Croma GC and Sample

CROMATOGRAFÍA GASEOSA
INTRODUCCIÓN
Giann Carlos Peñaloza A.

Docente Universidad del Tolima
Químico (U de A)
MSc. Ciencias químicas (UdeA)
2019
INTRODUCCIÓN
DEFINICIÓN DE CROMATOGRAFÍA:
IUPAC (1993)
“Unified Nomenclature for chromatography”
“La cromatografía es un método físico de

separación en el cual los componentes a ser
separados son distribuidos entre dos fases, una
de las cuales es estacionaria, mientras que la
otra se mueve en una dirección definida”
International Union Of Pure and Applied Chemistry
INTRODUCCIÓN
El término CROMATOGRAFÍA cubre todas las técnicas de

separación (excepto EC en algunos de sus modos) en las
cuales la separación de los compuestos está basada en la
partición, o distribución de los analitos entre dos fases
inmiscibles, en un sistema dinámico
Según la fase móvil esta puede ser:
Cromatografía gaseosa
Cromatografía líquida (GPC, Intercambio iónico …)
Cromatografía de fluidos supercríticos
Cromatografía de afinidad (fines bioquímicos)
Clasificación
INTRODUCCIÓN
En CROMATOGRAFÍA gaseosa (GC) tenemos una fase

móvil que es un gas y una fase estacionaria que puede ser
Líquida o sólida
Cuando la fase móvil es un líquido estamos hablando

entonces de CROMATOGRAFÍA Líquida (LC)
La primera publicación que describe el uso de GC fue

realizada por Martin and James en BIOCHEM, J. (1952)
INTRODUCCIÓN
Los primeros instrumentos comerciales fueron fabricados

por:
• Griffin y George
• Pye
• Perkin-Elmer
• Wikins
• Hewlett-Packard
La GC como la conocemos hoy en día se desarrolló a final

de 1950 muy cerca de los 60’s principalmente como una
técnica de columnas empacadas, pero al mismo tiempo se
avanzaba en el desarrollo de las columnas capilares
PARÁMETROS
FUNDAMENTALES
PARAMETROS FUNDAMENTALES
En esta sección se introducirán:
• La forma como ocurre la separación

• Los factores que afectan la separación
• Los componentes mayoritarios de un cromatógrafo de
gases
• El cromatograma típico y la información que este
contiene
DIAGRAMA DE BLOQUE DEL CROMATOGRAFO GASEOSO
INTRODUCCIÓN
GASES COLUMNA DETECTOR
DE LA MUESTRA
ELECTRÓNICA
CONTROL DE
TEMPERATURA
ANÁLISIS DISPOSITIVO
CUANTITATIVO DE SÁLIDA
CROMATOGRAFO TÍPICO
DEFINICIONES
Gases
Gas de arrastre: Gas presurizado que se usa para

transportar la muestra a través del sistema
Gases del detector: Gases de soporte para ciertos

detectores (FID)
Introducción de la muestra: Introduce la muestra a la

corriente del gas de arrastre con la mínima interrupción de la
misma
Columna: permite la SEPARACIÓN de los componentes

de la muestra
DEFINICIONES
Detector: Reconoce y responde a los componentes de la

muestra tal como eluyan de la columna
Adquisición de datos: Convierte la señal del detector en

un cromatograma y provee la determinación manual o
automática de la identidad y cantidad de los componentes
de la muestra
EL ROL DE LA MUESTRA EN EL SISTEMA
MODELO DEL PROCESO
MODELO DEL PROCESO
EL PROCESO CROMATOGRÁFICO
(Proceso dinámico)
CROMATOGRAFIA
Clasificación
Cromatografia
Sólida
Gas-Sólido (CGS)
En CG la FE Adsorción
puede ser:
Líquida Cromatografia
Gas-Líquido (CGL)
Partición
FE Sólidas: Adsorción
El fenómemo físico-químico responsable de la

interacción entre el analito + FE sólida es la
ADSORCIÓN
La adsorción ocurre en la interfase entre el

gas de arrastre y la FE sólida
LA CROMATOGRAFÍA GAS-SÓLIDO (GSC)

(10% DE APLICACIONES)
Empaque poroso con gran

área superficial
Sólidos con grandes áreas

superficiales
(partículas finas, poros)
Solutos polares
ADSORCIÓN
- +
Sólidos con gran número de sítios
activos
(hidroxilos, pares de electrones...)
FE Líquidas: Absorción
El fenómeno físico-químico responsable de la

interacción analito + FE líquida es la
ABSORCIÓN
La absorción ocurre en el interior del film de

FE líquida (fenómeno INTRAfase)
LA CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO (GLC)

