Automatizacija u

laboratorijskoj dijagnostici
Doc dr sc Fejzo Džafić
 Uvod

• Istorija laboratorija je priča o medicinskoj evoluciji od

empirijskih do eksperimentalnih tehnika i dokazuje
da je klinički laboratorij pravi izvor medicinske snage
• Do 18. vijeka, ljekari nisu imali laboratorija, pa je
jedina metoda ispitivanja bila korištenje vlastitih
osjetila: vid, miris i okus
• Smatra se da je ideja o različitom hemijskom sastavu
tjelesnih tečnosti može koristiti u dijagnostici potekla
od Roberta Boylea (1627. -1691.) oko 1680. godine.
• Bilo je potrebno daljnjih 150 godina za uvođenje
hemijskih analiza, zahvaljujući istraživanjima
Jönsa Jakoba Berzeliusa i Justusa von Liebiga
• Pri kraju 19. vijeka uvođenje kolorimetrijskih i
fotometrijskih metoda bilo je presudno za razvoj
kliničko-hemijske laboratorijske dijagnostike na
kojima se i danas bazira većina metoda.
• Zlatnim dobom laboratorijske medicine smatra se
razdoblje pedesetih i šezdesetih godina prošlog
vijeka.
Tada su u bolničke laboratorije uvedene:
• plamena fotometrija,
• potenciometrijske tehnike za mjerenje gasova, acido-
baznog statusa i elektrolita,
• hromatografske,
• elektroforetske i
• imunohemijske tehnike.
• Njihovo uvođenje rezultiralo je kontinuiranim
povećanjem broja analiza, što je posljedično zahtijevalo
unutrašrnju organizaciju laboratorija i standardizaciju
analitičkih procesa, uvođenje automatizacije i upotrebu
kompjutera
• Današnja medicina je direktni potomak medicine
koja je nastala u Grčkoj u 5. vijeku prije nove ere.
• Njezin osnivač, Hipokrat, rođen je 460. g. pr. n. e. na
otoku Kosu u istoimenom gradu.
• Smatra se autorom velikog broja spisa koji su u 3.
vijeku pr. n. e. objedinjeni u jedno djelo pod imenom
Corpus Hippocraticum.
• Njegova je najveća zasluga odvajanje medicine od
magije i religije te stvaranje znanstvene medicine.
• Hipokrat se smatra jednim od najvećih ljekra
svih vremena
• Da bi dobili jasnu sliku o bolesti, Hipokrat se
zalagao za dijagnostički protokol koji uključuje
degustacije pacijentova urina, slušanje pluća
te promatranje boje i izgleda kože.
• Osnivač je humoralne medicine humor - tečnost,
vlaga, sok) prema kojoj se ljudski organizam sastoji
od sokova od kojih su najvažnija četiri: krv, sluz, crna i
žuta žuč.
Četiri tjelesne tečnosti
• Učenje o tjelesnim sokovima prvi je pokušaj da se
teorijski objasne sva zamršena zbivanja u zdravom i
bolesnom organizmu.
• Jedna od najvažnijih karakteristika hipokratizma jest
individualiziranje.
• On pregleda bolesnikove izlučevine: urin, krv, slinu,
stolicu i ispljuvak.
• Poznaje razne sedimente u urinu i zna da dolaze kod
temperature i da se kod upale bubrega urin pjeni.
• U hipokratskim spisima opisani su cistitis, pijelitis,
bubrežni apscesi i mokraćni kamenci, tj. bolesti
mokraćnih kanala i spolnih hormona.
• Veliku važnost ima uroskopija pomoću koje se na
osnovu boje, izgleda i zamućenja mokraće stvaraju
dijagnostički i prognostički zaključci.
• Poznaje hiperaciditet ispljuvka.
• Pregleda slinu i mjeri joj specifičnu težinu.
• Ukoliko je teška i pada na dno u morskoj vodi, uzrok
je opasne bolesti.
• Njegova djela i danas imaju svoju vrijednost i to
toliko da u savremenoj medicini postoji geslo „Natrag
Hipokratu!“.
 Flebotomija

• Flebotomija je nauka o otvaranju vene

urezivanjem ili punkcijom kako bi se odstranila
krv za terapijski tretman ili dijagnozu
• Izvorno nazvana „puštanje krvi“, oko 2000.
g.p.n.e. bila je korištena više za terapijske nego
dijagnostičke svrhe.
• Danas je analiza krvi ključni postupak koji se
primjenjuje u cijelom svijetu kako bi se
osigurala odgovarajuća dijagnostika i liječenje.
Anatomske tačke za puštanje krv
Prva epruveta „vacutainer“ za sakupljenje krvi
BD Vacutainer® epruvete za određivanje
sedimentacije
Vacutainer epruvete sa citratom
Vakutainer epruvete
 Uroskopija

