Equipo 9

• Martínez Balmori Héctor Alejandro

• Salaices Muñoz Daniela
DEFINICIONES
Producto Farmacéutico no Estéril
 Aquellos productos en los cuales se permite un máximo
Consecuencias
de carga microbiana, pero debe haber ausencia total de
patógenos. Disminución o inactivación de la
actividad farmacológica
 Los productos farmacéuticos no estériles están
La presencia de m.o. puede producir
propensos a contaminarse con microorganismos por una
infecciones
mala utilización de las buenas prácticas de fabricación
(BPF), o por falta de capacitación por parte del personal. Cambios en propiedades físicas y
químicas pueden conducir a un
Estos productos se contaminan a menudo con bacterias,
producto no apto para consumir
hongos y levaduras durante el transcurso de su proceso
de manufactura.
Carga microbiana

 Número y tipo de microorganismos que contaminan un

producto.

 La contaminación que proviene de los componentes

comprados, de los empleados, del ambiente de manufactura
y de fuentes externas compone la carga microbiana total
que se encuentra en una muestra.
CARGA MICROBIANA
ÁREAS DE FABRICACIÓN
ÁREAS DE FABRICACIÓN
MÉTODOS DE ENUMERACIÓN MICROBIANA

 El recuento cuantitativo de bacterias mesófilicas aerobias y hongos (incluyendo

levaduras) requiere de pruebas que han sido diseñadas principalemte para
determinar si una sustancia o preparación farmacéutica cumple con una
especificación establecida de calidad microbiológica.
 Filtración por membrana.
 Recuento en placa.
Naturaleza del producto
 Vaciado en placa. Especificaciones establecidas
 Extensión en superficie. *Aptitud del método*

 Número más probable (NMP).

MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS

Staphylococcus aureus
 Cocos, gram (+). Agrupación en racimos. Anaerobio
facultativo. Crecimiento de S. aureus en
 Las colonias individuales en agar son redondas, convexas medio BHI

y de 1-4 mm de diámetro con un borde afilado

Coagulasa Positivo
Catalasa Positivo
Oxidasa Negativo

Tinción de Gram
MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS

Salmonella
 Son bacilos Gram (-), la mayor parte de ellas son
móviles y tiene flagelos. Estos microorganismos crecen Crecimiento de Salmonella
con facilidad en medios sencillos, pero casi nunca en medio XDL
fermentan la lactosa o la sacarosa, forman ácido y a
veces gas a partir de la glucosa y manosa, suelen
producir H2S, son resistentes a ciertos productos
químicos.

Tinción de Gram
MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS

Escherichia coli
 Bacilo corto Gram (-). Es anaerobio facultativo, móvil
por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma Crecimiento de E. coli en
esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa. medio McConkey

 E. coli y la mayor parte de las bacterias intestinales

forman colonias circulares mconvexas y lisas con bordes
definidos.

Tinción de Gram
MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS

Pseudomonas aeruginosa
 Bacilo recto o ligeramente curvado Gram (-) flaglelado
y aerobio (capaz de crecer como anaerobio en
presencia de nitrato).
Crecimiento de P.
 En AST: Colonias circulares con margen ondulado con aeruginosa en AST
presencia de elevación. Presencia de pigmento
“pyocyanin” azul-verde.
Catalasa Positivo
Oxidasa Positivo

Tinción de Gram
MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS

Candida albicans
 Hongo dimórfico. Levadura. aspecto de células
redondas u ovaladas, de 3-8 x 2-7 micras de tamaño,
agrupadas en pequeños grupos. Hongo: las células
Crecimiento de C. albicans
alargadas con apariencia de filamentos, pseudo-hifas o
pseudo-micelio.