(90% DE APLICACIONES)
SEPARACIÓN POR PARTICIÓN O DIFERENCIA DE

SOLUBILIDAD EN LA FASE ESTACIONARIA
Films espesos de FE
líquida
ABSORCION Gran superficie líquida

expuesta al gas de arrastre
Interacción fuerte entre la

FE líquida y el analito
(gran solubilidad)
APLICABILIDAD
¿Qué mezclas pueden ser separadas por CG ?
la sustancia debe poderse “arrastrar” por el flujo de un

gas en el que se disuelva
Mezclas cuyos constituyentes sean

VOLÁTILES
DE FORMA GENERAL:GC es aplicable para separaciones y análisis de
mezclas cuyos constituyentes tengan PUNTOS DE EBULLICION de
hasta 350º y que sean térmicamente estables.
La cromatografía básicamente envuelve la separación de
mezclas debido a las diferencias en el coeficiente de
distribución (Equilibrio de distribución) de los
componentes de la muestra entre diferentes fases.
Una de esas fases es la fase móvil y la otra es la fase
estacionaria.
La retención de los solutos se

determina principalmente por sus
presiones de vapor y la volatilidad; y
por la interacción de los analitos con
la FE
Constante de
distribución
Schematic representation of the chromatographic process. From Miller, J. M., Chromatography: Concepts and Contrasts , 2nd
ed., John Wiley & Sons, Hoboken, NJ, 2005, p. 44. Reproduced courtesy of John Wiley & Sons, Inc.
Comical illustration of the difference between absorption (partition) and adsorption. From Miller, J. M.,
Chromatography: Concepts and Contrasts , 2nd ed., John Wiley & Sons, Hoboken, NJ, 2005, p. 45.
Reproduced courtesy of John Wiley & Sons, Inc.
CARACTERISTICAS DE SEPARACIÓN DE LA
COLUMNA
EFICIENCIA: Capacidad de una columna para
producir picos agudos
RESOLUCIÓN: Capacidad de una columna para

separar un pico de otro
SELECTIVIDAD: Capacidad de una columna para

determinar las diferencias físicas y/o químicas
entre dos analitos (picos)
Cómo es su columna?
EFICIENCIA?
RESOLUCIÓN?
SELECTIVIDAD?
Eficiencia
FUNCIONAMIENTO DE LA COLUMNA
Cómo se determina si una columna es apropiada para la
realización de un análisis?
En general es una buena práctica la medición de tres

parámetros usando una muestra apropiada con un corrido
isotérmico, en la medida de lo posible cerca del flujo
optimo de la columna
1. La eficiencia de la columna: Se mide como el número de platos
teóricos, algunas veces referida al número de platos
2. Medida de la resolución R para dos picos difíciles de separar
3. Medida de la simetría del pico

Eficiencia
RETENCIÓN Y SELECTIVIDAD
Tiempo de retención (tR).

Tiempo entre la inyección y la
aparición del pico cromatográfico.
Tiempo muerto (tm).

Tiempo de retención de
una sustancia no retenida.
Tiempo de retención ajustado (t’R). t’R = tR - tm

Tiempo real de interacción con la columna.
Selectividad (a). a = t’R2/t’R1

Capacidad para diferenciar dos compuestos.
Eficiencia
Eficiencia de Sistemas Cromatográficos
La migración de un
analito por la
columna provoca
inevitablemente el
ensanchamiento de
su banda:
EFICIENCIA Capacidad de elución con el mínimo de

dispersión del analito.
Eficiencia
EFICIENCIA EN UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO
Efectos del ensanchamiento excesivo de picos:
Picos más anchos y menos

intensos hacen que el (los)
compuesto (s) sea (n) menos
detectable (s).
Separación deficiente de
analitos con retenciones
próximas.
Eficiencia
La Teoría de los Platos Teóricos
Supone que el volumen de fase estacionaria en cada

plato es constante; que el volumen de fase móvil es
constante de plato a plato; que en cada plato las dos
fases están en equilibrio, y que el valor del Coeficiente
de Distribución es constante e independiente de la
concentración del soluto.
Eficiencia
CUANTIFICACIÓN DE LA EFICIENCIA.
Se supone la columna cromatográfica como una serie
de etapas separadas donde ocurre un equilibrio entre
el analito, la FE y el gas de arrastre.
Cada “etapa” de equilibrio se

denomina Plato teórico.
Eficiencia
El numero de platos teóricos (N) se calcula por:
W0.6065h h
W0.5h
WB= 4
tr 2 tR
N = 16 Columna más
Wb N eficiente
wb
Eficiencia
El numero de platos teóricos (N) se calcula por:
W0.6065h h
W0.5h
WB= 4
2 2
tr N=4 tr
N = 5.54
W0.5h W0.6065h
Eficiencia
Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna
• Longitud de la Columna
• Diámetro de la Columna
• Tamaño de las partículas del relleno
• Naturaleza de las fases
• Cantidad de fase estacionaria
• Temperatura de la columna
• Velocidad del gas portador
• Cantidad de muestra inyectada
• Material del cual está elaborada la columna
Eficiencia
Tiempo Muerto
t’R = tR - tm Representa el tiempo de transito

de la fase móvil en la columna
Es un parámetro específico para cada columna aplicable

únicamente bajo las condiciones preestablecidas de flujo
de gas y de temperatura del horno
Es el mismo parámetro para todos los analitos en la

columna, y no se puede esperar que otro pico sea
eluido de la columna antes de este parámetro
FID: butano o metano

NPD: cloruro de metileno
TCD (Detector de Conductividad Térmica): acetonitrilo

Eficiencia
FACTOR DE RETENCIÓN (k)
El factor k es una relación de la cantidad de tiempo que

un soluto permanece en la fase estacionaria y en la fase
móvil y se calcula de los tiempos de retención ajustados
y del tiempo muerto
k = tR - t m / tm k = t’R / tm
Como se espera que todos los solutos tengan el mismo tiempo en la fase
móvil k es una medida de la retención causada por la fase estacionaria
sobre el soluto
Selectividad (a)
Capacidad para diferenciar dos compuestos. a = t’R2/t’R1
a = t´ R2 /t´R1= k’2/k’1 k’= (tR–tM)/tM

