Universidad Autónoma De Yucatán

Facultad de química.

Campus ciencias de la salud.

Unidad V Electroquimioluminiscencia y VI marcadores tumorales.

Profesor: EBC. Carlos A. Ku Chulim

Equipo: :

Cua Cauich Maria Elena

Dawn Cauich Andrea Del Carmen.
Martin Chable Alejandra Guadalupe

MÉRIDA, YUCATÁN, MÉXICO

5 de Marzo del 2019

 Contenido
1. Quimioluminiscencia 1. Marcador tumoral: antígeno CA-125
• Fundamento • Fundamento
• Características • Características
• Ventajas y desventajas • Ventajas y desventajas
• Limitantes • Interferencias
• Desempeño • Desempeño
2. Electroquimioluminiscencia
• Fundamento
• Características
• Ventajas y desventajas
• Interferencias
• Desempeño
 Quimioluminiscencia
Fundamento
Propiedad de algunas sustancias químicas para emitir luz.

Inmunoensayo basado en la emisión de luz asociada con la energía.

Tipos de quimioluminiscencia

Directa:
Indirecta:
* Fase sólida: micro partículas paramagnéticas
recubiertas de anticuerpos específicos contra la sustancia *Reacciona por enzimas o iones
a analizar *Catalizadores
*Marcador: éster de acridina *Puede necesitar o no cofactores
*Sustrato oxidante *Sustrato: éster de fosfato.
*Catalizadores
*Cofactores.
 Quimioluminiscencia
Características
Al relajarse hasta el estado
fundamental, emite un fotón.
A veces, en estas reacciones,
se requiere un catalizador
que disminuya la energía de
activación y aumenta el
rendimiento cuántico de la
reacción quimioluminiscente.
Requiere la presencia de un
fluoróforo al cual le transfiere la
energía, de forma que el
fluoróforo se excita y al volver a
su estado fundamental emite un
fotón.
 Quimioluminiscencia
Luminol
Peroxidasa
conectada a la
Estreptavidina
Peróxido
Hormona o Acridina
marcador tumoral
Emisión de luz
Anticuerpo específico
marcado con acridina

Anticuerpo especifico Unantígeno

El marcador encomo indicador
la muestra de la reacción
del paciente que en a
es sometido
de captura combinación
una con los
reacción tipo reactivos
sándwich, el (Como el peróxido-ácido
anticuerpo
Cuantificación
Relación directa deentre
una sustancia,
la utilizando
concentración de
e hidróxido de sodio)
covalentemente unidoena contacto con la
las partículas muestra y el y
paramagnéticas
Fase sólida una reacción
antígeno
analizador
el y la antígeno
cantidad
proporcionan
anticuerpo marcado anticuerpo.
de
la éster
con luz
reaccióndeemitida.
acridina.
quimioluminiscente.
 Fundamento de la técnica

El sistema inyecta un reactivo 1 y después el reactivo 2

en las cubetas conteniendo la mezcla de reacción
produciendo fotones.

Un fotodetector, detecta los fotones de luz emitida y los

convierte en pulsos eléctricos.

Los sistemas cuentan estos pulsos eléctricos, leen y los

resultados comparando con una curva maestra definida
para cada ensayo, calculando la concentración.
 Pasos de la Quimioluminiscencia

1. Reacción química inicial que proporciona el intermedio o producto.

2. Conversión del exceso de energía química en excitación electrónica de este

intermedio.

3. Transferencia de energía en el caso de la QL indirecta.

4. Emisión de la luz por parte de las especies excitadas

 Aplicaciones de la quimioluminiscencia en el laboratorio
clínico

• Marcadores serológicos
• Hormonas
• Marcadores tumorales
• Drogas Abbott- Architect i2000SR
• Inmunoglobulinas
• Vitaminas
• Homocisteína

DiaSorin-Liaison XL Biokit – BIO FLASH

 Ventajas y desventajas

Ventajas Desventajas

Alta sensibilidad (femtogramos 10¹⁵) y amplio Baja especificidad

intervalo dinámico de concentraciones

No emplea radiactividad las enzimas empleadas como marcadores que catalizan

reacciones quimioluminiscentes pueden inactivarse durante
No genera riesgo contaminante ni ruido de fondo a las reacciones de marcaje.
durante el proceso del análisis

Los resultados son rápidos

Equipos automatizados de fácil manejo Sólo podrán marcar antígenos de bajo peso molecular.

No requiere fuente de excitación externa

Mínima manipulación por parte del operador

 Limitantes
La emisión quimioluminiscente varía en función del tiempo. Tras la mezcla de
El tiempo de medida
los reactivos, la emisión de luz alcanza inmediatamente un máximo y después
de la señal cae hasta la línea base.

La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante

calentamiento

En modo no reproducible: provocados por la presencia de fibrina o de material en

Falsos reactivos: suspensión en la muestra o por la contaminación de los módulos de reacción por
restos de muestras positivas.

En modo no específico: se pueden observar en la mayoría de los ensayos muy

sensibles.
 Rendimiento
Estos equipos trabajan al menos 5 perfiles de pruebas a una misma muestra sin necesidad de medir o de
montar 5 veces la misma muestra lo que disminuye considerablemente el tiempo de trabajo de rutina en el
laboratorio.