Hongo filamentoso Levadura

MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS
Caldo TAT (Triptona-Azolectin-Tween)
 La peptona de caseína proporciona al me dio la fuente de carbono, nitrógeno, mine rales y otros
compuestos nitrogenados, sustancias necesarias como soporte de crecimi ento. La lecitina de
soya y el polisorbato (Tween 20) neutralizan sustancias inter ferentes para el desarrollo de los
microorganismos.
PARTE EXPERIMENTAL
PRODUCTOS FARMACÉUTICOS NO ESTÉRILES II
ANÁLISIS DE PRODUCTO
ORAL
E. coli
Jarabe
10 mL

MOOS ESPECIFICOS
Incubar de 30 a 35°C por 18-24 h

PRODUCTO 10 -1
CST+N
90 mL

Cuenta de OMA
Cuenta de H y Lev

1 mL

TSA 50 mL ADS 50 mL

Incubar AST de 30 a 35°C por 3 a 5 días

ADS de 20 a 25°C por 5 a 7 días

Enriquecimiento en Caldo McConkey

Incubar de 42 a 44°C por 24 Resiembra en Agar McConkey

a 48 h Incubar de 30 a 35°C por 18 a 48
h
RESULTADOS
Medios selectivos y diferenciales
E. coli S. typhimurium P. aeruginosa S. aureus

a) Morfología colonial
(Descripción de colonias)
EMB XLD CET SM

MaC BS Ps P BP

b) Morfología microscópica
(Tinción de Gram)

Ps F
 EMB (Eosina Azul de Metileno)

Selectivo Crecimiento de Gram - e inhibicion de Gram +

Diferencial Fermentación de la lactosa o la sacarosa

Las colonias de Escherichia coli exhiben un brillo verde metálico

característico debido a la rápida fermentación de la lactosa.
 Agar McConkey

Selectivo El cristal violeta y las sales biliares inhiben el

crecimiento de organismos Gram +
Diferencial Fermentación de la lactosa y el indicador Rojo
neutro

Las colonias de Escherichia coli serán rosadas o rojas

 Verde brillante

Selectivo El verde brillante es el agente para inhibir la

flora acompañante principalmente Gram +
Diferencial La lactosa y sacarosa con rojo fenol
(indicador pH) forman un sistema para
excluir los fermentadores de lactosa o
sacarosa.
 XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato)
Selectivo Desoxicolato es un agente que inhibe los
crecimientos de las bacterias Gram +
Diferencial Xilosa presente es fermentada prácticamente por
todas las bacterias entéricas (pH acido) salvo por la
Shigella.
Lisina presente permite diferenciar a las
Salmonellas, una vez agotada la Xilosa en el medio
las Salmonellas actúan sobre la Lisina, revertiendo el
pH a valores alcalinos
Producción de sulfuro de hidrógeno, basados en la
presencia de Tiosulfato Sódico y Citrato Ferrico
amónico

Las colonias típicas de Salmonella son de color rojo con el centro

negro debido a la producción de H2S
 Sulfito de bismuto
Es un tipo de agar utilizado para aislar especies de Salmonella

Selectivo El Bismuto inhiben el crecimiento de

organismos Gram +
Diferencial Capacidad de usar Sulfato ferroso y convertirlo
en H2S

Las colonias de Salmonella serán negras o verdosas-grises,

algunas veces con brillo metálico
 Pseudomona P
Utilizado para el aislamiento, detección y diferenciación de especies de
Pseudomonas en base a la producción de piocianina

Diferencial Favorece la producción de piocianina al añadirse

cloruro de magnesio y sulfato de potasio, e
inhibe la formación de fluoresceína La piocianina
en este medio es de color azul.
 Pseudomona F
Utilizado para el aislamiento, detección y diferenciación de especies de
Pseudomonas en base a la producción de fluoresceína

Diferencial Favorece la producción de fluoresceína a traves

de añadir fosfato dipotásico y sulfato de
magnesio que inhibe la formación de piocianina.
 Sal Manitol

Selectivo Permite el crecimiento de bacterias Gram +

mientras inhibe el crecimiento de Gram -
Diferencial Fermentación del manitol deriva en la
producción de ácidos lo cual modifica el pH y
el vire del indicador rojo de fenol a amarillo.
 Baird Parker

Selectivo La glicina, el cloruro de litio y el telurito

potásico actúan como agentes que permiten el
crecimiento de estafilococos e inhiben el
crecimiento de la flora acompañante
Diferencial La yema de huevo constituye el sustrato para
determinar la producción de lecitinasa.
Los estafilococos producen colonias de color de gris oscuro a negro
debido a la reducción del telurito y aquellos que producen lecitinasa
descomponen la yema de huevo y crean zonas transparentes
alrededor de las colonias
 Vogel Johnson