Donde:
k’1= Factor de capacidad del primer soluto

k’2= Factor de capacidad del segundo soluto
Con k’2>k’1
Un valor de a >1.1 es indicativo de una buena

separación
El factor de separación a no considera el efecto de la eficiencia
de la columna o el ancho de los picos , únicamente la retención.
Por lo tanto se prefiere el parámetro de resolución
Resolución
t r2
2 (t’r1 – t’r2)
Resolución: R =
(W1 + W2)
La resolución es una medida del grado de

separación de dos picos adyacentes
Eficiencia
Longitud de la Columna
(Resolución)
Eficiencia
Diámetro de la Columna
Eficiencia
Cantidad de fase estacionaria

Eficiencia
Cantidad de fase estacionaria

Eficiencia
Temperatura de la columna
TEMPERATURA DE COLUMNA
Asimetría
El factor de asimetría del pico cromatográfico
Es una medida del factor de distorsión de la señal, este

factor se calcula como sigue:
As = CB
AC
h
A B
10% de la altura del C
pico
tiempo
Asimetría
C: Es síntoma de sobrecarga de la columna con el soluto

D: Es síntoma de la degradación de un soluto térmicamente
inestable
E: Es síntoma de la adherencia a los sitios activos del puerto
de inyección o de la columna
La Teoría Cinética considera el proceso cromatográfico
en función de los factores cinéticos que intervienen en
él.
Siendo estos factores:
• Las múltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto
durante su movimiento (migración) a través del empaque de la
columna, provocando variaciones en la velocidad del flujo
• La Difusión Axial o Longitudinal del soluto en la fase móvil
• La cinética de la resistencia a la transferencia de masa entre las

fases móvil y estacionaria
EFICIENCIA D E LA SEPARACIÓN
ENSANCHAMIENTO DE BANDA: ( Efecto de la fase móvil)
• La Difusión Axial o Longitudinal del soluto en la fase móvil

B
La Difusión Axial o Longitudinal ΗA   C  vfm
v fm
El grado de ensanchamiento de banda debido a la

difusión longitudinal depende de :
1. La difusión del soluto

2. La rata de flujo del soluto a través de la columna
En la difusión axial los analitos se difunden desde la zona
más concentrada del centro de la banda hacia las regiones
más diluidas por delante y por detrás del centro de la banda
expresa la tortuosidad γ de los canales en

B= la columna empacada y el coeficiente de
difusión molecular del soluto en la fase
móvil
B
Las múltiples trayectorias ΗA   C  vfm
v fm
representa el efecto de trayecto múltiple de la

fase móvil a través de una columna empacada.
A= Incorpora la densidad λ del empaque y el
promedio del diámetro de partícula, dP Para las
columnas capilares sin relleno este término es
cero
DIFUSIÓN DE EDDY
RESISTENCIA A LA B
ΗA   C  vfm
TRANSFERENCIA DE MASA v fm
C=
Predomina cuando el flujo es

demasiado rápido para que se
alcance el equilibrio. Es decir,
no hay suficiente interacción
entre el analito y las FE y FM
HC= Cv; C = constant, v = flow rate decrease HC

by decreasing v
Eficiencia
OPTIMIZACIÓN DE LA EFICIENCIA.
La altura equivalente de un plato teórico H es la

longitud de la columna equivalente a un plato teórico,
la altura de un plato teórico normalmente se usa en la
construcción de curvas de HEPT para determinar la
velocidad optima de un gas para una columna
determinada
Eficiencia
CÓMO AFECTA LA VELOCIDAD DEL GAS

PORTADOR L A EFICIENCIA DE LA COLUMNA?
Eficiencia
Curvas de Van Deemter

Con este tipo de curvas se puede demostrar que la
eficiencia optima de una columna (altura mínima de un
plato, H) ocurre a una velocidad intermedia
La eficiencia de la columna se ve comprometida tanto a
bajas como a muy altas velocidades
Velocidad intermedia
Eficiencia
Eficiencia
Eficiencia
df (μm)
(ng solute)
Eficiencia
¿ Cómo Mejorar la Eficiencia ?
1. Use diámetro de columnas menores.

2. Use un menor % de la fase estacionaria
3. Use menos muestra
4. Use una columna más larga(?)
5. Use programación de temperatura
Nota: La eficiencia de la columna es dependiente de una

buena técnica de introducción de la muestra.
INSTRUMENTACIÓN.
CONSTITUYENTES DE UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO:
• Depósito del gas de

arrastre.(1)
• Sistema de introducción de
muestra. (2)
• Columnas cromatográficas.
(3)
• Detectores (4)
• Amplificador de señal (5)
• Registro de señal (6)
DEPÓSITO DEL GAS DE ARRASTRE.
• La GC es la técnica en la cual la fase móvil es
siempre un gas, el cual está contenido en un
cilindro que permite regular su presión de salida.
• La elección de la FM depende de la
compatibilidad con el detector y es independiente
de la muestra a separar.
Instrumentación
TEMPERATURA DEL INYECTOR Debe ser

