UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS – ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

ENZIMAS

INTEGRANTES:
Cristian Benalcázar
Patricia Torres
Sharon Ortiz
Laura Vallejo
NRC:
 Enzimas Biomoléculas de naturaleza proteica
Aceleran la velocidad de reacción
metabolismo

Disminuyendo Ea

No sufren modificación durante

Rx
Toda E actúa mol particular
Específicas-Sustrato

E catalizan la Rx bajando la E requerida para pasar de S--P

Clasificación: < T, E
• Parte proteica de la E
1.Oxidoreductasas. Apoenzima (Ap)
• Catalíticamente inactiva
2.Transferasas.
3.Hidrolasas.
4. Isomerasas. Cofactor, Grup • MO o Inorg, que requiere Ap E
5. Ligasas Prostetic para activarse
6. Liasas: Remoción de un
grupo del sustrato (no Holoenzima • E activa • Temperatura
hidrólisis). • pH
• Concentración E, S
 Energía de Activación
Es la cantidad de E mínima que necesita un sistema antes de poder iniciar un
determinado proceso.
Ea << 𝐸𝑓𝑟𝑒𝑒 Rx quimica
RX entre dos moléculas Orientación correcta

moléculas se aprox

nubes elect repelen

proviene

catalizador no cambia la ∆G de la Rx
calor del sistema
No cambian si una Rx libera o absorbe E
en general
disminuyen la energía del estado de transición, un estado inestable por el que deben pasar los reactivos para convertirse en productos
 Nanoparticulas  semejantes a
moleculas biologicas  aplicacion
de campos magneticos externos
para dirigirlos MNP(Fe 3 O 4 modificado) +
peroxidasas inmovilizadas 
Peroxidasas  mayor estabilidad y Actividad
Comp. fenolicos

Objetivo: investigar la
Enzimas: libres o estabilidad de la
inmovilizadas (estabilidad enzima inmovilizada
operativa a largo plazo) en diferentes
condiciones
ambientales y de
almacenamiento, y su
Fabrica textil  alta
eficiencia en la
carga organica y
decoloración de los
toxicos (sales, HM,
Desarrollo de nanopartículas magnéticas colorantes azoicos en
surfactantes, aceites)
inmovilizadas con enzimas peroxidasas aguas residuales
para la biorremediación de colorantes textiles.
textiles de aguas residuales
Resultados y discusión
Inmovilizar las enzimas para
prolongar su vida útil y su
capacidad de reciclaje.
Aislamiento y purificación de la
enzima peroxidasa
Se usó un biorreactor prototipo UFC
/ CSA
La electroforesis SDS-PAGE reveló
una única banda (34kDa)
Conjugación covalente de peroxidasa a nanopartículas magnéticas
Las nanopartículas magnéticas
permiten la fácil separación del
entorno de reacción usando un
campo magnético.
Preparación y caracterización de MNP Fe3O4.
MNP de Fe3O4 se sintetizaron mediante una técnica de
coprecipitación usando iones Fe+3 y Fe +2
El color de los MNP cambió a negro, lo que indica la
síntesis de las nanopartículas.
Se observaron cambios en tamaño, forma, propiedades
magnéticas y la carga del área de superficie
Se inmovilizó la enzima peroxidasa
en MNP de Fe 3 O 4 modificados y
se usó para biorremediación de
aguas textiles residuales
Caracterización de la peroxidasa
inmovilizada.
Se introdujo grupos aldehído activos en la superficie
de la MNP.
Mediante TEM se observó una capa que rodeaba los
MNP indicando la inmovilización de la enzima.
El tamaño promedio es 15–25 nm
Sin diferencias significativas en la actividad
enzimática antes y después de la inmovilización.
Resultados y discusión
Estabilidad de la peroxidasa
- La forma libre se comparó
con la inmovilizada MNP
incubándose a diferentes
temp (10-100°C) durante 60
min.
- La enzima libre perdió más
del 95% de actividad a 60°C.
- La enzima inmovilizada de
40°C hasta 100°C perdió un
30% de actividad.
- La conjugación con MNP
protege a la enzima al
aumentar su rigidez.
Efecto del pH
- Ambas enzimas mostraron
la máxima actividad a pH 6.
- La peroxidasa libre
disminuyó su actividad a pH
inferior y superior de 6
- La peroxidasa con MNP se
mantuvo sin mayor cambio
a pH mayor a 6 y con un
descenso a un pH menor de
6.
Reutilización de la Biorremediación enzimática
peroxidasa inmovilizada de aguas residuales
- Se reutilizo durante 100 - En tubos de ensayo que
ciclos recogiéndola con un contenían agua residual
imán externo y se lavó con textil con tinte azo verde y
tampón fosfato. con tinte azo rojo se empleó
la enzima con MNP y para
- La peroxidasa mantuvo el
98% de actividad tras 30 ambas muestras el colorante
ciclos con un descenso del desapareció en 4 horas.
5% tras 100 ciclos - El proceso se repitió pero
con un volumen de 1L en
biorreactor PSB donde
ambos tintes se decoloraron
en 6 horas
 CONCLUSIÓN
La peroxidasa de Pseudomonas aeruginosa inmovilizada
con MNP mostró, en comparación a la enzima libre, una
mayor tolerancia a condiciones de estrés ambiental con
muy buena estabilidad y facilidad de reciclaje, además
decoloró con éxito las aguas residuales textiles con
colorantes azo a escala de laboratorio.
Preguntas:
• Qué tipo de enzimas son se emplean en el tratamientos
enzimáticos en la actualidad?
Se utiliza principalmente la familia de las oxido redactadas, como son
las peroxidasas (EC 1.11.1.7) y lacasas (EC 1.10.3.2), las cuales
catalizan la oxidación de compuestos contaminantes de familias
aromáticas, como son los plaguicidas órgano fosforados. Algunas
reacciones catalizadas por estas dos enzimas dan lugar a productos no
tóxicos y se vuelven biodegradados por la oxidación enzimática.
Preguntas:
• Cuáles son las ventajas de inmovilizar enzimas en el tratamiento de
aguas residuales?
Las enzimas inmovilizadas tienen las ventajas de una estabilidad
operativa a largo plazo, una fácil recuperación y reutilización en
aplicaciones industriales que mejoran el rendimiento del proceso y
reducen el costo general. Las nanopartículas son vehículos eficientes
para las enzimas inmovilizadas que mejoran la actividad y la
reutilización de las enzimas. Las nanopartículas magnéticas tienen
ventajas como la fácil separación del entorno de reacción utilizando
un campo magnético externo.