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PARA HEMOGLOBINA
GLICOSILADA
Integrantes: Challgua Cabrera Franz Emerson
Colque Gonzales Paola Andrea
Rios Gonzales Juan Pablo
Docente: MSc. Ing. Pablo Porcel Bustamante
INTRODUCCIÓN
La hemoglobina glucosilada (hemoglobina A1c, Hb1c, HbA1c, o
A1c) es un examen que mide la cantidad de hemoglobina que se
glucosilada en la sangre, y brinda un buen estimado de qué tan
bien está siendo tratada la diabetes mellitus (DM) durante los
últimos 3 meses. En general, cuanto más alto sea el nivel de
HbA1c, mayor será el riesgo para el paciente de desarrollar
complicaciones oculares, renales, vasculares y de los nervios
periféricos.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
• Recopilar información sobre los métodos y sistemas automatizados con los cuales se puede
obtener medidas de la hemoglobina glicosilada (HbA1c), así mismo sus aplicaciones en el
área médica y entender el funcionamiento de los equipos que miden este parámetro.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Definir y explicar los conceptos básicos de la hemoglobina.
• Investigar los métodos de medición de la hemoglobina glicosilada.
• Estudiar los diferentes tipos de métodos que emplean cada equipo.
• Comprender el modo de operación de los equipos para obtener Hba1c de una muestra de
sangre.
• Describir el funcionamiento de cada equipo y el procedimiento de medición del mismo
GLÓBULOS ROJOS
También eritrocitos o hematíes,
son los elementos celulares más
abundantes de la sangre y los que
le confieren el color rojo
característico. Se presentan en
condiciones normales, como
discos ligeramente ovalares,
privados de núcleo. Su diámetro
oscila entre 7 y 8 micras y su
cantidad oscila alrededor de
5.000.000 por mm3 en el hombre
y 4.500.000 en la mujer.
HEMOGLOBINA (Hb)
Es una proteína globular, que está
presente en altas concentraciones
en los glóbulos rojos y se encarga
del transporte de O2 del aparato
respiratorio hacia los tejidos
periféricos; y del transporte de CO2
y protones (H+) de los tejidos
periféricos hasta los pulmones para
ser excretados. Los valores normales
en sangre son de 13 – 18 g/ dl en el
hombre y 12 – 16 g/ dl en la mujer.
ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA
• La hemoglobina es una proteína con estructura
cuaternaria, es decir, está constituida por cuatro
cadenas polipeptídicas: dos α y dos β
(hemoglobina adulta- HbA); dos α y dos δ
(forma minoritaria de hemoglobina adulta-
HbA2- normal 2%); dos α y dos γ (hemoglobina
fetal- HbF).
• Cadena polipeptídica alfa: 141 aminoácidos
• Las no alfa(βγδ): 146 aminoácidos
ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA
Cada cadena α está en
contacto con las
cadenas β, sin embargo,
existen pocas
interacciones entre las
dos cadenas α o entre
las dos cadenas β entre
sí.
GLICOSILACIÓN GLICACIÓN
La glucosilación o glicosilación, es una La glicación o glicación, describe la
reacción química enzimática post- modificación post-traduccional de los
traduccional, que tiene como fin la grupos amino de las proteínas por la
formación de una proteína conjugada acción de azúcares reductores, sin
(glicoproteína). participación enzimática.
Este tipo de reacción hay la Consiste en la unión de grupos amino
participación de enzimas que primarios de aminoácidos, péptidos y
transfieren oligosacáridos sobre una proteínas con el grupo carbonilo de los
determinada proteína. azúcares reductores
HEMOGLOBINA GLICADA
• La hemoglobina glicada o glicohemoglobina,
más conocida con la sigla HbA1c, hemoglobina
A1C o simplemente A1C, de acuerdo con la
definición de la International Federation of
Clinical Chemistry (IFCC) es un término genérico
que se refiere a un grupo de sustancias que se
forman a partir de reacciones bioquímicas entre
la hemoglobina A (HbA) y algunos azúcares
presentes en la circulación sanguínea.
HEMOGLOBINA GLICADA
• En condiciones normales el
eritrocito vive en la circulación un
promedio de 120 días
• Está formada por dos dímeros de
globina que en el adulto
corresponden a la HbA (ααββ)-97%
• A la HbA2 (ααδδ), que comprende
menos del 2,5%,
• Hemoglobina fetal (HbF) (ααgg),
que representa menos del 1%
HEMOGLOBINA GLICADA
• La HbA1 que corresponde a la
hemoglobina que ha sido fruto
de la glicación no-enzimática y la
Hb0 (hemoglobina “cero”) que
corresponde la fracción no
glicada.
• HbA1a, HbA1b y Hba1c, siendo
esta última el principal
componente (aproximadamente
el 80 % de la HbA1).
TIPOS DE HEMOGLOBINAS GLICADAS
PRODUCTO
REACCION
FINAL
HbA1a1 Glicación con fructuosa 1, difosfato
HbA1a2 Glicación con glucosa 6 fostato
HbA1b Glicación con ácido pirúvico
HbA1c Glicación con glucosa
Denota la fracción lábil de la HbA1c, o la fracción
L HbA1c
aldimina
Denota la fracción estable de la HbA1c, o la fracción
S HbA1c
cetoamina
CÓMO SE MIDE Y QUE SIGNIFICAN
LOS VALORES DE LA HbA1c?