Selectivo El telurito de potasio, el cloruro de litio y la alta

concentración de glicina inhiben el desarrollo de
la flora acompañante.
Diferencial Debido a la fermentación del manitol y
reducción del telurito y tiene como indicado el
rojo de fenol.
S. aureus es coagulasa positiva por tanto fermenta el manitol y
produce acidificación del medio y vire a color amarillo y también
reduce al telurito a teluro observándose colonias color negro.
E. coli

Agar EMB (Eosina Azul de Metileno) Agar McConkey

 Salmonella

Agar EMB (Eosina Azul de Metileno) Agar Verde Brillante Sulfito de Bismuto
P. aeruginosa

Agar Cetrimida Agar Pseudomonas P Pseudomonas F

S. aureus

Agar Sal Manitol Agar Baird Parker Agar Vogel Johnson

LECTURA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS

E. coli S. typhimurium P. aeruginosa S. aureus

* TSI * TSI
* CALDO
* SIM * SIM * OXIDASA
MANITOL
* CITRATO * CITRATO
 CITRATO
Citrato de Simmons:
 Citrato de sodio
 Fosfato de amonio
 Azul de bromotimol

 Permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única
fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando una
fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del mismo de verde a
azul
SIM (Sulfuro/indol/movilidad)
 Medio destinado a verificar la movilidad, producción
de indol y H2S
 A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos
pueden generar H2S que reacciona con el hierro
presente y forman un compuesto color negro.
 El triptófano es un aminoácido que puede ser
metabolizado por algunas bacterias para formal indol.
Este se combina con el aldehído del reactivo de
Ehrlich o de Kovac para originar un compuesto de
color rojo.
 El agente solidificante le otorga la propiedad de ser
semisólido capacidad que permite detectar la
movilidad que se evidencia por el enturbiamiento del
medio por el crecimiento que difunde
TSI (Triple azúcar hierro) Utilización de glucosa sola K/A
 El agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos Utilización de sacarosa y/o lactosa A/A
(glucosa, lactosa y sacarosa ).
Sin utilización de ninguna de las tres K/SC o K
 Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la
producción resultante de ácido es detectada por el
indicador rojo fenol. Se producen cambios de color:
amarillo para la producción de ácido y rojo para la
alcalinización.
 Dado que la lactosa y la sacarosa se encuentran
presentes en concentraciones mucho más elevadas que
la glucosa, la formación de ácido en la base del tubo se
debe a dichos azúcares, mientras que la formación de
ácido a partir de la glucosa es suprimida por la rápida
oxidación de una pequeña cantidad de ácido en el área
inclinada del tubo, lo que genera una reacción de pH
neutro o alcalino cuando se fermenta sólo glucosa.
 Con un pH neutro o alcalino, el ácido sulfhídrico
(producido por el tiosulfato sódico) reacciona con la sal
de amonio ferroso, lo que produce sulfuro de hierro de
color negro.
MANITOL
 Sirve para detectar si los microorganismos son
capaces de fermentar el manitol liberando
productos ácidos que serán detectados gracias al
indicador rojo de fenol que cambiará a color
amarillo.
 Entre las bacterias de importancia clínica, la
prueba del manitol sirve para diferenciar
Staphylococcus aureus (+) de Staphylococcus
epidermidis (-)
CATALASA
 El peróxido de hidrógeno es el producto final del
metabolismo oxidativo de carbohidratos, a esta vía
metabólica recibe el nombre de metabolismo aerobio-
oxidativo.

 La acumulación del peróxido es muy toxico

 La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las

bacterias aerobias. Descompone el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de
burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba
es positiva.
OXIDASA
 El reactivo de Kovacs es incoloro pero al ponerlo en
contacto con la enzima citocromoC oxidasa cambia a
un color morado debido a que el tetrametil-p-
fenilendiamina es una amina aromática y la oxidación
de esta produce quinolonas de color morado-azulado.

 El reactivo basado en una disolución acuosa de

tetrametil-p-fenilendiamina al 1%