• Najstarija poznata dijagnostička metoda jest analiza

urina, izvorno nazvana uroskopija
• S umijećem uroskopije započeli su egipatski i
babilonski ljekarii koji su govorili o urinu kao o
„božanskoj tekućini“ ili prozoru u tijelo.
• Uroskopia u prijevodu znači znanstveni pregled urina,
a riječ je izvedena iz grčkih riječi „ouron“ što znači
urin i „skopeo“ što znači pregledati, razmatrati,
ispitivati.
• Svoje ime zadržala je sve do 17. vijeka otkad se
naziva analiza urina.
• Najranija analiza opisana u literaturi koja se
može smatrati specifičnim dijagnostičkim testom,
jest test za trudnoću.
• Takve testove priređivali su Egipćani 1000. g. pr.
n. e. koji su uz to mogli odrediti i spol djeteta.
• Test su izvodili tako da su izlili urin na sjemenke
žitarica.
• Ako bi došlo do klijanja, onda je test bio pozitivan
• Hindu kulture zapazili su da je okus i miris urina nekih
ljudi sladak i da privlači mrave i ostale insekte.
• To se nazivalo medenom mokraćom, a odgovara
značenju danas poznate bolesti diabetes mellitus
Liječnici analiziraju urin u matulama
• De Corbeil je vjerovao da različiti dijelovi posude
predstavljaju različite dijelove tijela.
• Kako bi se izvela adekvatna analiza urina, napravljeni
su grafikoni u obliku kruga.
• U njima su se nalazile sve kategorije urina: s obzirom
na boju, bistrinu, miris, pjenu i sediment kao
smjernice za postavljanje dijagnoze.
• Izvorno, ti su grafikoni objavljeni samo na latinskom
jeziku, što je dopuštalo samo najobrazovanijima da ih
razumiju
Grafikon za kategorizaciju urina
• Žuti urin - zdravi.
• Tamni - povećane otpadne tvari,
• Svijetli - tjelesna slabost.
• Actuarius je usredotočen i na sediment
pretpostavljajući da se odvajanje tjelesnih elemenata
temelji na njihovoj gustoći.
• Svijetli elementi - vatra i zrak, zadržavaju se na vrhu,
• teži elementi - zemlja i voda idu prema dnu.
• Stoga, liječnici mogu detektirati dio tijela u kojemu se
nalazi neravnoteža prema dijelu matule.
• Mjehurići na površini predstavljaju nesklad na glavi, a
teži sediment, padajući na dno ukazuje na probleme
u nogama.
• Actuarius je promijenio oblik matule s ciljem veće
dijagnostičke preciznosti
Glavni dijelovi tijela, odgovaraju određenim dijelovima
u matuli
 Alhemija
• Jedno od učenja koje je preneseno iz Egipta u Bizant
bila je alhemija.
• Cilj je bilo stvaranje kamena mudraca, pretvaranje
neplemenitih metala u plemenite i pripremanje
eliksira mladosti
Pripremanje kamena mudraca
• Neobičan talent za hemiju pokazali su Arapi.
• Najveći dio njihovog uspjeha ostao je do danas
zapisan u hemijskim nazivima.
• Riječ hemija arapskog je porijekla, dolazi od riječi al-
kimia, a znači umjetnost preobrazbe.
 Početci mikroskopije

• Jedan od najvažnijih događaja u istoriji

medicinskih struka je otkriće mikroskopa.
• Ono je omogućilo neslućeni razvoj laboratorijske
struke u 19. vijeku.
• Smatra se da su prvi mikroskop konstruirali
nizozemski brusač naočala Hans Janssen i
njegov sin Zacharias Janssen 1600. godine.
• Najvažnija ličnost u povijesti mikroskopa je
Antony van Leeuwenhoek (1632. – 1723.).
Leeuwenhoekov mikroskop
Mikroskopska promatranja Antony van
Leeuwenhoeka
Svjetlosni mikroskop
Fluorescentni mikroskop
Laserski pretražni konfokalni mikroskop
 Osamnaesto stoljeće

