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UNIVERSIDAD ANDINA

¨NESTOR CACERES VELASQUEZ¨


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CAP. FARMACIA Y BIOQUIMICA
Curso: Microbiologia
TEMA: Moraxella
DOCENTE: Fredy Catacora Yucra

INTEGRANTES:
APARICIO LLACSA, JOSE CARLOS
MONJE ARAUJO,LADIMIR
MAMANI SUCACAHUA, JEFERSON E.
Moraxella
INTRODUCCIÓN

Moraxella es un género de bacterias Gram negativas


con forma de bacilo corto, cocobacilo o, como en el
caso de Moraxella catarrhalis, cocos asociados en
parejas (diplococos), o incluso en pequeñas cadenas.
La mayoría de estos microorganismos son inmóviles,
no esporulados, con características oxidasa-positiva
y catalasa-positiva, con morfología semejante a las
especies de la familia Neisseriaceae. Unos son
hemolíticos y algunas especies son capsuladas,
aerobios aunque algunos pueden ser anaerobios
facultativos y no son muy hábiles para fermentar
Su hábitat es el ambiente en general, pero son más
abundantes en la región nasofaríngea de algunos
animales, como los bovinos. Estos microorganismos no
son muy exigentes, pero muestran una mejoría en su
crecimiento en agar sangre y más si les agregamos
suero, además, vemos una hemólisis en el agar.

Es causante de infecciones en el tracto respiratorio


superior de niños y ancianos, e infecciones del tracto
respiratorio inferior en adultos con enfermedad
pulmonar obstructiva crónica (EPOC), siendo también
asociada con mayor frecuencia a enfermedades que
incluyen otitis media aguda sinusitis aguda, uretritis
aguda, conjuntivitis en neonatos.

Actualmente, es aceptado como el tercer patógeno más


importante en el tracto respiratorio humano después de
Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae
HISTORIA
El nombre Moraxella fue dado en honor a Victor Morax, un
oftalmólogo suizo quien fue el primero en describir el
género. Catarrhalis es derivado de katarrhein,
palabra griega que originalmente significaba 'escurrir',
describiendo el flujo profuso de nariz y ojos asociado
típicamente con inflamación severa en resfriados.
TAXONOMÍA
En el género Moraxella podemos identificar cuatro
especies:

 M. catarrhalis
 M. caviae
 M. bovis
 M. cuniculi
Factores de virulencia
 LOS (Lípido A)
 Peptidoglucano
 Proteínas de la membrana externa.
 Fimbrias.
 Cápsula.
 Proteínas reguladores del hierro.
 Resistencia al complemento.
ENFERMEDADES QUE PRODUCE
Principales especies y patologías
Moraxella catarrhalis usualmente reside en las vías
respiratorias, pero puede acceder al aparato respiratorio
en pacientes con trastornos pulmonares crónicos o
inmunodeficientes, ocasionando traqueo bronquitis
neumonía.
Moraxella lacunata es una de las causas de blefaro-
conjuntivitis en los humanos.
Moraxella bovis es la causa de una enfermedad
característica en la conjuntiva de los bovinos, provocando
queratoconjuntivitis, llamada comúnmente la enfermedad
del "ojo rosa", en otras partes del cuerpo, este
microorganismo es saprófito.
Clínicamente estas bacterias son
conocidas por causar:
 otitis media (inflamación del oído medio)
 sinusitis (inflamación de los senos paranasales)
 conjuntivitis en neonatos (inflamación de la
conjuntiva ocular)
 bronconeumonía (enfermedad pulmonar)
 bronquitis (inflamación de los bronquios)
 laringitis (inflamación de la laringe)
 queratinitis (inflamación de la queratina)
 uretritis (inflamación de la uretra)
En pacientes ancianos fumadores pesados
crónicos con EPOC la M. catarrhalis está asociada
con bronconeumonía, también como
exacerbaciones del EPOC (enfermedad productiva
obstructiva crónica) subyacente.