suficientemente elevada para que la muestra se
vaporice inmediatamente sin descomponerse.
Regla Gral: Tiny = 50oC encima de la

temperatura de ebullición del componente
menos volátil
VOLUMEN INYECTADO Depende del tipo de

columna y del estado físico de la muestra
Instrumentación
COLUMNA muestras muestras

líquidas gaseosas
empacada 0,2 L ... 20 L 0,1 ml ... 50 mL

 = 3,2 mm (1/4”)
capilar 0,01 L ... 3 L 0,001 ml ... 0,1 mL

 = 0,25 mm
Sólidos: convencionalmente se disuelven en un

solvente adecuado y se inyecta la solución
Instrumentación
Microjeringas para Inyección
LÍQUIDOS Capacidades típicas: 1 L, 5 L y 10 L

Instrumentación
Temperatura de la Columna Instrumentación
La interacción con la FE y el tiempo que un analito demora para

recorrer la columna depende de su PRESIÓN DE VAPOR (p0).
Estructura química
del analito
p0 = f
Temperatura
de la columna
Temperatura Presión Velocidad

de de de
columna vapor migración
EL ANALITO ELUYE MAS
RAPIDAMENTE (MENOR
RETENCIÓN)
Instrumentación
Horno de la Columna
Características Deseables de un Horno:
AMPLIO RANGO DE TEMPERATURA DE USO Por lo menos de

Tambiente hasta 400oC. Sistemas criogénicos (T < Tambiente) pueden
ser necesarios en casos especiales
TEMPERATURA INDEPENDIENTE DE LOS DEMAS MÓDULOS No

debe ser afectado por la temperatura del inyector y del detector
TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR Sistemas de

ventilación interna muy eficientes para mantener la temperatura
homogénea en todo el horno
Continuación Instrumentación
Horno de la Columna
FÁCIL ACCESO A COLUMNA La operación de cambio de
columna puede ser frecuente.
CALENTAMIENTO Y ENFRIAMIENTO RÁPIDO Importante tanto en

análisis de rutina como durante el desarrollo de metodologias
analíticas nuevas
TEMPERATURA ESTABLE Y
REPRODUCIBLE
La temperatura debe ser mantenida con exactitud y
precisión de ± 0,1°C.
Instrumentación
Programación Lineal de Temperatura

Mezclas complejas (constituyentes con volatilidades muy diferentes)
separadas ISOTERMICAMENTE:
- Los componentes más

volátiles no son separados
- Los componentes menos

volátiles eluyen más
rápidamente
La temperatura del horno puede modificarse

linealmente durante la separación:
Se consiguen buenas
separaciones de los
componentes de la
muestra en menor
tiempo
TINI Temperatura Inicial
TFIN Temperatura Final
tINI Tiempo Isotérmico Inicial
tFIN Tiempo Final del Programa
R Velocidad de calentamiento
Instrumentación
Posibles problemas asociados a PLT:

VARIACIONES DEL CAUDAL DEL GAS DE ARRASTRE La
viscosidad de un gas aumenta con la temperatura.
viscosidad caudal
DERIVA DE LA LINEA BASE
Debido al aumento de
volatilización de FE líquida
Instrumentación
Detectores
Dispositivos que examinan continuamente el material
eluido, generando la señal al pasar el analito
Gráfico Señal x Tiempo =

CROMATOGRAMA
Idealmente: cada sustancia
separada aparece
como un PICO en el
cromatograma.
Instrumentación
Detectores
Instrumentación
INICIADOR DEL DETECTOR

COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS.
Es básicamente el soporte de la fase
estacionaria.
Su temperatura debe ser controlada para hacer un

método reproducible.
Objetivos
En esta sección usted será capaz de:
• Identificar las diferencias primarias entre columnas

capilares y columnas empacadas
• Definir las principales características de la separación
en columnas cromatográficas
• Establecer correlaciones entre parámetros operativos y
efectos de separación en columnas capilares y
empacadas
• Identificar los cuidados de las columnas
Comparación de la Eficiencia de los Diferentes Tipos de
Columnas
Columnas
Flujo Óptimo
Columnas
Efecto del Tipo de Gas de Arrastre en la

Eficiencia y Resolución
Efecto del gas de arrastre en la

resolución del
n-heptadecano y pristano
TIPOS Y DEFINICIÓN.
Empacadas Capilares
  3 a 6 mm   0.1 a 0.5 mm
L  0.5 a 5 m L  5 a 100 m
Columnas
Conceptos Generales
SÓLIDOS Columnas rellenas con material finamente

granulado (empacadas) o depositado sobre la superfície interna
del tubo (capilar)
LÍQUIDOS depositados sobre una superfície de: sólidos porosos

inertes (columnas empacadas) o de tubos finos de materiales
inertes (columnas capilares)
Columnas
Para minimizar la pérdida de FE líquida por

volatilización, normalmente ella es:
Entrecruzada: Químicamente
las cadenas ligadas: las cadenas
poliméricas poliméricas están
están “ligadas” al soporte
químicamente por enlaces
ligadas entre sí químicos
Columnas
Características de una FE ideal

