Universidad Católica de Santa María

Escuela Profesional de Ingeniería

Biotecnológica
Bioquímica I

PRÁCTICA 9
EXTRACCIÓN DE ADN E IDENTIFICACIÓN DE
SUS COMPONENTES
 Biomoléculas
C, H, O, N, P
Orgánicas

Elevado Peso
Ácido Nucleico
Molecular

Constituidas por:
NUCLEÓTIDOS
unidos por ENLACES
FOSFODIÉSTER
CLASIFICACIÓN
 Almacena y transmite la
información genética. Dirige
el proceso de síntesis de
proteínas.

ADN
Constituye el material
genético y forma los genes,
que son las unidades
funcionales de los
Función cromosomas.

Ejecuta las órdenes

contenidas en el ADN, se
ARN
encarga de sintetizar
proteínas.
 RIBOSA = ARN

Pentosas
DESOXIRRIBOSA
= ADN
Formado por 3
Nucleótidos Ácido Fosfórico
tipos moléculas
Bases púricas
Compuestos
Bases
Heterocíclicos de C
Nitrogenadas
yN
Bases
pirimidínicas
 Pentosa

NUCLEÓSIDO

Base
Nitrogenada

Enlace N- glucosídico
Nombrados con la terminación –osina si es una base
PURICA y –idina si es una base PIRIMIDINICA
Ejemplo: Adenosina, Timidina
 Nucleósido

NUCLEÓTIDO

Ácido
Fosfórico

Enlace Fosfodiester
Nombrados con la terminación –ilico si se
antepone la palabra Ácido
Ejemplo: Ácido Adenílico
 Intermediarios de Reacciones
Fosfatos de Adenosina metabólicas (consumo o
liberación de energía

Derivados de los nucleótidos de

interés biológico
Pirimidin nucleótidos (NAD,
NADP)

Coenzimas en reacciones de
óxido - reducción

Flavin nucleóidos (FAD, FMN)

Funciones de Nucleótidos

ADN (A, G, T, C)
DESOXIRRIBONUCLEÓTIDO

Polímero de nucleótidos unidos

Polinucleótidos
mediante enlaces fosfodiéster

ARN (A, G, C, U)
RIBONUCLEÓTIDO
 Primario

Secundario
Niveles
Estructurales
Terciario ó Primer
ADN Nivel de
Empaquetamiento
Elevado PM
Cuaternario o
Segundo Nivel de
Empaquetamiento
 •Secuencia de nucleótidos de una cadena de ADN.
•Presenta un esqueleto de fosfatos y pentosas del que parten las bases nitrogenadas (A, G, C, T)
•Información necesaria para la síntesis de proteínas.

Primario

•Disposición espacial que adoptan dos cadenas de polinucleótidos (hebras) dispuestas en doble hélice y
con las bases enfrentadas y unidas mediante puentes de hidrógeno.
•Presenta 2 cadenas de polinucleótidos antiparalelas, con los enlaces 3’–5’ orientados en diferente
sentido en cada una de las cadenas.
•Las dos cadenas son complementarias y están enrolladas una sobre la otra en una doble hélice.
•Las cadenas presentan un esqueleto de pentosas y fosfatos hacia el exterior, con las bases nitrogenadas
de ambas cadenas hacia el interior y enfrentadas estableciendo puentes de hidrógeno. A se une a T
mediante 2 puentes de Hidrógeno. A = T, C se une a G mediante 3 puentes de Hidrógeno.

Secundaria •La doble hélice da una vuelta cada 34 Å y la distancia entre 2 pares de nucleótidos es de 3.4 Å, por lo
que habrá 10 pares por vuelta, y su diámetro es de 20 Å.
•Cambios o mutaciones en la secuencia de nucleótidos alteran la información genética.
 • Consiste en la asociación de ADN con proteínas.
• Se encuentra en el núcleo de la célula eucariota formando la
cromatina

Terciaria

• Constituye la fibra de cromatina de 300 Å.