La frecuencia más alta de colonización por M.


catarrhalis parece ocurrir aproximadamente a los 2
años de edad, con una sorprendente diferencia en
las tasas de colonización entre niños y adultos
(muy alta a muy baja)
En cuanto a la bronquitis y la bronconeumonía
son más frecuentes en ancianos y en pacientes
con enfermedades pulmonares crónicas,
mientras que la sinusitis y otitis ocurren
fundamentalmente en personas previamente
sanas. Además, puede dar lugar a
enfermedades sistémicas como bacteremia,
sepsis, endocarditis, meningitis e infección
urinaria.
SIGNOS Y SINTOMAS
Los síntomas que se presentan para esta
bacteria van a depender de la enfermedad
que produzca. Algunos síntomas son: tos
persistente, rinorrea purulenta, rinorrea
serosa, secreción faríngea, otorrea y
expectoración purulenta, algunas veces
abundante. En los casos en que aparece
fiebre, ésta es baja, siendo rara la
aparición de dolor pleurítico
EPIDEMIOLOGÍA
La colonización por M. Catarrhalis se
establece a edades muy tempranas y
disminuye paulatinamente hacia la edad
adulta, siendo mayor la colonización en niños
con infección respiratoria aguda (IRA) de 1 a
47 meses en contraste con niños sin IRA.

Los pacientes con enfermedades pulmonar


obstructiva crónica (EPOC) tienen mayor
riesgo de presentar la bacteria, siendo los
mayores de 60 años más susceptibles a la
infección.
Pese a que generalmente no se le considera
un agente primario en las infecciones del tracto
respiratorio inferior, esto cambia al referirse a
individuos mayores de 50 años, donde es
considerado un patógeno primario de vías
respiratorias bajas. Se puede decir que es un
agente oportunista que se aprovecha de las
condiciones predisponentes del huésped para
causar enfermedad y formar parte de los
patógenos humanos emergentes.
En hombres y mujeres la tasa de infección es
equivalente y la transmisión se da por contacto
directo a través de las secreciones respiratorias.

La prevalencia de la M. Catarrhalis se ve afectada


según la estación del año.

- Invierno 47 %
- Verano 23 %
- Otoño 15 %
- Primavera 15 %
DIAGNÓSTICO
 La identificación de M. catarrhalis a partir de
muestras clínicas puede realizarse por su
aspecto en la tinción de Gram,
 características de crecimiento
 pruebas bioquímicas
Los criterios más usados para su
identificación son los siguientes:

 Ausencia de pigmentación en agar sangre


(no hemolítica).
 Producción de oxidasa y catalasa.
 Producción de DNAasa.
 Hidrólisis de la tributirina. completar
 Ausencia de producción de ácido a partir
de glucosa, maltosa, sacarosa y fructosa.
 Reducción de nitratos y nitritos.
Recolección y transporte de la
muestra

 No se requiere consideraciones
especiales para la recolección y el
transporte de las muestras.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

 Se observan diplococos gram negativos.


 Se observan polimorfonucleares
fagocitando dichas bacterias
Método de detección directa
Tinción de Gram
fundamento:

Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram


negativas se presentan morfológicamente como cocos o
bacilos, sin embargo al ejecutar tinción de Gram en estas para
identificar su grupo taxonómico, las Gram positivas se tiñen de
color violeta mientras que las Gram negativas se tiñen de color
rosado. Mediante la tinción de Gram se identifican bacterias
Gram positivas y Gram negativas gracias al color que tornan
después de ser teñidas; en el caso de las bacterias Gram
positivas se tiñen de violeta, esto se debe a que gracias a que
contienen una pared gruesa de peptidoglicano y gran cantidad
de ácidos, y además son resistentes a la decoloración. Lo
contrario ocurre con el caso de las Gram negativas, las cuales
poseen una pared delgada con menos cantidad
de peptidoglicano y lípidos, la cual requiere de un colorante de
contratincion como la safranina o la fucsina en este caso, ya
que el colorante inicial es fácilmente retirado en la decoloración
con alcohol, debido a que por su delgada pared celular no lo
retienen.
La tinción de Gram permite conocer la
morfología celular, el tamaño, la forma y
su clasificación taxonómica (Gram
positivos o Gram negativos) de acuerdo
al color que tornan las bacterias
después de la tinción, sin embargo
no permite conocer la especie o género
de la bacteria al cual pertenece.
Técnica:
 Realizar la preparación de frotis => extender 1 gota de
agua destilada estéril + una colonia de la bacteria
problema por la superficie de la portaobjeto
 Fijación por el calor, pero no quemar las bacterias
 Aplicar el colorante cristal violeta durante 1,5 minuto o
violeta de genciana durante 2 minutos
 Lavar abundantemente con agua para eliminar el exceso
de colorante
 Añadir un mordiente, el lugol durante 1 minuto (solución
iodoiodura de potasio con OH de 96º o con acetona a 5/1
o con OH 50%)
 Vuelve a lavar con agua el exceso
 Decolorar con solución decolorante (alcohol 90º)
 Lavar abundantemente con agua
 Cubrir el portaobjetos con la safranina durante 1 minuto
 Lavar con agua para arrastrar los restos de colorantes y
dejar secar al aire
 Observar con objetivo de inmersión (100x).
Tincion de gram de moraxella
Se utiliza la tinción de Gram y pueden
tener el aspecto de cocobacilos o de
bacilos gruesos y cortos que tienden a
resistir la decoloración y pueden parecer
Gram positivos. Por lo que es necesario
proceder al cultivo.
La tinción de Gram de un esputo
significativo con un predominio de
diplococos gramnegativos es altamente
predictiva de la presencia de M.
catarrhalis en la muestra
CULTIVOS
Esta bacteria crece en 24-48 h en
medios comunes, como agar sangre y
agar chocolate, formando colonias
redondas, opacas, convexas, y de color
gris
Para el diagnostico se cultivan muestras
de Esputo, Sangre, Secreciones
bronquiales, Aspirado transtraqueal,
Lavado broncoalveolar y Biopsia
pulmonar.
Agar sangre:
Es un medio enriquecido que se utiliza además para la
investigación de los diversos tipos de hemólisis(α, ß ó
gamma ). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos.
Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el
agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un
preparado enriquecido con otras sustancias como
Columbia o el tripticase de soja. La adición de sangre a un
medio de cultivo no proporciona las sustancias que están
en el interior de los hematíes, pero sí puede añadir factores
inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el
suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse
calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que
se destruyan las sustancias inhibidoras, que son
termolábiles. La sangre utilizada como aditivo a estos
medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en
algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras
especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las
reacciones hemolíticas o contienen determinados factores
de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del
crecimiento de determinados gérmenes
Agar en sangre
Las especies de Moraxella crecen bien en:
agar sangre de carnero al 5%
Agar chocolate
El agar chocolate se obtiene calentando la
sangre antes de adicionarla al medio base.
Por esta razón el agar chocolate contiene
hemoglobina, que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el
factor X o hemina termoestable. El agar
chocolate es un medio destinado
principalmente al aislamiento de Neisserias
(gonococos ymeningococos) y
Haemophilus, pero en él pueden crecer
muchos otros microorganismos exigentes.
El agar chocolate puede convertirse quizás en uno
de los medios más enriquecidos si añadimos una
mezcla de factores de crecimiento no contenidas en
la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma
diferente según las casas comerciales (Polivitex,
Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de
compuestos que confieren a este medio unas
cualidades nutritivas extraordinarias. Por adición de
uno o varios antibióticos pueden lograrse medios
inhibidores o selectivos para el crecimiento de
determinados microorganismos. Un ejemplo clásico
es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del
gonococo y que no es otra cosa que un agar
chocolate enriquecido al cual se ha añadido
unamezcla de tres antibióticos específicos que
impedirán el crecimiento del resto de la flora
acompañante.
Agar en chocolate para moraxella
El chocolate agar sangre: Colonias
opacas y no hemolíticas ser empujado a
lo largo de la superficie del agar como
un disco de hockey.
En un tiempo de 24-48 horas de
incubación a una temperatura de 35-
37ºC
Condiciones y duración de la
incubación. El agar sangre de carnero al
5% y el agar chocolate deben de
incubarse a 35º C en presencia de
dióxido de carbono o en aerobiosis
durante un mínimo de 48 horas
La mayoría de las cepas crecen
lentamente en agar de MacConkey

Este medio se utiliza para el aislamiento


de bacilos Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios
facultativos. Permite diferenciar
bacterias que utilizan o no, lactosa en
muestras clínicas, de agua y alimentos.
Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el
mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas,
aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta
son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram
positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye
el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color del indicador de pH (rojo
neutro), la absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de
lactosa producen colonias incoloras
Siembra
 Sembrar en superficie:
Utilizando la técnica de Pour Plate:
sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de
cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.
 Incubación:
Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en
atmósfera aeróbica
 Características del medio:
Medio preparado: rojo púrpura
 Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
También crecen bien en caldo
tioglicolato e infusión de cerebro,
corazón y en los caldos de los
sistemas para hemocultivos
Caldo de tioglicolato
Es un medio líquido de enriquecimiento para crecimiento bacteriológico.

