Acción de la DNA

polimerasas
DNA polimerasa I
• La primera enzima descubierta que podía catalizar la síntesis de DNA,
y que se llama actualmente DNA polimerasa I, fue aislada y purificada
en E. coli por Arthur Kornberg y sus colegas en 1957. La reacción
general que cataliza esta enzima es:
• 𝑑𝑁𝑇𝑃 + (𝑑𝑁𝑀𝑃)𝑛 ⇌ (𝑑𝑁𝑀𝑃)𝑛+1 +𝑃𝑃𝑖
• Donde:
• dNTP = desoxirribonucleósidos trifosfato, dATP, dGTP, dCTP y
dTTP
• (dNMP) = DNA preformado con n o n+1 mononucleótidos
• PPi = pirofosfato
 Formación de complejos con el nucleótido, y
la presencia de “DNA preformado”
• en primer lugar, el DMA se utiliza como molde del mensaje que va a
ser copiado.
• En segundo lugar, el DNA preformado debe tener un segmente
cebador con el grupo 3’-hidroxilo libre.
• La energía de esta reacción la proporciona el pirofosfato liberado PPi,
una molecula reactiva que rápidamente es hidrolizada con liberación
de energía dando como productos dos moléculas de ortofosfato: Pi
(PPi + H2O →2 Pi).
Figura 11.6: Acción de la DNA polimerasa I. las dos molecualas de DNA preformado sirven para dos fines: un DNA sirve
como molde (en gris) del mensaje que va a ser copiado, el otro actúa como cebador (en gris oscuro) para la unión de
los nucleótidos añadidos.
DNA polimerasas II y III
• En el transcurso de los estudios realizados en células de E. coli
mutantes se descubrieron otras dos DNA polimerasas a las que se les
llamó DNA polimerasa II y III.
• La DNA polimerasa III es la principal enzima de replicación en todas
las células de E. coli.
TABLA 11.1: comparación de las propiedades de estas tres DNA polimerasas
FIGURA 11.7: Actividades exonucleasas de la DNA polimerasa I (a) actividad 3’→5’ exonucleasa; (b) actividad 5’→3’
exonucleasa.
 Fragmentos de Okazaki
• Al estudiar la replicación del ADN, las personas que investigaban esto, se
fueron dando cuenta de que la síntesis del nuevo ADN, usando de molde el
antiguo, no parecía ser tan fácil como hacer una simple fotocopia. La
cadena líder se replica de una forma más o menos sencilla, pero cómo se
replicaba la cadena retardada seguía siendo un misterio.

• En 1968, Okazaki descubrió unas estructuras a las que se llamaron

fragmentos de Okazaki, que ayudaban a resolver esta incógnita. Los
fragmentos de Okazaki son cadenas cortas que se forman durante la
replicación del ADN en la llamada "duplicación discontinua", y que se dan
en la hebra rezagada.

• Este descubrimiento supuso un gran avance para la Biología y Genética

Molecular.

Tsuneko Okazaki, natural de Japón, nació

en 1933, y fue a la Universidad de
Nagoya, y acabó siendo la primera mujer
en ser profesora de esta universidad.
FIGURA 28.3: El modelo semidiscontinuo para la
replicación del ADN. El ADN recién sintetizado se
muestra en rojo. (a) Síntesis de la cadena principal y
rezagada. (b) Síntesis de ambas cadenas llevada a
cabo por una ADN polimerasa dimérica situado en
la horquilla de replicación. Debido a que la ADN
polimerasa debe leer la cadena de la plantilla en el
3’ → 5’ dirección, el hilo parental 5’ → 3’ debe
envolverse en forma de trombón.

FIGURA 11.8: acercamiento de una horquilla de

replicación donde se muestra la inciciación de la
hebra conductora continua y la hebra retardada
discontinua (fragmento de Okazaki)