• El modelo más aceptado es la hipótesis de Solenoide: La fibra
de 100 Å se enrolla helicoidalmente presentando 6
nucleosomas por vuelta y las H1 se disponen formando el eje
de la hélice. En el núcleo de la célula toda la cromatina se
Cuaternaria encuentra como fibra de 100 Å y de 300 Å.
 Superempaquetamiento
• Con la fibra de 300 Å se reduce la longitud del ADN unas 40
veces. En los cromosomas se reduce unas 10000 veces,
gracias a niveles superiores de empaquetamiento (bucles,
rosetas y rodillos).
• La fibra de 300 Å forma una serie de bucles que posiblemente
estabilizan ciertas proteínas del eje del cromosoma. Muchos
autores consideran que en el cromosoma existe un eje de
proteína no histónico, el llamado armazón central o andamio,
sobre el que se anclan los bucles.
• Los dominios estructurales en forma de bucles constituyen el
tercer nivel de empaquetamiento. Se encuentran arrollados
sobre sí mismos, formando prominencias de unos 600 Å de
diámetro. Seis bucles formarían una roseta, y treinta rosetas
seguidas, dispuestas en espiral formarían un rodillo, que
constituye el cuarto nivel de empaquetamiento. El quinto y
último nivel, el cromosoma, estaría formado por la sucesión
de rodillos.
 Estabilidad

Desnaturalización Temperatura y pH

Propiedades del ADN

Si se reestablece las
Renaturalización condiciones normales el
ADN recupera estructura

Si se desnaturaliza una
mezcla de ADN de distintas
Hibridación
especies, en la
renaturalización aparecerán
 Desnaturalización del
ADN
• No es desnaturalizado por elementos alcalinos
• pH extremos desnaturalizan ADN (> 4 Y < 11)
• Tm = Temperatura de Fusión: Temperatura
necesaria para desnaturalizar al DNA a un 50%.
Estat emperatura rompe los puentes hidrogeno
• Las dos hebras del ADN se pueden abrir.
o Parcial
o Total: Las dos hebras se abren dejando a las bases desprotegidas
entonces la radiación de luz aumenta a 260 nm) (EFECTO
HIPERCRÓMICO)
 Polinucleótido
compuesto por
ribonucleótidos de A,
G, C y U.

Monocatenario excepto
en Virus

ARN

Transcripción:
Formación de ARN a
partir del ADN.

Traducción: Formación
de proteínas según la
información del ARN
mensajero.
 ARN •Formado en el núcleo y viaja hasta el citoplasma
•Portador de la información genética del ADN.
•Se forma con intervención de una ARN polimerasa II y atraviesa los poros

mensajero nucleares para asociarse a los ribosomas en el citoplasma y dirigir la síntesis de

proteínas.

ARN •Se sintetizan en el nucleoplasma por acción de una ARN polimerasa III y viaja
hasta el citoplasma.
•Su función es captar aminoácidos específicos en el citoplasma y transportarlos

transferencia hasta los ribosomas, donde, siguiendo la secuencia dictada por el ARNm, se
sintetizan las proteínas.

•Es el más abundante y se encuentra asociado a proteínas formando los

ARN ribosomas.
•Su función e formar los ribosomas donde se realizará la síntesis de proteínas.
•En células procariotas los ribosomas son 70S, formados por dos subunidades, 30S
ribosómico y 50S.
•En células eucariotas son 80S, formados por dos subunidades, 40S y 60S.
DIFERENCIAS ESTRUCTURALES
ENTRE ADN Y ARN
 Aislamiento de ADN
2 g de Timo + 25 mL de
Sol. Salina EDTA 20 mL Solución Salina de
Etanol (Precipita el DNA
(Quelato (precipita iones) Citrato (Disuelve DNA y
y RNA)
Ion Mg (Cofactor de la lo purifica)
DNAS)

ARRIBA : Fase Acuosa

Homogenizar MEDIO: Proteínas Reposo 30 mL
ABAJO: Fase inorgánica

2mL de Lauril Sulfato al Cloroformo – alcohol

25% (SDS) (Disuelve isoamílico (Disuelve
2mL de Acetato de Sodio
membranas y lípidos de membrana)
desnaturaliza proteinas) (FASE ORGÁNICA)

6.3 mL NaCl 5M (
Baño María a 60C por 15 Aumenta cargas ionicas
Isopropanol (Precipita el
min (Termina de de aminoácidos, ácidos
ADN pero no RNA)
desnaturalizar Proteínas) nucleicos relativamente
libres)
Identificación Desoxirribosa:
Reacción de Dische

Desorribosa
Difenilamina enlazada a
purinas
Identificación
Desoxirribosa
Desoxirribosa
Carbazol enlazada a bases
pirimidinas
 CH3COOH
H2SO4

COMPLEJO AZUL
(595 nm)

Difenilamina