Citometria de Fluxo

Prof. Helton Resende

UNIPAC
O que é a citometria de fluxo:
 Avaliação de sub-populações
celulares: quadrantes CD4 e CD8.
1 2
Log PE Fluorescence (CD4)

45%
100

2%
10
1

27% 3 26% 4
.1

.1 1 10 100 1000
Log FITC Fluorescence (CD8)
Avaliação de ativação celular:
explosão respiratória.
DCFH-DA

DCFH-DA

DCFH H 2O 2

DCF
 Análise de divisão celular.
M G0
G2 DNA Analysis
G1
G0G1
s
C
o
u
n
t
s G2 M
0 200 400 600 800 1000
2N 4N
DNA content
 Análise de DNA
300
225
Counts
150
75
0

0 200 400 600 800 1000

2N 4N
PI Fluorescence
 Influxo de cálcio

1000
800
RATIO [short/long]

600
400
200

Stimulation
0

0 36 72 108 144 180

Time (Seconds)
 Análise de reticulócitos

150
150

112
112

RMI = 34 RMI = 0

Cou7nt5
Count7 5

R4 R3 R2 R1 R4 R3 R2 R1
37
37

0
0

.1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000

log Thiazole Orange log Thiazole Orange
 Citômetro de fluxo
Detector &
Mechanical Computer System
Fluidics
 Célula de Fluxo

Injector
Tip Sheath
fluid

Fluorescence
signals

Focused laser
beam
 90 Degree Light Scatter

Laser

FALS Sensor

90LS Sensor
Detectores de fluorescência

FALS Sensor

Freq
Fluorescence

Fluorescence detector
(PMT3, PMT4 etc.)
Marcadores fluorescentes

Wavelength
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm

Excitation
Emission
RelativeIntensity

Fluorescein (FITC)
 Cromógenos
Common 350 457 488 514 610 632
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Laser
Lines PE-TR Conj.

Texas Red

PI

Ethidium

PE

FITC

cis-Parinaric acid
 Imunofenotipagem:
marcação celular
CD2
CD4

CD # = cluster designation number

 Imunofenotipagem
5
1

0
1
1

0
7
Count

0
3

0
0

.1 1 10 100 1000

Log FITC
 Light scatter gating

Side Scatter Projection

1000
Neutrophils

Forward Scatter Projection

Scale
800
Forward Scatter

1000
200
100
600

50
40
30 Monocytes
400

20
15
Lymphocytes
200

8
0

0 200 400 600 800 1000

90 Degree Scatter
 Avaliação de sub-populações
celulares: quadrantes CD4 e CD8.
1 2
Log PE Fluorescence (CD4)

45%
100

2%
10
1

27% 3 26% 4
.1

.1 1 10 100 1000
Log FITC Fluorescence (CD8)