SELECTIVA Debe interactuar diferencialmente con los
componentes de la muestra.
Regla gral: la FE
debe tener
características que
permitan la
separación de dos
solutos a ser
separados (polar,
apolar, aromático...)
Continuación Columnas
Características de una FE ideal
AMPLIO RANGO DE TEMPERATURAS DE USO

Mayor flexibilidad en la optimización de la separación.
BUENA ESTABILIDAD QUÍMICA Y TÉRMICA

Mayor durabilidad de la columna, no reacciona con los
componentes de la muestra
POCO VISCOSA
Columnas más eficientes (menor resistencia a la
transferencia del analito entre fases)
DISPONIBLE EN ELEVADO GRADO DE PUREZA

Columnas reproducibles; ausencia de picos “fantasma” en los
cromatogramas.
FASES ESTACIONARIAS (FE).
Constituyen la variable mas importante en la optimización
de la selectividad
Comercialmente se encuentra gran numero de fases

estacionarias tanto sólidas como líquidas
Columnas
FE. LÍQUIDAS
Las FE liquidas son las mas utilizadas en GC.

Los líquidos son depositados sobre una
superficie de: sólidos porosos inertes
(columnas empacadas) o de tubos finos de
materiales inertes (columnas capilares).
FE
líquida
SOPORTE
Tubo capilar de
Sólido inerte
material inerte
poroso
Columnas
CARACTERÍSTICAS.
El liquido debe ser:
• Poco volátil (Presión de vapor hasta 0.1mm Hg. o 13.331

Pa a la temperatura de trabajo).
• Térmicamente estable.
• Buen solvente para los componentes de la muestra.
• Buen solvente diferencial.
• Químicamente inerte en relación a la muestra.
Columnas
FE. SÓLIDAS
El fenómeno físico-químico ADSORCION:

responsable de la interacción
entre el analito + FE sólida es
la ADSORCIÓN • Sólidos con grandes
áreas superficiales
(partículas finas, poros).
• Solutos polares.
• Sólidos con gran
número de sitios activos
(hidroxilos, pares de
electrones...)
Columnas
CARACTERÍSTICAS
Los sólidos deben ser:
• Sólidos finamente granulados (diámetros de partículas
típicos de 105 µm a 420 µm).
• Grandes áreas superficiales (hasta 102 m2/g).
Mas usados.
Polímeros Porosos: Porapak (copolímero estireno-
divinilbenceno), Tenax (polióxido de difenileno).
Sólidos Porosos: Carboplot, Carboxen (carbones activos

grafitizados), Alúmina.
Columnas
APLICACIONES
Estas características la hacen óptima para
la separación de:
- Gases.
- Compuestos de bajo peso molecular.
Por ejemplo:
Columna: Carboxen-1000 60-80
mesh; 15’ x 1/8”
TCOL: 35 ºC - 225 ºC a 20 ºC.min-1
Gas de Arrastre: He a 30 ml.min-1
Detector: TCD
Columnas
FE. IDEALES
FE con estructuras similares a la de la muestra
disolverán mejor sus constituyentes, proporcionando mejores
selectividades y separaciones
FE Selectiva:
separación
adecuada de los
constituyentes
de la muestra.
FE poco Selectiva:
poca resolución aún
con columna de
buena eficiencia.
Columnas
FE. MAS UTILIZADAS

• Siliconas.
• Polidimetilsiloxano – Menor polaridad, por ejemplo: SE-
30, OV-1, DC-200.
Columnas
Selectividad de la Fase Líquida

Columnas
Selectividad de la Fase Líquida

Columnas
Poliglicoles – Polímeros de etilenglicol y epóxido,

preparados con diferentes tamaños de cadena
polimérica Moderadamente polares. Apropiados
para la separación de alcoholes, aldehídos, éteres,
etc.
nombres comerciales: Carbowax, DB-Wax,

Supelcowax, HP-Wax, etc.
H O CH2 CH2 OH
n
Columnas
COLUMNAS EMPACADAS.
La fase líquida es depositada bajo la forma de
película delgada y uniforme sobre las partículas de
un soporte apropiado (acero inoxidable o vidrio).
Variables que influyen en el desempeño:

• Porcentaje de le FE en el material de relleno (de 2 a
10%).
• Diámetro de las partículas del soporte.
COLUMNAS CAPILARES.
La FE es depositada en forma de película sobre la

superficie interna de un tubo fino. Los materiales
mas utilizados para estas columnas son vidrio y sílica
fundida.
Variables que influyen en el desempeño:

• Diámetro y uniformidad de las partículas del relleno.
• La carga de FE.
Columnas
Problemas que Pueden Deberse a la

Columna
No Picos
• Debe examinarse todo el sistema y el proceso de inyección
• Fugas
• Control de flujo
• Puerto de Inyección dañado
• Problemas con el detector o el sistema de integración
Uno ó más picos desaparecidos

• Muestra muy diluida
• Adsorción por la columna
• Temperaturas del puerto de inyección o de la columna
incorrectos
• Flujos incorrectos
• Fugas
Continuación Columnas
Problemas que Pueden Deberse a la

Columna
Respuesta pobre
• Adsorción de la muestra en la columna
• Pérdida de fase líquida (columna vieja)
• Poca muestra
• Puerto de inyección defectuoso
• Mala técnica de inyección
• Fugas
• Temperaturas del puerto de inyección o de la columna
incorrectos
• Sensibilidad incorrecta del detector
Picos con “cola”

