ASIGNATURA:

LABORATORIO CLÍNICO

Clase Teórica 11:

Laboratorio Microbiológico:
Infección de Tracto Urinario,
Hemocultivo, Mielocultivo,
Coprocultivo

ALFREDO GOYTENDIA CORTEZ

SEDE HOSPITAL HIPOLITO UNANUE
 INFECCION DEL TRACTO URINARIO (ITU)
La ITU, luego de las infecciones respiratorias, es la más frecuentes en el
ámbito hospitalario y comunidad; está definida por la Centers for Disease
Control and Prevention (CDC) como un proceso inflamatorio que implica la
invasión y multiplicación de microorganismos en el tracto urinario, con
presentación de disuria, tenesmo, dolor supra púbico, fiebre y urgencia al
orinar1

Las infecciones del tracto urinario ocurren en todas las personas independiente
de la edad, el sexo y el estado inmunológico, aunque se presentan con mayor
frecuencia en mujeres y en personas inmunocomprometidas2

1: Orrego Marin C, Henao Mejia C, Cardona Arias J. Prevalencia de infección urinaria, uropatogenos y perfil de susceptibilidad
antimicrobiana. Acta Med Colomb.2014; 39(4): 352-358.

2: Lopez Vargas J, Campuzano Maya G. El urocultivo: prueba ineludible para el diagnóstico especifico de la infección del tracto urinario y el
uso racional de los antibióticos. Medicina & Laboratorio.2013;19:211-242.
 INFECCION DEL TRACTO URINARIO (ITU)
La infección del tracto urinario (ITU) es una invasión patógena del urotelio que
produce una respuesta inflamatoria y abarca un espectro de cuadros clínicos que
afectan tanto al tracto urinario superior como al inferior

Las ITU se clasifican como complicadas o no complicadas basándose en la

anatomía del paciente, sus comorbilidades y su gravedad, y varían desde
cistitis autolimitada benigna hasta urosepsis3

3. de Toro-Peinado et al. / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2015;33(Supl 2):34-39

 SINDROMES CLINICOS

Rev. chil. infectol. v.18 n.1 Santiago 2001

PREVALENCIA Y FRECUENCIA

• Durante el primer año de Entre los 16 y 35 años, el riesgo

vida: hombres y mujeres es 40 veces mayor en las
tienen riesgo similar: 2% mujeres.

En la tercera edad hombres y

• En la etapa escolar, 6%
mujeres tienen el mismo riesgo
de las niñas tienen al
ya que los hombres tienen un
menos 1 episodio de ITU
mayor riesgo de sufrir ITU por
por año.
hiperplasia prostática.

McLaughlin SP, Carson CC. Urinary tract infections in women. Med Clin N Am. 2004;88:417-429.
 SIGNOS DE INFECCIÓN URINARIA
Varían con la edad de presentación
• Recién Nacidos: • Lactantes Pre-
– Hipotermia o fiebre escolares:
– Vomito – Diarrea
– Rechazo de la vía oral – Fiebre
– Signo de bacteriemia y sepsis – Vómitos
– Ictericia Tardía – Retraso Pondo-
– Retraso Pondo-estatural estatural

Escolares: Adultos:
- Diarrea – Fiebre - Vomito - Dolor en Flanco
- Dolor Abdominal - Poliuria/disuria - Fiebre
- Urgencia urinaria - Enuresis - Poliuria/disuria
- Retraso Ponderal-estatural - Urgencia urinaria
 INFECCION DEL TRACTO URINARIO (ITU)

