UNIDAD II

RECUPERACIÓN DEL PRODUCTO

CENTRIFUGACIÓN
 Fundamentos

La separación de células,
detritus, materiales celulares
sólidos o macromolécuals se
puede llevar a cabo por
sedimentación, filtración,
floculación o centrifugación
Fundamentos
La separación se basa en tamaño, forma y densidad de las
partículas o macromoléculas a separar al someterlas a un campo
gravitacional inducido. La separación solo es posible si el material
disperso en más denso que el medio en el cual esta dispersado
Fundamentos
Fundamentos

Tipos de Centrifugación

 Laboratorio
 Preparativa
 Ultracentrifugación
 Preparativa
 Analítica
 Fundamentos
Centrifugas de laboratorio.
Volumen 1 – 5000 mL. Velocidad de rotación: 1 000 – 5 000 rpm
 Fundamentos
Centrifugas de laboratorio.
Fundamentos
Campo gravitacional inducido
𝒓𝝎𝟐 𝟐𝝅𝒓𝒏𝟐
𝑮= =
𝒈 𝒈
Donde:
r = distancia desde el eje de rotación (m)
𝝎 = velocidad angular (rad/s)
g = aceleración de la gravedad (m/s2)
n = velocidad rotacional (s-1)
 Tiempo de sediementación
𝒌
𝒕=
𝑺

Donde:
t = Tiempo de sedimentación total (s)
S = coeficiente de Svedberg del material sedimentado (10-13 s)
k = k-factor de la centrifuga
 Tiempo de sedimentación
𝒍𝒏(𝒓𝒎𝒂𝒙 − 𝒓𝒎𝒊𝒏 )
𝒌 = 𝟐. 𝟓𝟑𝒙𝟏𝟎𝟏𝟏
𝒓𝒑𝒎𝟐𝒎𝒂𝒙

Donde:
rmax = distancia radial desde el eje hasta el fondo del tubo
(cm)
rmin = distancia radial desde el eje a la parte superior del
tubo (cm)
rpmmax = máxima velocidad de rotación (min-1)
 Coeficiente de sedimentación

Coeficientes de sedimentación de algunos materiales biológicos

 Coeficiente de sedimentación
Se centrifugaron celular bacterianas usando tubos de centrifuga de
5 cm de largo usando centrifuga de rotos angular el cual mantiene
los tubos en un ángulo de 60 grados con respecto al eje de
rotación. La parte superior del tubo esta a 5 cm del eje de rotación.
Fueron necesarios 15 minutos a una velocidad de rotación de 10
000 rpm para completar la sedimentación de las células. Calcule el
coeficiente de sedimentación de las células
Centrifugación preparativa
 Centrifugación preparativa
Velocidad terminal en un fluido por acción de la gravedad.
En el campo gravitatorio las partículas sedimentan en el régimen
de Stokes (Re < 0.1).

La fuerza de arrastre + fricción viene dada por la ecuación de

Stokes

𝑭𝑫 = 𝟑𝝅𝝁𝒅𝒖
 Centrifugación preparativa
𝑭𝑫 = 𝟑𝝅𝝁𝒅𝒖

Donde:

FD = fuerza de arrastre de Stokes (N)

µ = Viscosidad (Pa s)
u = velocidad (m/s)
 Centrifugación preparativa
Con un volumen de partícula dado por:

𝝅 𝟑
𝑽𝒑 = 𝒅
𝟔

Donde:

Vp = volumen de partícula (m3)

µ = diámetro de la partícula (m)
 Centrifugación preparativa
Suponiendo que se trata de partículas esféricas y de densidad
mayor a la del agua, la fuerzas que actúan en la dirección del
movimiento son:
 El peso, con sentido hacia el centro de la tierra

 El empuje de Arquímides, con sentido contrario al peso

 La fuerza de arrastre de Stokes, en sentido contrario a la

velocidad
 Centrifugación preparativa
En sedimentación se cumple la segunda Ley de Newton