• Adsorción de la muestra en la columna
• Temperatura del puerto de inyección o de la columna muy
bajos
Columnas
Cuidados de la Columna
Columnas Capilares:
Columnas
Factores que Afectan la Fase Líquida

Inyecciones sin división y on-column pueden desplazar la
fase líquida de los primeros uno ó dos metros de columna
• Contaminación de matriz debida a gas de arrastre de mala

calidad ó inadecuada preparación de la muestra.
• Fase de silicona son resistentes al agua pero se afectan
negativamente con muestras ácidas.
• Fase Carbowax 20M es fácilmente oxidada por Oxígeno

presente en el gas de arrastre y puede tener vida corta con
muestras acuosas.
• Solventes como disulfuro de carbono (CS2) y dietil éter (C2H5

– O - C2H5) pueden tener efectos negativos.
PRINCIPIOS DE SELECCIÓN DE COLUMNAS
Seleccionando las fases estacionarias
Los conceptos de selectividad y polaridad son los mas usados a la

hora de seleccionar una fase estacionaria
La polaridad está determinada por la estructura de la fase

estacionaria, y tiene un alto efecto sobre la separación aunque es sólo
una de las muchas propiedades de las fases estacionarias que
influencian la separación de las señales
Polisiloxano y PEG: Dispersión, dipolos y enlaces de hidrógeno

Polisiloxano y PEG: La Dispersión es la interacción dominante en
estas fases estacionarias
La Dispersión: Se puede entender de forma simplificada como el

concepto de volatilidad, el soluto mas volátil eluye de forma más rápida
de la columna
 Si el punto de ebullición de los compuestos difiere
en más de 30 ºC, por lo general pueden ser
separados por varias fases estacionarias(hay
excepciones).
 Si los puntos de ebullición difieren en menos de 10

ºC, la simplificación del punto de ebullición se
vuelve menos segura y es más probable cometer un
error (excepto para los compuestos en una serie
homóloga).
Columnas
Temperatura de Operación de la columna

Columnas
Los picos se ensanchan cuando el tiempo de retención se

incrementa
Columnas
Incrementando Sensitividad con Columnas Capilares

DETECTORES.
Dispositivo que indica y cuantifica los componentes
separados por la columna.
CLASIFICACIÓN.
Selectividad
Universales: Generan señal para cualquier sustancia eluída.
Selectivos: Detectan solo sustancias con determinada propiedad fisicoquímica.
Específicos: Detectan solo sustancias que poseen un elemento o grupo
funcional determinado.
Modo de respuesta
Dependen del flujo másico: No depende del flujo del gas de arrastre.
Dependen de la concentración: La señal generada es proporcional a la
Concentración del analito.
Proceso de detección.
Ionización.
Electroquímico. Destructivos o no destructivos.
Térmico.
Espectroscópico.
CANTIDAD MÍNIMA DETECTABLE
(CMD).
Cantidad de analito mínima para generar una señal tres veces mayor
a la del ruido.
Detector: señal, ruido.

CMD = f Ancho del pico cromatográfico.
Fuentes de ruido
S=3
Señal (S)
N Contaminantes en los gases

Impurezas en el detector
Ruido (N) Problemas electrónicos
Tiempo (t)
SENSIBILIDAD
Factor de Respuesta, S: pendiente de

Área
la recta Área del pico x Masa del

analito
Masa A A: área del pico.

S≈ m: masa del analito.
m
El mismo incremento
de masa causa un
S Sensibilidad
mayor incremento de
área
RANGO LINEAL DINÁMICO.
Intervalo de masas donde la respuesta del detector es lineal.
No hay linealidad
Área
Masa
1,05 S El fin de la zona de linealidad

Área / Masa
puede ser detectado cuando la

razón (área/masa) diverge en
más del 5% de la inclinación de
0,95 S la recta en la región lineal.
Masa
Detector Type Support gases Selectivity Detectab Dynamic
ility range
Flame ionization Mass flow Hydrogen and air Most organic cpds. 100 pg 107
(FID)
Thermal Concentration Reference Universal 1 ng 107
conductivity (TCD)
Electron capture Concentration Make-up Halides, nitrates, nitriles, 50 fg 105
(ECD) peroxides, anhydrides,
organometallics
Nitrogen- Mass flow Hydrogen and air Nitrogen, phosphorus 10 pg 106
phosphorus
Flame photometric Mass flow Hydrogen and air Sulphur, phosphorus, 100 pg 103
(FPD) possibly oxygen tin, boron, arsenic,
germanium, selenium,
chromium
Photo-ionization Concentration Make-up Aliphatics, aromatics, 2 pg 107
(PID) ketones, esters,
aldehydes, amines,
heterocyclics,
organosulphurs, some
organometallics
Hall electrolytic Mass flow Hydrogen and Halide, nitrogen,
conductivity Oxigen nitrosamine, sulphur
Detectores
Descripción Breve
TCD (Detector de conductividad térmica)
La temperatura del filamento se incrementa con la

presencia de analito en el gas de arrastre, incrementando
la resistencia del mismo
FID (Detector de ionización de llama)
Los componentes se queman en una llama produciendo

iones, los cuales son colectados y convertidos en corriente
Detectores
ECD (Detector de captura de electrones)