• Napredak medicine, u ovom stoljeću obilježen je više

teoretskim nego praktičnim
• Značajan događaj koji je preteča prakse
modernih laboratorija u mjerenju protrombinskog
vremena i drugih koagulacijskih testova, jest
otkriće mehanizma koagulacije
• Krv održavatelj života, postala je najvažnija od svih
tjelesnih tekućina u ovom periodu
Hemijski laboratorij u 18. Stoljeću
 DEVETNAESTO STOLJEĆE

• Devetnaesto i dvadeseto stoljeće svjedoče rastu i

razvoju kliničke hemije
• Uoči Prvog svjetskog rata, hemija krvi u Engleskoj bila
je na počecima.
• Nakon početnog interesa za laboratorijsku
dijagnostiku, laboratorijski posao se povjerava
pomoćnom osoblju tehničara
 Hemijske analize tjelesnih tekućina

• U ranim godinama 19. stoljeća zbog otkrića novih

supstanci u zdravom i bolesnom organizmu javlja se
potraga za hemijskim objašnjenjem fizioloških
fenomena kao vodičem za medicinsku dijagnozu i
kontrolu terapije
• Otkrivanje novih supstanci u zdravlju i bolesti
pokrenuo je interes za kliničku hemiju u kasnim
1830. i 1840
• Tokom tog razdoblja razvili su se testovi za
mnoge sastojke u urinu.
• Volumetrijske (titrimetrijske) metode
zamijenile su laboratorijske gravimetrijske
tehnike.
• Objavljene su specifične hemijske reakcije za
proteine, žučne kiseline, šećer i ureju.
• Proteinurija i glikozurija, kao i glukoza i žučni
pigmenti u krvi, postali su poznati kao
dijagnostički znakovi
 Progresija u Americi

• U Sjedinjenim Američkim Državama, do 1870-ih

godina, prosječni medicinski student i ljekar
pokazivao je površno znanje iz hemije, a u upotrebi
nije bio ni mikroskop.
• Klinička patologija nije bila ništa više od jednostavnog
ispitivanja urina (King, 1983).
• Najraniji početci kliničkog laboratorija u Americi
dogodili su se u Bostonu 1847. godine
• Prva nacionalna sveučilišna bolnica The Hospital of
the University of Pennsylvania, 4. decembra 1895.
otvorila je William Pepper Laboratory of Clinical
Medicine .
• To je bio prvi laboratorij opremljen za rutinski rad i
istraživanje u SAD-u u vlastitoj zgradi na četiri sprata.
• Dijagnostički postupci bili su uglavnom kvalitativni
William Pepper Laboratory - prvi laboratorij u
SAD-u
 DVADESETO STOLJEĆE
• Dvadeseto stoljeće obilježava početak velikih
promjena u bolnicama.
• Promjene su započele s ljekarima i zdravstvenim
radnicima.
• Počele su se cijeniti vještine koje bi medicinski
biohemičar mogao donijeti u laboratorij pa su
početkom stoljeća mnoge bolnice reorganizirale svoje
laboratorije tako da im je na čelu bio biohemičar.
• Nastale su i profesionalne organizacije koje su
pomogle osigurati znanja i vještine laboratorijskih
stručnjaka.
• U 20. stoljeću bolnički svijet osjetio je potrebu za
laboratorijem.
• Improvizirane „dva sa dva“ sobe za urin,
mračne, neventilirane prostorije morale su
zamjeniti dobro konstruirani, dovoljno
osvijetljeni, znanstveno opremljeni prostori.
• Bolnica je definirana kao hotel sa sobom za
operacije kojoj je priključen laboratorij.
• Nakon 1950. g. uz pomoć državnih fondova u
SAD-u građevinski planovi predviđaju primjeren
prostor i opremu potrebnu za rutinske službe i
istraživački laboratorij
• Razvoj medicine i njezinu ovisnost o kliničkoj
hemiji naglašava Van Slykeov volumetrijski
uređaj za mjerenje gasova napravljenog za
određivanje koncentracije ugljen dioksida 1917.
godine.
• To je bio prvi instrument dizajniran posebno za
kliničko hemijski laboratorij
Van Slykov volumetrijski uređaj
• Otto Folin je bio švedski profesor biološke
hemije na Harwardu.
• Njegova istraživanja obuhvaćaju širok raspon
tema o prehrani, osobito o metabolizmu
proteina.
• U vremenskom razdoblju između 1904. i 1922.
g. razvio je kvantitativne analitičke metode za
nekoliko analita u urinu, uključujući ureju,
amonijak, kreatinin, mokraćnu kiselinu, ukupni
kiseonik, fosfor, hloride, ukupne sulfate i kiselost
Otto Folin u hemijskom laboratoriju McLean
bolnice, Waverley MA, 1901
 ZLATNO DOBA KLINIČKE HEMIJE 1948. – 1960

