SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

APLIKASI SPEKTROFOTOMETRI UV/Vis

ANALISIS KAFEIN DALAM KOPI BUBUK
MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
SPEKTROFOTOMETRI UV/VIS
Spektrofotometri UV/Vis adalah
teknik analisis spektroskopi yang
memakai sumber radiasi
elektromagnetik ultra violet dekat
(190 nm – 380 nm) dan sinar
tampak (380 nm – 780 nm) dengan
menggunakan instrumen
spetrofotometer.
PRINSIP DASAR SPEKTROMETRI UV/VIS
Prinsip kerja spektrofotometri UV-Vis adalah interaksi yang terjadi
antara energy yang berupa sinar monokromatis dari sumber sinar
dengan materi yang berupa molekul

Spektrofotometri UV-Vis merupakan penyerapan sinar tampak atau UV

oleh suatu molekul yang dapat menyebabkan terjadinya eksitasi
elektron (transisi elektronik) dari keadaan dasar (ground state) menuju
energi yang lebih tinggi (excited state).
 TRANSISI ELEKTRONIK
Besar energy yang diserap tertentu dan
menyebabkan electron tereksitasi dari
ground state (orbital keadaan dasar
yang berenergi rendah) ke keadaan
tereksitasi yang memiliki energy lebih
tinggi
ISTRUMENTASI SPEKTROMETRI UV/VIS

1. Sumber cahaya
2. Monokromator
3. Kompartemen sampel
4. Detektor
5. Pengukur intensitas cahaya
ANALISIS KAFEIN DALAM KOPI BUBUK
DI KOTA MANADO MENGGUNAKAN
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
 Preparasi Penentuan Uji
sampel Panjang Kuantitatif
Gelombang Kafein

Pembuatan Uji kuantitatif

Pengenceran Kurva kafein metode
Standar Spektrofotomet
ri UV-Vis

Pembuatan
Penentuan
Larutan
Kadar
Baku
Sampel
Kafein
PREPARASI SAMPEL
PREPARASI YANG DILAKUKAN ADALAH
PROSES EKSTRAKSI DENGAN
MENGGUNAKAN PELARUT ORGANIK.
PELARUT YANG DIGUNAKAN YAITU
KLOROFORM.
EKSTRAKSI DILAKUKAN SECARA BERULANG
SEHINGGA KAFEIN YANG DIHASILKAN
BENAR-BENAR MURNI.
PENYARINGAN LARUTAN SETELAH EKSTRAKSI
DIPERLUKAN AGAR DIPEROLEH LARUTAN
YANG JERNIH.
LARUTAN DIDIAMKAN SEHINGGA
TERBENTUK 2 LAPIASAN. LAPISAN BAWAH
KLOROFORM YANG MENGANDUNG ANALIT.
LAPISAN ATAS KLOROFORM YANG
MNGANDUNG PENGOTOR.
Pengenceran
Kafein dari hasil ekstraksi kemudian
diencerkan. Pengenceran ini dilakukan
dengan tujuan agar konsentrasi larutan
kafein yang terdapat dalam sampel tidak
terlalu pekat yang akan menimbulkan
over range dalam pembacaan
menggunakan spektrofotometer.

Pembuatan Larutan Baku Kafein

Larutan standar kafein dipipet sebanyak 2,5

mL dan dimasukkan ke dalam labu takar 25
mL, kemudian diencerkan dengan akuades
PENENTUAN PANJANG GELOMBANG
PENGUKURAN DILAKUKAN DENGAN
MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER
UV- VIS.
LARUTAN YANG DIUKUR TDAK
BERWARNA DAN MENGGUNAKAN
SUMBER LAMPU DEUTORIUM.
MULA-MULA PENGUKURAN DILAKUKAN
DENGAN MENGUKUR ZERO BASE YANG
DILAKUKAN DENGAN MENGUKUR
BLANKO, KEMUDIAN DILANJUTKAN
DENGAN MENCARI PANJANG
GELOMBANG MAKSIMUM DENGAN CARA
MENGUKUR SALAH SATU DERET STANDAR
YANG TELAH DIBUAT KEMUDIAN DIBACA
PANJANG GELOMBANG MAKSIMUMNYA.
SPEKTRUM UV KAFEIN

Daerah serapan sampel kafein berada

sekitar panjang gelombang 200 – 350
nm. Panjang gelombang pada absorbansi
maksimum berada pada panjang
gelombang 275 nm.
PEMBUATAN KURVA STANDAR
LARUTAN STANDAR DIBUAT DENGAN MENGAMBIL :
0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3 ML DARI LARUTAN
STANDAR KAFEIN 2,5 ML/25 ML YANG DIBUAT DARI
LARUTAN INDUK 1000 MG/L, KEMUDIAN
DIENCERKAN LAGI KE DALAM 5 ML AKUADES.
KONSENTRASI LARUTAN STANDAR YANG
DIPEROLEH BERTURUT-TURUT ADALAH : 1; 2; 3; 4; 5;
6; 7; 8 MG/L
PENENTUAN KADAR SAMPEL
ABSORBANSINYA DIBACA PADA PANJANG
GELOMBANG 275 NM DENGAN BLANKO SERAPAN
AKUADES DAN DIHITUNG JUMLAH KAFEIN DARI
ANGKA SERAPAN MASING-MASING.
 UJI KUANTITATIF KAFEIN
METODE
SPEKTROFOTOMETRI
Kafein yang telah diencerkan
kemudian
UV-VIS diukur
absorbansinya menggunakan
spektrofotometri UV-Vis.
Absorbansi dari tiap-tiap
sampel dibuat kurva sehingga
dapat ditentukan persamaan
(Y=mx+C) untuk mencari
konsentrasi dari masing-
masing sampel.
TERIMAKASIH