ITU COMPLICADA
VERSUS NO
COMPLICADA
 TOMA DE MUESTRAS

• Rev. chil. infectol. v.18 n.1 Santiago 2001

 TOMA DE MUESTRAS
▶ Niños que controlan esfínteres
La muestra de elección es el chorro medio miccional.
El tiempo de retención deseado es de por lo menos 3
horas.
Niñas Se debe higienizar la zona genital,Se elimina el
primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estéril la
fracción siguiente (10-20 ml). Se recomienda orinar
separando los labios mayores.
Niños Se debe retraer el prepucio e higienizar el glande
y surco balano prepucial, Se elimina el primer chorro (10
ml) y se recolecta en frasco estéril la fracción siguiente
(más de 20 ml).
 TOMA DE MUESTRAS
Niños que no controlan esfínteres
▶ Bolsas colectoras para el estudio de urocultivo. Su
especificidad es muy baja: 0,62 contra 0,97 de la orina
obtenida por cateterismo vesical.
▶ Existen, al menos, tres alternativas. Recordar que la
mayoría de estas muestras no cumplen con el tiempo de
retención deseado. Se recomienda alguno de los
siguientes procedimientos:
▶ En el instante
▶ Punción suprapúbica
▶ Cateterismo
 TOMA DE MUESTRAS
•Punción suprapúbica Este procedimiento deberá ser
efectuado por médicos entrenados. Se reserva para casos
especiales, como neonatos graves, pacientes cuyos
urocultivos previos presenten resultados conflictivos,
sospecha de microorganismos de difícil desarrollo, etc.
Primeramente se verifica que el paciente presente un globo
vesical palpable, y se punza con aguja adecuada en la
zona ubicada 1 o 2 cm por encima de la sínfisis pubiana.
Se aspira la orina y se vuelca en frasco esteril
 TOMA DE MUESTRAS
▶ Cateterización Es el método de elección para pacientes con
cateterismo intermitente (vejiga neurogénica).
▶ Se puede utilizar para lactantes, ya que presenta la ventaja
de ser una toma más rápida y confiable cuando se realiza
por personal entrenado. Sin embargo, presenta el riesgo de
generar una ITU iatrogénica.
▶ Para efectuar este método se desinfecta la zona perineal, se
introduce la sonda por la uretra y se recoge la porción media
del chorro de orina que sale por la sonda. Tiene
especificidad del 80 %
 MUJERES y VARONES ADULTOS
▶ La muestra de elección es el chorro medio▶miccional.
.
▶ El uso de antisépticos está contraindicado porque puede resultar en una
reducción artificial del recuento de colonias.
▶ En ancianas y en embarazadas asintomáticas conviene tomar más de
una muestra para tener seguridad del grado de significación de los
hallazgos.
▶ El aseo genital debe ser realizado por otra persona en los siguientes
casos:
▶ Embarazo avanzado.
▶ Ancianos y personas con movilidad limitada.
▶ Bebés y niños sin control de esfínteres.
▶ Adultos sin control de esfínter.
▶ Personas con dificultad para seguir instrucciones.
 PACIENTES CON SONDA PERMANENTE
▶ Punción de la sonda
▶ Este procedimiento se utiliza en aquellos con sonda
permanente en los que no es posible retirar o reemplazar
la sonda. Se obtura la sonda con una pinza . Se espera
unos minutos, se desinfecta la parte externa de la sonda
en la zona proximal y se punza la sonda con aguja y
jeringa estéril. Se vuelca el contenido en forma aséptica
en un frasco estéril.
FASE ANALITICA
 FASE ANALITICA
▶ SEDIMENTO URINARIO: Centrifugar 10 ml de orina x 5 min.
▶ se considera que un sedimento de orina no es normal cuando una
gota del centrifugado de 10 ml (10 min. a 2.000 rpm) contiene
más de 5 leucocitos por campo de 400X.
▶ Estudios realizados en pacientes adultos ambulatorios y
pediátricos, donde se determinaron los valores predictivos del
sedimento de orina para la presunción de bacteriuria significativa
(BS, más de 10 UFC/mL).

• COLORACIÓN DE GRAM: Colocar 10 μl de orina bien mezclada

sin centrifugar sobre una lámina portaobjetos, y deje que se
seque al aire sin extenderla; determinar el número de
organismos por campo de aceite de inmersión.
• Un organismo observado a 1,000x correlaciona con un recuento
de colonias de 105/ en 1ml de orina.
• Determinar la prueba de actividad inhibitoria en la orina sin
centrifugar.
 SEDIMENTO URIANRIO

Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile.