• Ovom dijelu istorije pripadaju najvažnija tehnološka

otkrića.
• Dvanaest godina (1948. – 1960.) bile su značajne po
proizvodnji Vacutainer-epruveta, elektroforezi,
radioimuno analizama i AutoAnalizatoru.
• 1948 otvara se bio zdravstveni laboratorij
 LABORATORIJSKA OPREMA U KLINIČKOJ
BIOHEMIJI: ISTORIJSKI PREGLED
• Rani laboratorijski instrumentarij bio je uključen u
ispitivanje urina i krvi.
• U upotrebi su bili jednostavni kućni predmeti, pa je
tako npr. Richard Bright (1789. – 1858.) koristio
plamen svijeće za zagrijavanje urina u kašici pri
sumnji na bubrežno oboljenje.
• Laurent Lavoisier (1743. – 1794.) prepoznao je
potrebu za većom tačnošću u kvantitativnim
mjerenjima.
• Konstantno je napominjao proizvođače da
poboljšaju postojeće aparature
Lavoisierova laboratorijska oprema (1780.)
 Test trake

• Prvu test traku 1850. godine razvio je pariški hemičar

Jules Maumené (1818. – 1898.) kada je impregnirao
traku merino vunom s kalajskim hloridom.
Primjenom kapi urina i zagrijavanjem svijećom ako je
urin sadržavao šećer, traka bi odmah pocrnila.
Test trake za analizu urina
• Test trake se prvi puta industrijski napravljene i
komercijalno upotrebljene pedesetih godina 20.
stoljeća.
• Kompanija Boehringer Mannheim, današnji lider na
svjetskom tržištu pod imenom Roche predstavila je
prvi Combur-Test® 1964. godine.
Duboscq-ov kolorimetar ( 1950.godina)
Automatizacija i kompjutorizacija u laboratoriju

• Godine 1957. predstavljen je AutoAnalyzer, prvi

uređaj dizajniran za specifične analitičke potrebe
u kliničkom laboratoriju
• Leonard T. Skeggs mlađi, nakon što je
doktorirao biohemiju, počeo je tražiti način da
smanji nepreciznost i ponavljanje koraka u
ručnoj analizi
• On je želio napraviti stroj koji će izraditi analizu krvi
„od početka do kraja“
Jednokanalni AutoAnalyzer
• Automatizacija je donijela revoluciju za laboratorijske
usluge, pod čime se podrazumijeva povećanje broja
testova, te znatno skraćivanje vremena potrebnog za
obavljanje tih testova
• Računalo zauzima jedno od najvažnijih segmenata
opreme u kliničkom laboratoriju
Prvi integrirani analizator za kliničke laboratorije
 INTEGRIRANI SISTEM (ABBOTT Architect ci8200)
 ARCHITECT ci8200 predstavlja najsavremeniji integrirani sistem,
kombinaciju biohemijskog i imunohemijskog analizatora na istoj
platformi.
 Biohemijski analizator c8000 je otvoreni sistem
sa mogućnošću integracije s imunološkom
jedinicom u jedan aparat.
 Izbjegavanje ponavljanja korištenjem
tehnologije produžene linearnosti enzimatskih
reakcija (Flex Rate)
 Efikasno i jednostavno određivanje elektrolita
sa chip tehnologijom (ICT tehnologija), bez
potrebe za održavanjem i osvježavanjem
elektroda, garantirano 45000 testova po
jednom čipu.
 Izbjegavanje manualne pripreme reagenasa -
većina reagenasa spremnih za upotrebu
 Obavlja 1200 analiza na sat
 101 biohemijski test – većina ocjenjenih kao 6
SIGMA = World Class
 Ušteda korištenjem kvarcnih kiveta bez potrebe
mijenjanja – samoperuće
 Mogućnost dodatnog programiranja protokola
ispiranja
 Kompletan sustav kontrole uzorkovanja –
prenosivost < 0,1 ppm (istovremeno nadzor
nivoa,detekcija ugrušaka(mjehura, zaštita igli od
loma)
 Omogućava postavljanje 68 testova odjednom
 Lahkoća manipulacije uzorcima korištenjem
linijskog posluživanja - zajednički robot za
imuno i biohemijski aparat
 217 pozicija za uzorke sa posebnim hitnim
pozicijama sa prvim prioritetom uzimanja
 18 minuta za hitne (STAT) testove
• U savremenom laboratoriju, individualni
kompjutorski terminali su umreženi u potpuni
laboratorijski informatički sistem.
• Također u mnogim ustanovama postoji i bolnički
informacijski sistemi gdje računar objedinjuje
informacije i podatke iz cijele bolnice
 Molekularna dijagnostika

