Cinética Microbiana Avanzada

Integrantes:
•Acevedo Cano Renzo
•Inca Román Pool
 Fermentación Microbiana
• El caso más simple:

C
A C+R
Donde:
A: substrato (alimento necesario)
C: microorganismo (m.o.)
R: producto (material de desecho)
Ejemplos de Fermentaciones Microbianas
• Fabricación de vino:

Uvas, cereales m .o. más + alcohol

frutas, papas, etc. m.o.

Envenenamiento por producto

• Tratamiento de agua de desecho

Material de m.o. más
+ productos de
desecho orgánico m.o. descomposición

Sin envenenamiento por producto

Aplicaciones:

INTERES EJEMPLO

Descomposición de A Tratamiento de aguas de

desecho
Producción de células C Crecimiento de proteína
celular para alimento
Material de desecho R Producción de penicilina
y otros antibióticos
 Fermentación con Ambiente Constante

CA
ln ( Cc/Cco)

Tiempo lag
t
 Fermentación con Ambiente Constante

• La velocidad de crecimiento de las células,

después del tiempo lag, está dada por la
ecuación de Monod

rC = kCACC
CA + CM
 Biorreactor de Lote
CC
Estacionaria

Crecimiento muerte
exponencial

lag

tiempo
Fases de crecimiento y estacionaria
• Las células crecen exponencialmente en un
ambiente uniforme
• En un sistema de lote, el medio cambia, por lo
que la velocidad de crecimiento también cambia
• La caida en el crecimiento celular se debe tanto a
 el agotamiento del alimento
 la acumulación de materiales tóxicos para la
célula
 Biorreactor de Flujo Mezclado
•Ambiente uniforme
CAo CA •Células no necesitan
CCo = 0 Cc adaptación
CRo = 0 CR •Velocidad de multiplicación
de las células constante

Ecuación de Monod:
rC = kCACC
CA + CM
 Expresiones Cinéticas
• La velocidad de multiplicación de las células
depende en general de:

 La disponibilidad de alimento
La producción de desechos que interfieren con
la multiplicación celular
Cinéticas que tienen en cuenta La
Inhibición por Substrato
S
Ecuación de Andrews   m
S2
KS  S 
y Noack: K is

  S 
S 1  
K
Ecuación de Webb:   m  is 

S2
KS  S 
K is

Ecuación de Aiba  S 

  m  
 S 
exp  

y cols:  KS  S   K is 
  S   S 
Ecuación de Tessier:    m exp    exp  
  K is   KS 

Ecuación de Tseng  S 
   m    K is ( S  SC )
Y Wymann:  KS  S 
 Cinéticas que tienen en cuenta La
Inhibición por Producto
 S 
Ecuación de Dagley y Hinshelwood:    m 
K
 S  S
(1  k  P)


Ecuación de Holzber y cols.:    m  k1  ( P  k2 )

 P 
   m 1  
Ecuación de Ghose y Tyagy:  Pmax 

 S 
  m    exp(k  P)
Ecuación de Aiba y Shoda:  KS  S 

 S  K ip 
Ecuación de Jerusalimsky   m  



 K S  S  K ip  P 
y Neronova:
n
 P  S 
   m 1  *   
Ecuación de Levenspiel:  P  K
 S  S 
 Otros Modelos Cinéticos

 S 
Ecuación de Monod:    m  
 KS  S 
rX

X
  S 
Ecuación de Tessier: 
   m 1  exp   

  KS 

 Sn 
Ecuación de Moser:    m  
n 
 KS  S 

 S 
Ecuación de Contois:   m  
 B X  S 
 Disponibilidad de Alimentos
• En forma análoga a la cinética enzimática, para el
caso de microorganismos:

A + Cinactiva Cfértil

Cfértil 2Cfértil + R

Cc,total = Cc,fértil + Cc,inactiva

 Disponibilidad de alimentos
• A alta CA
rR = kCC
• A baja CA
rR = kCCCA / CM

• A cualquier CA (Ecuación de Monod)

rR = kCCCA
CA + CM
 Expresión Cinética General
• Expresión de Monod más simple considerando
ambos factores:

-rA = rR = rC = kobs CCCA

CA + CM
Donde:
n
kobs = k 1 – CR
CR*
UTILIZACIÓN DE BIORREACTORES
AVANZADOS EN
LA DEGRADACIÓN ANAEROBIA DE
EFLUENTES VÍNICOS
METODOLOGÍA Y PLAN DE TRABAJO

El presente trabajo evalúa la aplicabilidad de dos

tecnologías avanzadas de crecimiento adherido en el
tratamiento anaerobio termofílico de vertidos de alta
carga orgánica, filtro anaerobio y lecho fluidizado,
analizando la influencia de las principales variables de
operación sobre la eficacia depurativa de ambos procesos.
La consecución de dicho objetivo general supone
profundizar en muy diversos aspectos relacionados con
cada tecnología específica.
MATERIAL Y MÉTODOS