TIRAS REACTIVAS (ESTERASA LEUCOCITARIA Y NITRITOS)
▶ Las pruebas de esterasa leucocitaria y nitritos, son parte de las
incluidas en las tiras reactivas para análisis de orina. La esterasa
leucocitaria es un indicador indirecto de la presencia de leucocitos y la
prueba de nitritos detecta a estas sustancias, que habitualmente
resultan de la degradación de los nitratos urinarios por parte de las
bacterias.
▶ Su sensibilidad es baja ya que detecta la presencia de más de 10
UFC/ml del microorganismo que pudiera estar en la orina.
▶ Por otra parte, la presencia de nitratos en la orina depende de la dieta
y hay microorganismos incapaces de reducir los nitratos. Su
combinación puede ser de utilidad como pruebas de screening en
poblaciones de baja prevalencia
 FASE ANALITICA
• MATERIALES
• Medios de cultivo
• Agar Sangre
• Agar MacConkey
• Agar Manitol Salado

• Suministros
• Método del asa de nicromo de plástico descartables
estériles.
• Tamaños:
• Asa de 1 μl para detección de recuento de colonias
mayores de 1,000 UFC/ml.
• Asa de 10 μl para la detección de recuento de colonias
entre 100 y 1,000 UFC/ml.
AGRA SANGRE
• Para el aislamiento, cultivo y
actividad hemolítica de
gérmenes difíciles.
• La base de Agar Sangre es
adecuada para aislar y cultivar
diversos microorganismos de
difícil crecimiento.
• Al añadir sangre, puede
usarse para descubrir la
actividad hemolítica
AGAR MC CONKEY
• El Agar MacCONKEY
• (C / CV, NaCl, 0,15% de
SALES BIOLÓGICAS y 1%
de LACTOSA)
• se utiliza para el
aislamiento de
coliformes y bacterias
entéricas
fermentadoras de
lactosa.
AGAR MANITOL SALADO
• Se usa para el aislamiento
selectivo y la diferenciación de
Estafilococos. El digesto
péptico del tejido animal y el
extracto de carne es la fuente
de aminoácidos y nitrógeno. El
manitol es la fuente de energía
de carbohidratos y el rojo fenol
es el indicador de pH. La
concentración del 7,5% de
cloruro sódico da como
resultado la inhibición parcial o
completa de organismos
bacterianos distintos de los
estafilococos.
FALSOS POSITIVO
FALSOS NEGATIVOS
 UROCULTIVO
falsos positivos

• Contaminación con secreción vulvovaginal

• Orina no refrigerada
• Contaminación de los antisépticos utilizados
• Errores de laboratorio
 UROCULTIVO
falsos negativos

 Tto ATB previo

• Arrastre de antisépticos en la higiene
• Obstrucción uretral completa
• Orinas con pH muy bajo <5 o muy alto>8
• Baja densidad urinaria (1003)
• Microorganismos inusuales que requieren
medios especiales
 E.COLI
• El agente etiológico más
frecuente de ITU en ambos
sexos es la Escherichia coli,
responsable del 75% a 80% de
casos; Fermentan lactosa ,
Colonias rosas o rojisas en
agar Mc Conkey
PROTEUS MIRABILIS
▶ Puede ser tan frecuente como
E. coli en niños mayores. En
hombres adultos también
aumenta su prevalencia y se
asocia a complicaciones
urolitiásicas debido a su
capacidad de hidrolizar la urea,
aumentando el pH y
favoreciendo así, la formación
de cálculos de estruvita y
apatita
▶ presencia de velos o películas de
crecimiento en el entorno de las
colonias. El fenómeno más
conocido de éstos es el de
“swarming”, observado en Proteus
spp.,
KLEBSIELLA PNEUMONIAE
 KLEBSIELLA PNEUMONIAE