• 1949. Karakterizacija srpaste anemije kao

molekularne bolesti
• 1953. Otkriće dvostruke uzvojnice DNA
• 1958. Izolacija DNA polimeraza
• 1960. Prve hibridizacijske tehnike
• 1969. In situ hibridizacija
• 1970. Otkriće restrikcijskih enzima i
reverzne transkriptaze
•
• 1975. Southern blott
• 1977. DNA sekvenciranje
• 1983. Prva sinteza oligonukleotida
• 1985. RFLP
• 1985. Izum PCR
• 1986. Razvoj fluorecsentne in situ hibridizacije
(FISH
• 1988. Otkriće termostabilne DNA
polimeraze
• 1992. Koncept real time PCR-a
• 1993. Otkriće strukture specifičnih
endonukleaza
• 1996. Primjena DNA mikročipova
• 2001 . Prvi nacrt ljudskog genoma
• 2001. Primjena proteinskog profiliranja u
ljudske bolesti
PCR uređaj
 Hipokratova zaklezva

• Kunem se Apolonom lekarom, Asklepijem, Higejom, i

Panakejom, i za svjedoke uzimam sve bogove, i sve
boginje, da ću se u skladu sa svojim sposobnostima i
svojim rasuđivanjem držati ove Zakletve.
• Da ću smatrati dragim kao roditelja onog koji me je
naučio ovoj umjetnosti; da ću živjeti u slozi sa njim i,
ukoliko je to potrebno, dijeliti svoja dobra sa njim; da ću
njegovu djecu gledati kao svoju braću, da ću ih, ukoliko
to zažele, podučiti ovoj umjetnosti bez naplate ili pisane
obaveze, da ću podijeliti sa svojim sinovima, sinovima
učitelja i učenicima koji su se upisali i prihvatili pravila
profesije, ali samo sa njima, pravila i instrukcije.
• Propisivaću liječenje na dobrobit svojih
pacijenata u skladu sa mojim sposobnostima i
mojim rasuđivanjem i nikada nikome neću
nanijeti zlo.
• Nikome neću, čak i ako me zamoli, propisati
smrtonosan otrov niti ću mu dati savjet koji može
prouzrokovati njegovu smrt.
• Niti ću dati ženi sredstvo za pobačaj. Održaću
čistotu mog života i mog umijeća.
• Neću operisati kod kamena, čak i ako je bolest
očigledna kod pacijenta; ostaviću ovu operaciju
specijalistima tog umijeća.
• U koju god kuću da uđem, ući ću samo za
dobrobit mojih pacijenata, držeći se podalje od
bilo kakvog namjernog nedjela i od zavođenja
žena i muškaraca zarad ljubavnih zadovoljstava,
bilo da su slobodni ili robovi.
• Sve što saznam prilikom vršenja moje profesije
ili svakodnevnog poslovanja sa ljudima, a što ne
treba širiti dalje, čuvaću kao tajnu i nikada neću
otkriti.
• Ukoliko se vjerno držim ove zakletve, neka
uživam u mom životu i praksi moje umjetnosti,
poštovan od strane svih ljudi za sva vremena; ali
ukoliko zastranim sa nje ili je prekršim, neka me
sve suprotno zadesi.”
 Sadašnja, korigovana verzija

• “U času kada stupam među članove ljekarske

profesije svečano obećavam da ću svoj život
staviti u službu humanosti.
• Prema svojim učiteljima sačuvaću dužnu
zahvalnost i poštovanje.
• Svoj poziv ću obavljati savjesno i
dostojanstveno.
• Najveća briga će mi biti zdravlje mog bolesnika.
• Poštovaću tajne onoga ko mi se povjeri.
• Održavaću svim svojim silama čast i plemenite
tradicije ljekarskog zvanja.
• Moje kolege će biti moja braća.
• U vršenju dužnosti prema bolesniku neće na
mene uticati nikakvi obziri, vjera, nacionalnost,
rasa, politička ili klasna pripadnost.
• Apsolutno ću poštovati ljudski život od samog
početka.
• I pod prijetnjom neću popustiti da se iskoriste
moja medicinska znanja, suprotna zakonima
humanosti.
• Ovo obećavam svečano, slobodno pozivajući se
na svoju čast.”