𝒅𝒖
𝑽𝒑 𝝆𝒑 𝒈 − 𝑽𝒑 𝝆𝒈 − 𝟑𝝅𝝁𝒅𝒖 = 𝑽𝒑 𝝆𝒑
𝒅𝒕

Donde:
ρp = densidad de la partícula (kg/m3)
ρ = densidad del fluido (kg/m3)
 Centrifugación preparativa
Velocidad de caída libre o terminal (sedimentación a velocidad
constante)

𝒅𝟐 𝒈
𝒖𝒕 = 𝑽𝒈 = 𝝆𝒑 − 𝝆
𝟏𝟖𝝁

Donde:
µt = velocidad de caída libre o terminal (m/s)
Vg = velocidad de caída libre o terminal en agua (m/s)
 Centrifugación preparativa
La ecuación anterior es valida solo si:

 Las otras partículas no lo impidad

 No haya difusión
 La paredes no entorpezcan
 Se cumpla el régimen de Stokes
 Centrifugación preparativa
Movimiento de una partícula en un campo centrifugo.
Sobre una masa puntual, m (kg), la fuerza centrifuga, Fc (N) vale

𝑭𝒄 = 𝒎𝝎𝟐 𝒓

Aplicando la segunda ley de Newton

𝒅𝒓 𝒅𝟐 𝒅𝒓
𝑽𝒑 𝝆𝒑 𝒈 − 𝑽𝒑 𝝆𝒈 − 𝟑𝝅𝝁𝒅 = 𝑽𝒑 𝝆𝒑
𝒅𝒕 𝒅𝒕𝟐
 Centrifugación preparativa
Movimiento de una partícula en un campo centrifugo.
Sobre una masa puntual, m (kg), la fuerza centrifuga, Fc (N) vale

𝒅𝒓 𝒅𝟐 𝝆𝒔 − 𝝆 𝒓𝝎𝟐
=
𝒅𝒕 𝟏𝟖𝝁

𝝎𝟐 𝒓
𝑽 = 𝑽𝒈
𝒈
 Centrifugación preparativa
Tiempo de sedimentación en una centrifuga.
Separando variables e integrando la ecuación de la segunda ley de
Newton entre t = 0, r = r0 y t = t y r = R (fondo del tubo o cualquier
otro radio)
𝝎𝟐 𝑹
𝑽𝒈 𝒕 = 𝒍𝒏
𝒈 𝒓𝟎

𝑽(𝒓) 𝒓𝝎𝟐
=
𝑽𝒈 𝒈
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
Sección de una centrifuga tubular
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
Componente axial del vector velocidad

𝒅𝒛 𝑸
𝑽𝒛 = =
𝒅𝒕 𝝅(𝑹𝟐𝟎 − 𝑹𝟐𝟏 )

Componente de sedimentación radial

𝒅𝒓 𝒅𝟐 𝝆𝒔 − 𝝆 𝒓𝝎𝟐
𝑽𝒓 = =
𝒅𝒕 𝟏𝟖𝝁
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
La ecuación diferencial de la trayectoria se calcula con el cociente
de los dos escalares

𝒅𝒓 𝒓𝝎𝟐 𝝅(𝑹𝟐𝟎 − 𝑹𝟐𝟏 )

= 𝑽𝒈
𝒅𝒕 𝒈 𝑸

Separando variables, integrando y despejando Q se obtiene

 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma

𝟐 𝟐 𝟐
𝝅𝝎 𝑳(𝑹𝟎 − 𝑹𝟏 ) 𝟐𝝅𝝎𝟐 𝑳𝑹𝟐𝒎
𝑸 = 𝑽𝒈 = 𝑽𝒈 = 𝑽𝒈 𝚺
𝑹𝟎 𝒈
𝒈𝒍𝒏
𝑹𝟏

Donde :