• La prueba de HbA1c es un
examen de sangre para
la diabetes tipo 2 y prediabetes.
Mide el nivel promedio
de glucosa o azúcar en la
sangre durante los últimos tres
meses. Los médicos pueden usar
la prueba HbA1c sola o en
combinación con otras pruebas
de diabetes para hacer un
diagnóstico.
METODO DE REFERENCIA DE
LA IFCC
El método de referencia
de la IFCC (IFCC-RM)
parte del concepto de
trazabilidad metrológica.
Se mezclan HbA1c y
HbA0 puras para
preparar los
calibradores principales
que se usarán para
calibrar el IFCC-RM
METODO DE REFERENCIA DE
LA IFCC
• Los eritrocitos se
enjuagan y se lisan, y
se realiza la escisión
enzimática. Los
hexapéptidos
resultantes se
cuantifican, bien con
espectrometría de
masas-HPLC o con
electroforesis capilar-
HPLC.
METODOLODÍAS DE
ENSAYO HbA1c
MÉTODOS DE SEPARACIÓN- CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IÓNICO (CII)
Las muestras se analizan una a una,
lo que supone una presión para los
fabricantes. Aparte de A0 y A1c, en
el cromatograma pueden verse
otras fracciones de hemoglobina,
como la (HbF), (HbA1a/b) y
hemoglobina carbamilada, además
de variantes genéticas como la
hemoglobina drepanocítica (HbS).
Esto puede ser una ventaja (para la
detección de variantes) o una
desventaja (posible interferencia en
la HbA1c).
MÉTODOS DE SEPARACIÓN- CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IÓNICO (CII)
En un desarrollo de unos 70
segundos, se separan A1c y A0, y
se pueden observar fracciones
menores de X e Y. No hay
separación de referencia, por lo
que se requiere un control estricto
de las condiciones de separación
(columna y eluyentes) y del
software (calibración, valor de
corte y ajuste inicial) para obtener
resultados óptimos
MÉTODOS DE SEPARACIÓN- ELECTROFORESIS
CAPILAR
Este método también
utiliza las diferencias de
carga. El campo eléctrico
de alta tensión
(10 000 V) y el flujo
electroosmótico fuerzan
una separación óptima.
MÉTODOS DE SEPARACIÓN- ELECTROFORESIS
CAPILAR
A1c y A0 están más
separadas entre sí y de las
hemoglobinas menores X e
Y. El tiempo de desarrollo de
unos 300 segundos dura
mucho más que con la CII,
pero se logra un alto
rendimiento con el
funcionamiento en paralelo
de más capilares.
MÉTODOS DE SEPARACIÓN- CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD
La cromatografía de afinidad evalúa las
fracciones de elución de la glucohemoglobina y
de la hemoglobina no glucada . La glucosa de la
GHb tiene afinidad por el ácido borónico,
mientras que la de NGHb no la tiene. Por tanto,
la NGHb transitará sin interferencias por una
columna con tratamiento de resina con ácido
borónico, mientras que la GHb se retrasará y,
por lo tanto, se separará de la NGHb. Esto
ocasiona que, a diferencia de la cromatografía
de CII y la EC, la NGHb aparezca primero en el
cromatograma de afinidad(AFC) seguida de la
GHb
MÉTODOS QUÍMICOS- INMUNOENSAYOS
Un exceso de anticuerpos anti-HbA1c
se combinan con la muestra del
paciente. Los anticuerpos se unen a la
HbA1c y se obtiene una formación de
inmunocomplejos en látex. Los
inmunocomplejos resultantes
generan turbidez, que puede medirse
por fotometría mediante
turbidímetros, nefelómetros o
espectrofotómetros.3-4 La
hemoglobina total se mide por
bicromatría durante la fase de
preincubación en la misma cubeta.
MÉTODOS QUÍMICOS- ENSAYO ENZIMÁTICO
En los ensayos enzimáticos se usa
una fructosil-péptido-proteasa para
romper la cadena β, liberando así
fructosilpéptido. El péptido
resultante, principalmente dipéptido,
puede reaccionar con la fructosil-
péptido-oxidasa. La concentración de
HbA1c se mide determinando el
peróxido de hidrógeno resultante
con un reactivo de coloración. En
paralelo, la hemoglobina total se
mide por fotometría como la
metahemoglobina formada en el
proceso de pretratamiento.
SISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HbA1c
MINDRAY H50
Mindray lanzó el analizador H50
diseñado para uso en hospitales
medianos, laboratorios clínicos y centros
de atención de la diabetes. Detecta la
hemoglobina glicosilada (HbA1c) en
forma precisa y altamente reproducible
utilizando la técnica analítica de
cromatografía líquida de alto
rendimiento. La medición directa de la
HbA1c estable, la HbF y otras fracciones
de la hemoglobina, permite a los
médicos tomar decisiones terapéuticas
rápidas y confiables.
MINDRAY H50
• El analizador de alto
desempeño, amigable con
el usuario, procesa hasta 50
muestras en una hora,
realiza más de 3.000
pruebas por columna, con
un coeficiente de variación
inferior al 1%, y es capaz de
almacenar hasta 50.000
resultados incluyendo los
cromatogramas.
MODO
Seleccionar la opción AL
ANÁLISIS DE LA MUESTRA EN
CARGA AUTOMÁTICA
Para procesar una muestra de sangre completa, coloque
directamente el tubo de muestra preparada en el soporte
de muestras de sangre completa.