La experimentación se desarrolla en reactores de laboratorio

tipo Filtro Anaerobio (FA) y Lecho Fluidizado (LF), operando
en la degradación anaerobia termofílica de vinazas de vino.
La temperatura de operación se mantiene a 55°C ± 1°C,
óptima del rango termofílico de temperaturas.
Características del influente

Se han utilizado vertidos procedentes de destilerías vínicas,

genéricamente conocidos como vinazas de vino. Las vinazas
fueron transportadas y mantenidas a 4°C antes de su uso. El
vertido fue diluido desde su concentración inicial de 30 g
DQO/L hasta los valores requeridos en los ensayos realizados
(15 g DQO/L).
Soportes materiales
Los soportes utilizados han sido tubos de plástico corrugado
(tipo FLOCOR-R) y perlas de vidrio sinterizado (SIRAN). Los
tubos de plástico corrugado presentan baja densidad real,
altísima porosidad y elevada superficie específica (450
m2 /m3 ), características adecuadas para su utilización
como material soporte no poroso en reactores de lecho fijo.
Por su parte, el SIRAN presenta una estructura superficial
rugosa y porosa formada por macro y microporos que
proporcionan una elevada área superficial y favorecen el
desarrollo bacteriano en toda la extensión del mismo. Su
utilización es muy adecuada en sistemas de lecho fijo y,
especialmente, en tecnologías fluidizadas.
Técnicas analíticas

El seguimiento del proceso de biodegradación requirió la

cuantificación diaria de los siguientes parámetros:
Demanda Química de Oxígeno (DQO), pH, Sólidos Totales y
Volátiles en Suspensión (SST y SSV), volumen de biogas
generado y composición del mismo (CH4 y CO2 ). Las
determinaciones de DQO, SST y SSV se realizan de acuerdo
con los “Métodos Estandarizados”
CINETICA DE BIOPROCESOS

La modelización cinética de los procesos se ha abordado

asumiendo un modelo cinético general propuesto por miembros
de la línea de investigación (Romero, 1991). El modelo parte del
supuesto de considerar el proceso de degradación de la materia
orgánica como una reacción autocatalítica en la que se produce un
crecimiento neto de la población bacteriana. El desarrollo
matemático del mismo conduce a una expresión general útil para
cualquier proceso fermentativo; no obstante, las elevadas
concentraciones de microorganismos presentes en sistemas con
retención de microorganismos (XVo/YX/S >> S0), implican que
algunos de sus parámetros se mantienen constantes, conduciendo
a la simplificación del modelo:
La velocidad de consumo de sustrato (-rs ) depende de 4
parámetros: µmáx, S0 , Snb y h. µmáx representa la
velocidad específica máxima de crecimiento de los
microorganismos; S0 corresponde a la concentración inicial
de sustrato (DQO) adicionada a cada ensayo. El parámetro
h representa la máxima cantidad de sustrato disponible en
el medio para formar biomasa. (expresado en unidades de
concentración de DQO mediante el coeficiente de
rendimiento Yx/s). Snb corresponde a la concentración de
sustrato no biodegradable en el ensayo.
Figura 1. Esquema de los equipos experimentales
utilizados: a) filtro anaerobio, b) lecho fluidizado
a) Valor máximo de la “Velocidad de Carga Orgánica” eliminada (VCOc);
b) Valor de la “Eficacia depurativa” para la máxima Velocidad de Carga
Orgánica aplicada (VCO0max)

c) Eficacia depurativa máxima; d) SVS

e) Evolución del pH; f) Velocidad de generación de
metano.
CONCLUSIONES

1.Las tecnologías de crecimiento adherido, filtro

anaerobio y lecho fluidizado, son adecuadas para la
depuración de vertidos de destilerías vínicas (vinazas)
en condiciones anaerobias termofílicas (55°C).

2.Se comprueba que los soportes “tubos de plástico

corrugado” y “perlas de vidrio sinterizado (SIRAN)”
son adecuados para llevar a cabo la degradación
anaerobia termofílica de vinazas de vino en reactores
de filtro anaerobio y de lecho expandido/fluidizado,
respectivamente.
3. Se deduce que la tecnología de lecho fluidizado,
independientemente del soporte, es más eficaz que
la de lecho fijo ya que favorece el contacto entre las
fases y disminuye notablemente las limitaciones por
transferencia de materia en el seno de la fase fluida,
favoreciendo el acceso a la superficie interna del
relleno.