𝟐 𝟐
𝟐
𝑹𝟎 − 𝑹 𝟏
𝟐𝑹𝒎 =
𝑹𝟎
𝒍𝒏
𝑹𝟏
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
Es importante recordar el significado de cada termino:

Vg = función de la partícula y del fluido (tamaño de la partícula,

densidad de la partícula y el fluido, viscosidad)

Σ = función de la maquina (longitud, radios de trabajo, angulo,

distancias, rpm)

Q = Caudal equivalente de un sedimentador por gravedad que separa

partículas que sedimentan en una superficie de Σ m2 a una velocidad
Vg
Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
Ejemplo: calculo de una centrifuga tubular a partir de datos de
laboratorio.

Se quiere saber que caudal de cierta suspensión puede tratar un

centrifuga industrial tipo cesta tubular, para lo cual se hacen
pruebas en el laboratorio con una centrifuga de tubos basculantes
con la misma suspensión. La centrifuga de laboratorio tiene las
siguientes características:
 Centrifuga de cesta tubular. Valor Sigma
𝑹𝟏 + 𝑹𝟐
𝑹𝒂𝒅𝒊𝒐 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 = = 𝟏𝟎
𝟐

𝑫𝒊𝒔𝒕𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒅𝒆 𝒔𝒆𝒅𝒊𝒎𝒆𝒏𝒕𝒂𝒄𝒊ó𝒏: 𝑹𝟐 − 𝑹𝟏 = 𝟏𝟐𝒄𝒎

El tiempo de clarificación en el laboratorio es de 4 min. La

centrifuga industrial tiene un valor sigma de 1 200 m2. Calcule el
caudal que podría tratar
 Centrifuga de discos

Número de discos (Z):

30 – 200
Centrifuga de discos
Centrifuga de discos
Donde:
r1 = radio de entrada de la
partícula (m)
r2 = radio de salida de la partícula
(m)
θ = Angulo de los conos con
respecto al eje de rotación
a = distancia entre cada cono (m)
Q = caudal (m3/s)
n = numero de espacios entre cada
cono (Z – 1)
Centrifuga de discos

𝟐𝝅 𝒁 − 𝟏 𝝎𝟐 𝒄𝒐𝒕𝜽 𝟑
𝚺= (𝑹𝟏 − 𝑹𝟑𝟐 )
𝟑𝒈
 Centrifuga de discos. Ejemplo de aplicación
En las etapas iniciales para la producción de insulina humana, hay que
hacer un proceso de clarificado para recuperar los cuerpos de inclusión y
el precipitado de proinsulina.

Se dispone de una centrifuga de discos con las siguientes características:

número de discos = 201, angulo θ = 50°, radio exterior r1 = 0.25 m, radio
interior r2 = 0.08 m, a = 1 mm, máxima frecuencia de rotación = 5 000
rpm.
 Centrifuga de discos. Ejemplo de aplicación
La suspensión que se quiere separar tiene las siguientes características:
densidad del medio líquido = 1 025 kg/m3, densidad de los solidos =
1 090 kg/m3, viscosidad del líquido 31 mPa.s, concentración del producto
disuelto = 1 g/L, diámetro de las células = 2 µm, concentración de células
= 2.5 % p/p, alimentación = 25 000 Kg a tratar en 5 horas

Calcular la capacidad de la centrifuga para la suspensión que se quiere

separar. Y ¿Cuántas centrifugas trabajando en paralelo se requieren para
procesar la alimentación en 5 horas?
 Determinación de sigma a partir del caudal de ruptura