▶ Suele ser más prevalente en las recurrencias que en los primeros

episodios de IU.
▶ También es de cierta frecuencia en la Infección intrahospitalaria
▶ Providencia spp. y Morganella morganii
▶ Se aíslan frecuentemente de pacientes con sonda de larga permanencia
y con tratamiento antibiótico previo.
STAPHYLOCOCCUS SAPROPHYTICUS
▶ Es el segundo microrganismo
causante de IU en mujeres
jóvenes. No descartarlo como
contaminante cuando se
encuentre en recuentos bajos, ya
que si no se identifica a nivel de
especie puede confundirse con
cualquiera de las otras especies
de Staphylococcus coagulasa
negativos contaminantes de piel.
S. saprophyticus es resistente a
novobiocina.
▶ Coagulasa negativa , no
fermenta manitol ,negativa la
prueba de xilosa y positiva las
de sacarosa y ureasa.
PSEUDOMONAS AERUGINOSA
▶ Se aíslan casi exclusivamente de pacientes
internados, sondados, o con algún otro
factor urológico predisponente, como
insuficiencia o trasplante renal, alteraciones
de las vías urinarias o enfermos sometidos a
instrumentación del tracto urinario.
▶ Agar Sangre En este medio todas las
cepas produjeron halos de color verdoso,
propios de una hemolisis parcial (β
hemolisis)
▶ Prueba de oxidasa positiva e indol
negativo.
CORYNEBACTERIUM UREALYTICUM
▶ Es un reconocido patógeno del tracto
urinario, que debido a su intensa actividad
ureásica, es capaz de alcalinizar
rápidamente la orina produciendo la
precipitación de cristales de fosfato
amónico magnésico, con posterior
formación de cálculos y su eventual
incrustación en la vejiga.
▶ Aunque este hecho ocurre generalmente en
pacientes mayores de 65 años, se ha
observado también en adultos jóvenes y
aún en niños con anomalías del tracto
urinario. C. urealyticum es una bacteria de
desarrollo lento (48-72h), colonias
redonadas y blanquesinas.
▶ Es ureasa-positiva (a los pocos minutos de
incubación) y glucosa y maltosa negativas.
Es característica su multirresistencia a los
antimicrobianos.
 CANDIDA
▶ Las levaduras pueden existir como saprófitas en genitales
externos y zona periuretral. Su presencia en la orina,
independientemente del recuento, siempre requiere una minuciosa
evaluación clínico-microbiológica para determinar su grado de
significación.
▶ Las levaduras son frecuentes en IU hospitalaria, principalmente en
enfermos sondados, en pacientes diabéticos y en personas que
reciben antibióticos o drogas inmunosupresoras.
▶ Candida albicans es la especie más frecuentemente aislada, pero
otras especies de Candida y otras levaduras también han sido
descritas.
HEMOCULTIVO
 INDICACION
• La detección de la bacteriemia y la
fungemia constituye una de las prioridades
del Servicio de Microbiología, dada su
importancia diagnóstica y pronostica.
• Situación clínica grave
• Alta morbilidad y mortalidad (del 20 al
50%)
• Consecuencias graves: “shock”,
insuficiencia multiorgánica, coagulación
intravascular diseminada (CID) debido a la
presencia de microorganismos y toxinas
(endotoxinas y exotoxinas) en el torrente
sanguíneo, muerte
• Identificación rápida de los patógenos
• El cultivo de la sangre (hemocultivo) puede
ayudar a proporcionar un diagnóstico
clínico
 INDICACION
• Síntomas de septicemia:
• Fiebre o hipotermia
• Escalofríos
• Hiperventilación (alcalosis respiratoria)
• Lesiones cutáneas
• Alteraciones del estado mental
• Diarrea
• Las manifestaciones más graves son:
• Hipotensión - CID (coagulación intravascular diseminada) debido a la
presencia de endotoxinas. Son lipopolisacéridos de la pared celular de las
bacterias gram negativas. Actúan como superantígenos, desencadenan la
CID por agotamiento del factor de coagulación XII.
• Insuficiencia de órganos importantes (fallo multiorgánico) - “shock” séptico
puede desencadenarse por endotoxinas y exotoxinas
SEPSIS NEONATAL
 INDICACION
• Bacteriemia: presencia de bacterias en la sangre de forma pasiva
tras rotura del endotelio capilar. Puede ocurrir frecuentemente tras
cepillado de dientes, relaciones sexuales, procedimientos dentales,
etc. Los microorganismos no se multiplican en el torrente sanguíneo
y son eliminados por los mecanismos de defensa. Bacterias