4. Se comprueba que el modelo autocatalítico

propuesto por Romero (1991) es útil para modelizar
el comportamiento cinético de las distintas
tecnologías utilizadas.
¿Que es un biorreactor?
Es un recipiente que mantiene un ambiente biológicamente activo. Buscan
mantener ciertas condiciones ambientales propias del elemento que se
cultiva. Es el corazón de cualquier proceso de fermentación o conversión
enzimática. Es un dispositivo biotecnológico que debe proveer
internamente un ambiente controlado, que garantice y maximice la
producción y el crecimiento de un cultivo vivo. Externamente es la
frontera que protege el cultivo del ambiente externo contaminado.
 Parámetros
Cinéticos
FACTORES QUE AFECTAN EL
CRECIMIENTO Y LA BIODEGRADACIÓN
 Nutrientes
Los nutrientes deben estar disponibles de acuerdo a las necesidades de
crecimiento de las células. Sin embargo, la presencia de nutrientes en
cantidad adecuada no es suficiente, los nutrientes deben estar también en un
estado adecuado para su asimilación. Los medios de cultivo pueden ser
medios sintéticos o complejos. Los medios sintéticos son aquellos que tienen
una composición química bien definida. Los medios complejos contienen
materiales de composición no definida (por ejemplo, cuando se le agrega
extracto de levadura al medio de cultivo).
 Temperatura
La temperatura es uno de los factores
ambientales más importantes que
afectan al crecimiento y a la
supervivencia de los
microorganismos. Las especies
bacterianas crecen generalmente bien
en rangos estrechos de temperatura.
Las bacterias mesófilas crecen bien
entre 15 y 45°C , siendo el rango
óptimo entre 25 y 35 °C. Las
psycrófilas se desarrollan
adecuadamente debajo de los 20°C.
Las termófilas tienen un buen
desarrollo entre 45 y 65 °C.
 pH
El pH afecta en forma muy significativa la actividad microbiana. Cada
organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento
y normalmente posee un pH óptimo muy bien definido. La mayoría de los
ambientes naturales tienen valores de pH de 5.9 y los organismos con pH
equivalentes son los habituales. Sólo unas pocas especies pueden crecer
con un pH inferior a 2 o mayor a 10. Los que crecen a pH bajos se llaman
acidófilos. Los hongos, como grupo, tienden a ser más tolerantes al ácido
que las bacterias. Algunos microorganismos posee pH óptimos de 10-11 y
se conocen como alcalófilos. Debe quedar claro que independientemente
de las condiciones extremas en que vivan los microorganismos (pH del
ambiente extracelular), el pH intracelular debe permanecer cercano a la
neutralidad, con el objeto de impedir la destrucción de macromoléculas
internas.
 Disponibilidad de agua

El agua es el componente principal de las células, por lo tanto

un suministro de agua adecuado es indispensable para lograr
el mantenimiento y crecimiento microbiano. También el agua
es el medio de transporte de los sustratos (o contaminantes)
hacia el interior de las células, y también el transporte de los
compuestos que se producen dentro de la célula y que son
devueltos al medio de cultivo. Sin agua la actividad
microbiana no es posible.
Producción de penicilina por
fermentación sumergida
 ETAPAS PRELIMINARES AL
TANQUE FERMENTADOR

Lo primero que hacemos es un cultivo patrón

del hongo utilizando esporas liofilizadas.
• Cultivo por estría de P.chrysogenum.
• Cultivo en semillas de cereales.
• Tanque de propagación.
 ETAPA MICROBIOLOGICA DEL
PROCESO: TANQUE DE FERMENTACION

 Caldo de cultivo para la fermentación: se obtiene por infusión acuosa de maíz,

añadiendo de un 2 a un 3% de lactosa, y también se adicionan compuestos inorgánicos
(H,O,N,P,S,K,Mg,N,Fe,Cu,Zn), después de ajustar el pH entre valores de 4-5, el medio
de cultivo se pasa al fermentador.
 El fermentador está equipado con un agitador vertical, con un sistema de introducción de
aire esterilizado por filtración, y con serpentines para mantener la temperatura deseada.
 El hongo se introduce por medio de condiciones estériles con ayuda de aire a presión.
 Durante el crecimiento, el medio se esteriliza con vapor a presión y la temperatura se
mantiene entre 23-25°C. El aire estéril permite el crecimiento del hongo aerobio.
 Al cabo de unas 50-90 horas, el crecimiento se va haciendo más lento, lo que indica que
el hongo se ha desarrollado por completo
 ETAPAS POSTERIORES AL TANQUE
FERMENTADOR: BIORREACTOR
 Una vez que ha pasado el tiempo suficiente para que el
hongo se haya desarrollado por completo, se vacía el
fermentador de inmediato, y el caldo pasa a través de un
filtro de tambor rotatorio donde se separa el líquido del
micelio y de otras partículas sólidas.
 Posteriormente la masa se enfría a 5°C porque la penicilina
no es estable a la temperatura ambiente
 El caldo filtrado y enfriado se pasa a un tanque de pera. La
separación de la penicilina del caldo se basa en un sistema de
extracción líquido-líquido por medio de solventes adecuados
no miscibles con el agua. Posteriormente, por recirculación
se separa el solvente utilizado.
 Al final se tiene una solución acuosa concentrada y neutra de
la sal sódica de la penicilina que se esteriliza por filtración y
se evapora al vacío en presencia de butanol, a medida que el
agua se evapora, cristaliza el antibiótico, el butanol que se
queda en el evaporador, contiene una suspensión de cristales
de sal sódica, esto se separa por filtración o por
centrifugación. Los cristales se lavan con un solvente
adecuado para eliminar impurezas.