Una empresa quiere calcular el valor sigma de una centrifuga tubular

de que compró de segunda mano. Para ello centrifuga un suspensión
de levadura a 500 G y determina el caudal de ruptura (El caudal de
ruptura es aquel en el que todas las partículas son retenidas por
sedimentación, por arriba de este valor las partículas empiezan a
escapar con el líquido). La ruptura se produce cuando el caudal llega
a 10 L/min. En estas condiciones, la velocidad de sedimentación de la
levadura vale V = 100 µm/s. A partir de estos datos determine el
valor siga de la centrifuga.
 Efecto del tratamiento de la alimentación en la
capacidad de una centrifuga
Se quiere utilizar un centrifuga de cesta tubular para concentrar una
suspensión de E. Coli antes de pasar a su disrupción. La cesta tiene
las siguientes dimensiones: 12.7 cm de radio 73 cm de longitud. La
frecuencia de rotación es de 16 000 rpm y la capacidad es de 200
L/h. a) Calcule la velocidad Vg de E. Coli; b) Después del proceso de
disrupción, el tamaño de las células se reduce a la mitad y la
viscosidad aumenta cuatro veces. Calcule la reducción de capacidad
de la maquina
 Rendimiento de una centrifuga
La teoría sigma no se cumple totalmente, por lo que son necesarios
factores de corrección. El factor más importante (Alfa Laval) es el
rendimiento (η)con respecto al caudal teórico.

𝑸𝒓𝒆𝒂𝒍
𝜼= 𝑸𝒓𝒆𝒂𝒍 = 𝜼𝑸 = 𝜼𝑽𝒈 𝚺
𝑸
Rendimiento de una centrifuga
 Rendimiento de una centrifuga
Se quiere separar en continuo un precipitado (tamaño de partícula =
10 µm) de una solución. El caudal de la suspensión es de 5.5 m3/h y
contiene un 5 % en precipitado. Los datos son: densidad de la
partícula = 2 300 kg/m3, densidad del fluido = 1 050 kg/m3,
viscosidad del líquido = 4 mPa.s. En principio se quiere utilizar una
celda de cesta continua (rendimiento de 75 %). Calcule los valores
de sigma teórico y real
 Escalamiento
Escala Piloto → Escala industrial

Condiciones:
1) El mismo tipo de centrifuga en ambos casos

2) La misma geometría

3) Idénticos valores fluidodinámicos y rendimientos

𝑸𝒓𝒆𝒂𝒍 𝑸𝒓𝒆𝒂𝒍
=
𝚺 𝟏
𝚺 𝟐
 Escalamiento
Selección de una centrifuga
1) La centrifugación es aplicable si en el laboratorio se puede
realizar la sedimentación en un tiempo máximo de 10 minutos a
3000 G.

2) Si la velocidad Qreal/Σ es inferior a 10-8 m/s, hay que considerar el

tratamiento de la suspensión mediante floculación para aumentar
el tamaño de partícula. Considerar el cambio de Vg debido al
cambio de tamaño de partícula y viscosidad del medio
 Ultracentrifugación
La ultracentrifugación se utiliza para determinar:
 Peso molecular de macromoléculas naturales o sintéticas

 Peso de partículas intracelulares

 Coeficientes de sedimentación

 Coeficientes de difusión

Velocidades de giro de rotor de 70 000 rpm. Aceleraciones de hasta

600 000 G. Puede ser analítica o preparativa
Ultracentrifugación
 Ultracentrifugación. Coeficiente de sedimentación
𝑽
𝒔 = 𝟐
𝝎 𝒓

Donde:
V = la velocidad que adquiere la partícula con respecto al
campo existente en r (m/)
s = coeficiente de sedimentación (s)
S = Svedberg (10-13s)
 Ultracentrifugación. Coeficiente de sedimentación

𝟐𝑹𝟐𝒑 (𝝆𝒑 − 𝝆)
𝒔=
𝟗𝝁

Esta función expresa el coeficiente de sedimentación en función

de las propiedades de la partícula y del fluido
 Ultracentrifugación. Coeficiente de sedimentación
Ejemplo:
Se quiere determinar el tiempo para clarificar un suspensión de
ribosomas 70 S utilizando una centrifuga que gira a 10 000 rpm. La
distancia radial es de 1 cm y el radio del menisco inicial es de 4 cm.
El medio de sedimentación es agua (1 cP, densidad = 1 g/cm3).