Una especie electronegativa pasa a través del detector
capturando electrones de baja energía produciendo un
descenso en la corriente de la celda
NPD (Detector de nitrógeno y fósforo)
Compuestos con nitrógeno y fósforo producen incrementos

en la corriente de una llama enriquecida con vapores de
sales de metales alcalinos
MSD (Detector de masas)
Las moléculas son bombardeadas con electrones

produciendo fragmentos de iones que pasan a través de un
filtro de masas.
Los iones son filtrados basados en la relación masa / carga
Detectores
Rangos de Operación de los Detectores

Detectores
Columnas Capilares y Selectividad del Detector

Detectores
Condiciones de Operación para Detectores Usados

Comúnmente en GC Capilar
TCD Detectores
DETECTOR POR CONDUCTIVIDAD TÉRMICA

(TCD)
Principio: La conductividad térmica de un gas varia al cambiar la
composición Gas
La cantidad de transferencia de
calor entre un cuerpo caliente y un
cuerpo frió depende de la
conductividad térmica del gas en el
espacio que separa los cuerpos.
Si la conductividad térmica del gas Conductividad Transferencia

disminuye, la cantidad de calor térmica. de calor.
transferido también disminuye.
Conductividad Transferencia
térmica. de calor.
TCD Detectores
CONFIGURACIÓN DEL TCD

Celda de Detección:
i CELDAS DE CELDAS DE
REFERENCIA
MUESTRA
5
3
4
2 1
Con la variación en la temperatura
1. Bloque metálico. de los filamentos hay una variación
2. Entrada de gas de arrastre. en la resistencia.
3. Salida del gas de arrastre.
Los filamentos se montan en un
4. Filamento metálico ( W-Re).
puente Wheastone que convierte
5. Alimentación de corriente eléctrica
el DR en DV.
para calentar el filamento.
TCD Detectores
CARACTERÍSTICAS DEL TCD

SELECTIVIDAD: Se observa señal para cualquier sustancia
eluída diferente del gas de arrastre (detector universal).
SENSIBILIDAD: Dependiendo de la configuración particular y del

analito: CMD = 0,4 ng a 1 ng.
CAUDAL DE GAS DE ARRASTRE: La señal es

proporcional a la concentración del analito en el gas de
arrastre que pasa por la celda. CAUDAL CONSTANTE
El área de los picos es dependiente

del caudal del gas de arrastre
VARIACIÓN DEL CAUDAL
TCD Detectores
FACTORES DE RESPUESTA
Cuanto menor sea la conductividad térmica del analito mayor será la señal
Mezclas de cantidades
equimolares
CHCl3 Cantidad igual de sustancias

diferentes generan picos
C2H5OH
cromatográficos con áreas diferentes
C2H6
TCD Detectores
TEMPERATURAS DE OPERACIÓN
Mayor diferencia entre la temperatura Mayor es la
de los filamentos y el bloque metálico respuesta.
Temperatura del filamento, TF: entre Temperatura del bloque, TB:
300oC y 350oC. Es función de la mantenerla tan baja como sea
corriente i. posible
i TF Señal TB Señal
Limitaciones:
• Corrientes excesivas pueden Limitación:
fundir el filamento (Ø típicos Temperaturas excesivamente
del filamento = 20 m). bajas pueden provocar la
• Disminución del tiempo de condensación de analitos en
vida útil de los filamentos las celdas (error analítico,
(oxidación por trazas de O2 en daños a los filamentos).
gas de arrastre).
TCD Detectores
La temperatura del filamento

se mantiene constante
mientras que flujos
alternativos del gas de
referencia y efluente pasan a
través de él. Cuando se
añade una muestra, la
corriente requerida para
mantener la temperatura del
filamento constante, cambia.
El TCD no destruye la
muestra durante el
proceso de detección, este
detector se puede acoplar
en serie a un detector de
ionización de llama (FID) o
cualquier otro
TCD Detectores
FID Detectores
DETECTOR POR IONIZACIÓN EN LLAMA (FID)

Principio: Formación de iones cuando un compuesto se quema
en una llama de hidrógeno y oxígeno.
En la combustión de un compuesto
orgánico se forman iones
FID Detectores
Esta llama por si sola crea varios iones, pero cuando se quema un
compuesto orgánico hay un incremento de esos iones producidos
Un voltaje de polarización atrae estos iones a un colector localizado cerca

de la llama. La corriente producida es proporcional a la cantidad de la
muestra que se está quemando.
El FID es un detector destructivo, sensible a masa. Los analitos que tienen
el mayor número de carbonos en bajo estado de oxidación producen
mejor señal.
FID Detectores
QUÍMICA DE LA LLAMA
Combustión: Mezcla de los gases,
Incandescencia precalentados, inicio de la ruptura de
los enlaces.
Reacción: Reacciones exotérmicas
Reacción
con producción y/o consumo de
radicales H, O, OH, HO2, CH y C2 y
Combustión íones CHO+ .
Incandescencia: Emisión de luz por
decaimiento de especies excitadas.
Combustión de sustancias
con enlaces C-H. Combustión de H2.
CH + O  CHO+ + e- Solo se forman radicales
1 íon formado de cada ~105 átomos
de C quemados
FID Detectores
CARACTERÍSTICAS DEL FID

