Glu
REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA
GLICÓGENO FOSFORILASA

Modificación covalente
La enzima no La enzima
Elementos de la
fosforilada es fosforilada es
reacción
inactiva activa
ACTIVACION DE ZIMOGENOS

A, B y C están unidos por puentes S-S