Septicemia o sepsis: las bacterias se multiplican en la sangre causando daño en

el hospedador. Liberan toxinas.
Se debe tener en cuenta la escasa cantidad de microorganismos presentes en la
sangre durante un episodio de bacteriemia, que suele oscilar entre 10 unidades
formadoras de colonias (UFC)/ml y 104 UFC/ml pudiendo ser incluso inferior a
0,1 UFC/ml en un 20% de los casos.
HEMOCULTIVO MANUAL
HEMOCULTIVO AUTOMATIZADO
 TOMA DE MUESTRA
• Volumen de muestra - La
mayoría de las
bacteriemias presentan
número bajo de
microorganismos
Adultos: 10 – 20 mL
sangre (mínimo 10 mL)
5.2. Volumen de la
muestra, número de
hemocultivos y ritmo de
recolección Lactantes y
niños pequeños: 1 – 5
mL
 TOMA DE MUESTRAS
• Número de hemocultivos
• Si el volumen de sangre es
adecuado, 2 ó 3 hemocultivos
suelen ser suficientes
• Ritmo de recolección
• 2 ó 3 hemocultivos separados por
una hora entre sí
• Pacientes graves (tratamiento
inmediato): 40 mL en dos tomas
simultáneas de 20 mL de dos
sitios de punción venosa
diferentes, con dos agujas y dos
jeringas
• Evaluación inicial de fiebre de
origen desconocido: 4
hemocultivos separados, 2 por
día en 2 días diferentes
 STAFILOCOCO AUREUS

• Es también agente de sepsis,

neumonías, endocarditis,
prótesis endovasculares e
infecciones del sistema
nervioso central. Algunas cepas
causan enfermedades
mediadas por toxinas, como
toxi-infecciones alimentarias,
síndrome del shock tóxico.
• Catalasa +
• Coagulasa +
• 86% resistente a penicilina.
• Fermentan manitol, glucosa,
lactosa y maltosa.
COPROCULTIVO
 COPROCULTIVO

▶ La diarrea puede definirse como el proceso que va acompañado de

eliminación frecuente de heces, disminución de su consistencia o ambas
cosas. Ante la sospecha de un cuadro de infección gastrointestinal debe
hacerse una detallada historia clínica y un correcto estudio microbiológico.
▶ Las principal utilidad que tiene este estudio, es la identificación de entero
bacterias, que son siempre las principales causantes de una enfermedad
gastrointestinal.
▶ E. Coli
▶ Vibrio cholerae,
▶ Shigella
▶ Salmonella,
▶ Campylobacter jejuni,
▶ Yersinia enterolitica,
MEDIO DE TRANSPORTE
• El medio de Cary Blair es una
modificación del medio de Stuart.
• Es un medio destinado
originalmente al transporte de
microorganismos fecales, que
también es utilizado con éxito para
el transporte de anaerobios. Entre
otros:
Neisseria gonorrhoeae
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Haemophilus influenzae
Neisseria meningiditis
Bordetella pertusis
Streptococcus pneumoniae
Shigella flexneri
Pasteurella pestis
Campylobacter Spp., etc.
SHIGELLA
 SHIGELLA
• Período de incubación: 1-2 días
• Dolor abdominal
• Fiebre
• Diarrea acuosa Después de 1 día
• Heces no acuosas con moco y sangre
• Evacuación se acompaña de pujo y tenesmo (espasmo rectal)

• El cuadro por lo general cesa a los 4-8 días.

• En los adultos, la mayoría de veces la fiebre y diarrea ceden de manera
espontánea en 2-5 días
• En niños y ancianos la pérdida de agua y electrolitos pueden producir
deshidratación, acidosis e incluso la muerte.
SALMONELLA
 SALMONELOSIS
• Forma más frecuente de salmonelosis.
• Síntomas: 6 y 48 horas siguientes a la ingestión de alimentos
contaminados.
• Náuseas
• Vómitos
• Diarrea no sanguinolenta
• Fiebre
• Espasmos abdominales
• Mialgias
• Cefalea.
• Forma aguda: afectación colónica.
• Los síntomas pueden persistir entre 2 días y 1 semana antes de la
resolución espontánea.
 IDENTIFICACIÓN SEROLÓGICA

▶ Antisueros para
identificar escherichia
coli (polivalente I, II, III)
▶ Antisueros para
identificar salmonella
del subgrupo I
▶ Antisuero para
identificar shigellas (A,
B, C y D)
▶ Antisuero para
identificar vibrio
cholerae
MIELOCULTIVO
 INDICACION
• El uso de mielocultivo como herramienta para la detección de
microorganismos causantes de infección está siendo sustituido por
métodos más simples y sensibles como los hemocultivos. Los casos
donde está demostrada con claridad la superioridad del mielocultivo
sobre los hemocultivos es en la detección de Salmonella typhi y Brucella
sp
TOMA DE MUESTRA
MIELOCULTIVO
GRACIAS