Tienen capacidad en el refrigerador para 24 reactivos diferentes permitiendo realizar 24 pruebas de manera
simultánea a una sola muestra.

El rango de tiempo para la obtención de los resultados de los perfiles va de 15 a 50 minutos, por ejemplo: un
perfil tiroideo se obtiene en 20 o 40 min., perfil ginecológico igual, un VIH en 20 minutos, una GCH en 17
minutos, etc.

La estabilidad de las calibraciones es de 28 días optimizando el costo por prueba (no en todas las pruebas
por ejemplo ácido fólico en el sistema ACS 180 la calibración dura sólo 24 horas). Así mismo la estabilidad de
los reactivos va de 8 a 12 meses.

Tiene capacidad para procesar 60 muestras simultáneamente con opción a seguir programando por medio
del software del sistema, el cual reporta los horarios exactos para la obtención de los resultados.
tienen disponibilidad de procesar 294 pruebas sin intervención del operador e incubar 60 pruebas al mismo
tiempo.
Electroquimioluminiscencia
Fundamento
Generacion de especies reactivas partir de percursores en la superficie de un electrodo.

Las especies reaccionan entre si produciendo luz.

Uso de un complejo de tris(bipiridil)-rutenio(II) [Ru(bpy)] 2+ y tripropilamina (TPA).

Las reacciones quimioluminiscentes que

conducen a la emisión de luz desde el
complejo de rutenio se inician por un
proceso eléctrico en lugar de químico. Esto
se consigue aplicando un voltaje a los
complejos inmunológicos
 Electroquimioluminiscencia
Características
Las sales de tris(bipiridil)-rutenio son
compuestos estables y solubles en agua. Los
ligandos bipiridilo se pueden modificar
fácilmente con grupos reactivos para formar
compuestos activados quimioluminiscentes.
Componentes:
• Complejo del rutenio
Se utiliza un éster N-hidroxisuccinimida (NHS) • Tripropilamina (TPA)
de un complejo Ru(bpy)3 modificado porque se Que son estables mientras no se
puede acoplar fácilmente con los grupos aplique un voltaje.
aminos de proteínas, haptenos y ácidos
nucleicos. Esto permite aplicar la tecnología de
detección a una gran variedad de analitos
 Electroquimioluminiscencia
Reacción ECL del tris(bipiridil)-rutenio2+ y
1 la TPA tiene lugar en la superficie del
electrodo de platino
La TPA se oxida, libera un
2 electrón. Reacciona liberando
un protón (H+)

El complejo de rutenio libera un electrón en

la superficie del electrodo para formar el 3
catión Ru(bpy)3 3+

El radical TPA y el catión Ru 3+ reaccionan entre sí,

pasando a un estado excitado mediante la 4
transferencia de energía
 Electroquimioluminiscencia

Este estado excitado es inestable y decae con la emisión de un fotón de 620 nm hasta el estado
original. El ciclo de reacción comienza entonces otra vez.

Si bien la TPA se consume durante la medición, el complejo de rutenio en estado fundamental

se regenera continuamente.

Cuando se aplica un voltaje al

electrodo de la célula de
medición, se produce un breve
pico de emisión de luz que se
puede detectar como la señal de
ECL resultante. Se mide entonces
un área definida bajo la curva en
torno al máximo de intensidad.
 Aplicaciones de la Electroquimioluminiscencia en el
laboratorio clínico

Ensayo Competitivo
•Analitos de bajo peso molecular: fT3, fT4,
cortisol, testosterona, estradiol, etc.

Ensayo tipo Sándwich

•Analitos de alto peso molecular: TSH,
FSH, LH,etc.
•Ensayo tipo “puente”: Anticuerpos
 Ventajas y desventajas

Ventajas Desventajas

Permite la comodidad de trabajar con reactivos Los metales de transición (Ru, Ir, Os) tiene un amplio
líquidos. espectro de emisión (dificulta los multianálisis)

Ensayos de elevada calidad y una rápida obtención Costo

de resultados.
Minimiza la necesidad de diluciones y repeticiones,
reduciendo el tiempo de manipulación y el
consumo de reactivos.
La aplicabilidad de la técnica a la detección de
todos los analitos.
Limite de detección bajo. (10^ -15 moles)
 Limitantes

Correactantes Pueden haber problemas con la especificidad para aminas

Hidrocarburos aromáticos son poco solubles.

La TPA presente en el campo eléctrico se agota, la intensidad de la señal (luz)

disminuye lentamente tras alcanzarse el máximo.
 REFERENCIAS

• 1. Gardner J. L. Hialtt L. Atlas de Histología. 2a ed. México. Editorial McGraw-Hill Interamericana;

1997. p. 265-267.
• 2. Gonzalez Hernandez, A.; Principios de bioquímica clínica y patología molecular; Elsevier;
España 2010. Pag. 31.
• 3. Compendio de información básica. Cobas e411; Consutado [en línea] el 18 de marzo del 2019
de http://www.laboratorioscepco.com/cobas_e411.pdf