Componentes:
Peptona------------------------------------ 20 grs.
Lecitina------------------------------------ 0.25 grs.
Glucosa------------------------------------ 6 grs.
Cloruro de sodio------------------------- 2.5 grs.
Tioglicolato de sodio-------------------- 0.5 grs.
Sulfito de sodio--------------------------- 0.1 grs.
Agar----------------------------------------- 0.7 grs.
Agua destilada--------------------------- 1000 mL
Preparación:
Disolver 30 grs. en 1000 mL de agua
desmineralizada.
Dispensar en tubos de tapón de rosca,
aproximadamente 5 mL del caldo, luego
autoclavear a 121ºC por 15 minutos
Pruebas Bioquímicas
CATALASA.
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima
catalasa que se encuentra en la mayoría de las
bacterias aerobias y anaerobias facultativas que
contienen citocromo. La principal excepción es
Streptococcus
Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura
ambiente puede hacerse siguiendo:
Método del portaobjetos (recomendado):
 Con el asa de siembra recoger el centro de una
colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un
portaobjetos limpio de vidrio.
 Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de
H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo
con el cultivo.
 Observar la formación inmediata de burbujas
(resultado positivo).
 Desechar el portaobjetos en un recipiente con
desinfectante.
 Si se invierte el orden del método (extender la
colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse
falsos positivos.
 Precauciones:
Si se utilizan para esta prueba cultivos
procedentes de agar sangre, se debe
tener la precaución de no retirar algo de
agar con el asa al retirar la colonia ya
que los eritrocitos del medio contienen
catalasa y su presencia dará un falso
resultado positivo
OXIDASA.
Esta prueba sirve para determinar la
presencia de enzimas oxidasas. La
reacción de la oxidasa se debe a la
presencia de un sistema
citocromooxidasa que activa la
oxidación del citocromo que es reducido
por el oxígeno molecular que produce
agua o peróxido de hidrógeno según la
especie bacteriana. El oxígeno actúa
por tanto como aceptor final de
electrones en la cadena transportadora
de electrones.
Por lo general, el sistema citocromo-oxidasa sólo
se encuentra en los organismos aerobios, algunos
anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en
algún microaerófilo, pero los anaerobios estrictos
carecen de actividad oxidasa. Así mismo, la
presencia de oxidasa va ligada a la producción de
catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de
hidrógeno que se produce como consecuencia de
la reducción del oxígeno y cuya acumulación es
tóxica.
La prueba de la oxidasa se usa sobre todo
para Identificar todas las especies
de Neisseria (+)
Diferenciar Pseudomonas de los miembros
oxidasa negativos de las enterobacterias.
El reactivo de la oxidasa más recomendado
es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato
de tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de
Kovacs). Es menos tóxico y mucho más
sensible que el correspondiente compuesto
dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero
es más caro. Este reactivo tiñe las colonias
oxidasa positivas de color lavanda que vira
gradualmente a púrpura-negruzco intenso.
Realización de la prueba
Método en placa directa
 Agregar directamente 2-3 gotas de
reactivo a algunas colonias. No inundar
toda la placa y no invertirla.
 Observar los cambios de color.
Con el reactivo de Kovacs la reacción
se produce en unos 10-15 segundos,
mientras que con el de Gordon y
McLeod es dentro de los 10-30 minutos
Un método de diferenciación con la
Neisseria, es que la Moraxella Catarrhalis
no fermenta los carbohidratos
Producción de ácido a partir de carbohidratos:
Determina la capacidad de producir ácido a partir de
un hidrato de carbono específico incorporado a un
medio base. Utilizando un indicador de pH puede
determinarse si la bacteria ha degradado el hidrato
de carbono en varios productos terminales
observando un cambio de color. Los azúcares
estudiados son glucosa, maltosa, sacarosa y
lactosa.
Método: Se evalúa con una concentración del 1%
del carbohidrato en el medio base. Se inoculan los
tubos y se incuban a 37 ° C.
Interpretación: Una reacción positiva es aquella en
la cual se produce un cambio de color (amarillo).
Una reacción negativa es aquella en la que el medio
permanece rojo rosado
produce DNasa
Prueba de la DNAsa:

Determina la presencia de una enzima capaz de


clivar (cortar ) el ADN incorporado al medio.
 Método:
Se utiliza el medio comercial. Se realiza una estría y
se incuba 24 hs. a 37 ° C. Se revela con el agregado
de ClH 1 N.
 Interpretación:
Es positiva cuando aparece un halo transparente
alrededor del crecimiento bacteriano. En ausencia
de halo se interpreta como negativa. Características
diferenciales de Neisseria y Moraxella
 Además produce Butirato esterasa, que constituye la
base de la prueba fluorométrica rápida para
identificarla
Reducción de nitratos
Determina la capacidad del microorganismo
de reducir el nitrato en nitritos.
 Método:
Se utiliza caldo nitrato que es caldo infusión
cerebro corazón (BHI) al 2.5 % y NO3K al 0.1
%. A las 24 hs. de incubación a 37 ° C los
caldos inoculados se revelan con 3 gotas del
reactivo A (ácido sulfanílico (0.8 g), ácido
acético glaciar (30 ml) y agua destilada (100
ml) y 3 gotas del reactivo B ( dimetil a
naftilamina (0.5 g) , ácido acético glaciar ( 30
ml ) y agua destilada (100 ml).
 Interpretación:
La aparición de un color rojo fuerte vinoso
indica una prueba positiva. Si no hay
desarrollo de color, es negativa
Cerebro Corazón Infusión.

Medio líquido adecuado para el


enriquecimiento y cultivo de bacterias
aerobias y anaerobias, de
microorganismos exigentes como
estreptococos, neumococos y otros
microorganismos de difícil desarrollo.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina
y 100 µg/ml de amicacina, se utiliza este
medio para el cultivo de hongos
patógenos.
Fundamento

Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un


adecuado desarrollo microbiano. La infusión de cerebro
de ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona,
son la fuente de carbono, nitrógeno, y vitaminas. La
glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro
de sodio mantiene el balance osmótico y el fosfato
disódico otorga capacidad buffer.
Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los
hemocultivos, ya que en esta infusión desarrollan todas
las especies de estreptococos excepto los tiol y piridoxal
dependientes.
Los estafilococos que crecen en esta infusión suelen dar
mejores reacciones que en la prueba de la coagulasa.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 µg/ml de
amicacina, se inhibe la flora bacteriana cuando se utiliza
este medio para el cultivo de hongos patógenos.
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Infusión de cerebro de ternera 200.0

Infusión corazón vacuno 250.0

Peptona 10.0

Suspender 37 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar


Cloruro de sodio 5.0
a ebullición hasta disolver completamente. Esterilizar en
autoclave a 121°C durante 15 minutos. Los tubos que no se usen
inmediatamente deberán calentarse en un baño hirviendo para la
Glucosa 2.0
eliminación del oxígeno retenido. Enfriar rápidamente sin agitar.

Fosfato disódico 2.5

pH final: 7.4 ± 0.2


 Siembra
Por inoculación directa de la muestra o
del microorganismo en estudio.
 Incubación
El tiempo, la temperatura y la atmósfera
de incubación, serán las óptimas y
dependerán del microorganismo que se
esté investigando.
TRATAMIENTO
Las opciones de tratamiento incluyen tratamiento
antibiótico o el abordaje mediante tratamiento
expectante. La gran mayoría de los aislamientos de
casos clínicos de este organismo producen beta-
lactamasas y son resistentes a penicilina. Se ha
reportado resistencia a trimetoprima, Trimetoprim-
sulfametoxazol (TMP-SMZ) y tetraciclina. Es
susceptible a:
 Quinolonas
 La mayoría de las cefalosporinas, de 2.ª y 3.ª
generación
 Eritromicina
 Amoxicilina-clavulanico.
PREVENCIÓN
 Medidas de Educación para la Salud.
 Aporte adecuado de líquidos y frutas amarillas o
anaranjadas
 (Contienen vitaminas A y C)

 Proporcionar alimentación adecuada acorde con la edad.

 Lavado frecuente de las manos de la madre o


responsable si se
 Tiene contacto con enfermos de IRA.

 Promover el ejercicio y la actividad al aire libre, pero


abrigado.

 Acudir periódicamente a control del niño sano.

 Capacitación para prevenir las Infecciones Respiratorias


Agudas y evitar los factores predisponentes.