Utilización de la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa para el diagnóstico

clínico (PCR)
Cristóbal Carrillo, Yasna Armijo, Alberto Hernández, Javiera Yáñez, Nicolás Arce, Bárbara Quintana.

Introducción Resultados
 La Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR, por sus siglas en inglés
(polymerase chain reaction) es una técnica de biología molecular desarrollada
en 1986 por Kary Mullis.

Fig. 1 Amplificación por clonamiento del ADN mediante la técnica PCR.

 Proclamada como uno de los avances científicos más importantes en la

biología molecular, el PCR revolucionó el estudio del DNA. Es una técnica
rápida y económica que tiene como finalidad amplificar y copiar
pequeños segmentos del DNA en estudio.
Fig. 2 Esquema de trabajo para la identificación de S. pseudintermedius

MALDI-TOF
 Su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil
identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de
una enfermedad.

 La importancia de estos hallazgos radica en que este

microorganismo puede identificarse erróneamente como S. aureus, ya
que también es coagulasa positivo. Además de la creciente resistencia
que ha presentado y el riesgo diseminación de genes de resistencia a
otras especies bacterianas.

Fig. 3 Identificación bacteriana mediante Espectrometría de masas

 El PEEC el año 2016 distribuyó una cepa de S. pseudintermedius y solo
el 67% de los laboratorios de alta complejidad lograron la correcta PCR-RFLP gen pta
identificación con género y especie.

 En Chile no existen reportes respecto de la prevalencia de S.

pseudintermedius en la población general no relacionada al área
veterinaria, ni menos población relacionada con el ambiente
hospitalario.
Fig. 4 Electroforesis en gel de agarosa de los productos de PCR del gen pta.
1. Ladder 100 pb. 2. Control positivo. 3. Digestión con MboI. 4. S. pseudintermedius origen
humana. 5. Digestión con MboI. 6. S. pseudintermedius origen animal. 7. Digestión con MboI. 8. S.

Objetivo
pseudintermedius origen animal. 9. Digestión con MboI. 10. S. pseudintermedius origen animal. 11.
Digestión con MboI. 12. Ladder 100 pb.

Determinar la prevalencia de portación nasal de S. Electroforesis en campo pulsado (PFGE)

pseudintermedius en estudiantes universitarios del área de la salud,
que asisten a centros hospitalarios como práctica clínica.

. Material y Método

Año 2017
176 muestras de Identificación bioquímica:
hisopado nasal Coagulasa,
Estudiantes DNAasa, Pyr Confirmación: Fig. 5 Identificación clonal de las cepas de S. pseudintermedius mediante Electroforesis
universitarios en manitol sal, Susceptibilidad: MALDITOF de Campo Pulsado. La PFGE fue realizada con enzima de restricción SmaI, utilizando
oxacilina de 1ug/ml equipo CHEF DR III, BioRad, de acuerdo a protocolo estandarizado ISP
practica clínica y con PCR-RFLP
y/o Cefoxitina 30ug/ml
Secuenciación gen
perro de mascota
Obtención de muestra animal 16RNAr Conclusiones
PFGE
 La prevalencia de portación nasal de S. pseudintermedius en
estudiantes universitarios del área de Salud fue de un 0.6%
(1/176).

Bibliografía  La identificación por PCR-RFLP permitió confirmar identificación

de S. pseudintermedius a diferencia de lo obtenido por MALDITOF y
1. Van Hoovels L, Vankeerberghen A, Boel A, Van Vaerenbergh K, De Beenhouwer H. First case of Staphylococcus el estudio de genes ribosomales 16s.
pseudintermedius infection in a human. J Clin Microbiol. 2006;44(12):4609–12.

2. Starlander, G., Börjesson, S., Grönlund-Andersson, U., Tellgren-Roth, C., & Melhus, Å. (2014). Cluster of
 Este es el primer reporte en Chile de portación de
Infections Caused by Methicillin-Resistant Staphylococcus pseudintermedius in Humans in a Tertiary S. pseudintermedius en población sana, no relacionada al ambiente
Hospital. Journal of Clinical Microbiology, 52(8), 3118–3120. http://doi.org/10.1128/JCM.00703-14 veterinario, lo cual es una señal epidemiológica ya que podría
constituir un potencial patógeno zoonótico emergente con impacto
Agradecimientos: TM Marcela Moraga - GALENICA en la comunidad y la atención en salud.