SELECTIVIDAD: Selectivo para sustancias que contienen enlaces C-
H en su estructura química.
SENSIBILIDAD: CMD típicas = 10 pg a 100 pg
FLUJO DE GASES: Según el gas de arrastre, las variaciones de

alimentación de aire e hidrogeno deben ser optimizadas.
SEÑAL
AR H2
Poca Mayor reproducibilidad

variación y repetitibilidad.
FID Detectores
FACTOR DE RESPUESTA
El factor de respuesta es aproximadamente proporcional al número de átomos
de carbono. La presencia de heteroátomos diminuye el factor de respuesta.
Número Efectivo de Carbonos (NEC): Provee con ~20% de

aproximación el factor de respuesta de un compuesto.
S α NEC   X
Mezcla con cantidades
equimolares de:
C2H6  NEC = 2,00 (X = Contribución de cada
átomo al NEC)
C2H5OH  NEC = 1,40
CH3CHO  NEC = 1,00
FID Detectores
FID Detectores
FID Detectores
FID Detectores
Sustancias que tienen poca ó ninguna

respuesta con el FID
FID Detectores
Problemas Típicos
• Llama apagada (6850 – 6890 EPC, se enciende automáticamente,
a menos que no haya suficiente flujo de hidrógeno y/o aire)
• Baja sensibilidad
• Ruido
• Deriva
Mantenimiento del FID

• Mayor temperatura práctica
• Limpieza regular del jet y del colector
Diagnóstico de fallas en el FID

• Chequear Flujos
• Limpiar Colector y Jet
• Chequear llama
• Chequear las conexiones de electrómetro
ECD Detectores
Detectores de Captura de Electrones (ECD y μECD)
Los ECDs contienen una celda recubierta con 63Ni, un isótopo

radioactivo. El 63Ni libera partículas ß que chocan con las
moléculas de gas portador para producir electrones de baja
energía; cada partícula ß produce aproximadamente 100
electrones. Los electrones libres producen una corriente
pequeña llamada corriente de referencia o vertical, que se
recoge y mide en un circuito de pulsos.
ECD Detectores
μECD
ECD Detectores
ESQUEMA DE UN DETECTOR ECD

ECD Detectores
Características de los Detectores de Captura

Electrónica
Una especie electronegativa pasa a través del detector,

estas capturan electrones térmicos de baja energía
causando una disminución en la corriente de la celda. La
pérdida de electrones es proporcional a la cantidad de
analito.
Gas de arrastre para columnas empacadas: nitrógeno ó 5%

Metano en Argón.
Flujo total en el detector deber ser mínimo 20 ml/min.

mínimo.
ECD Detectores
• Operación con capilares requiere 30 a 60 ml/min. de gas auxiliar.

• Sensibilidad varía con la estructura química.
• Cambiar selección de gas de arrastre.
• Monitoreo de la señal.
Consideración en las columnas capilares
• H2 como gas de arrastre con N2 como gas auxiliar da los mejores

resultados.
• Ar/CH4 (5%) como auxiliar también puede ser usado.
• Para la mayoría de las aplicaciones, un flujo de auxiliar de 20 – 70
ml/min., es satisfactorio.
• Para aplicaciones muy rápidas, se puede incrementar a 100
ml/min., para picos agudos.
NPD Detectores
Detector de Nitrógeno – Fósforo (NPD)
La baja relación de hidrógeno/aire no

puede sostener una llama,
minimizando la ionización de
hidrocarburos, mientras que los iones
alcalinos en la superficie de la perla
facilitan la ionización de compuestos
orgánicos de nitrógeno ó fósforo. La
corriente de salida, es proporcional al
número de iones recolectados, es
medida por un electrómetro, convertida
a forma digital y enviada a un
dispositivo de salida.
NPD (Cuidados con la perla) Detectores
Detector de Nitrógeno – Fósforo (NPD)

• Use el menor ajuste del “offset” ó voltaje de la perla que sea práctico.
• Analice muestras limpias.
• Apague la perla cuando no esté en uso.
• Mantenga la temperatura del detector por encima de 150°C.
• Cierre el flujo de H2 durante la salida del pico del solvente (El Agilent 6890
se programa automáticamente para que ello ocurra)
• Si su NPD está apagado durante un período largo de tiempo en un ambiente

de alta humedad, el agua se puede acumular en el detector. Para evapora
esta agua:
a. Fije la temperatura del detector a 70°C y manténgalo durante 30 minutos.

b. Fije la temperatura del detector a 100°C y manténgalo durante 30 minutos.
FPD Detectores
Detector fotométrico de llama

Compuestos azufrados
y fosforados
En el FPD la muestra se quema en una

llama rica en hidrógeno donde las
especies son reducidas y excitadas
FPD Detectores
Compuestos que contienen azufre y fósforo

producen especies quimioluminiscentes cuando se
queman en una llama como la del FID. Un filtro
óptico permite a una luz de una longitud de onda
específica entrar al fotomultiplicador y producir
una señal
MS Detectores
Inyectores
SISTEMA DE INTRODUCCIÓN DE MUESTRA
Es donde se lleva a
cabo la inyección y
vaporización de la
muestra, por esto,
debe tener una
Inyección directa
con Jeringa temperatura elevada
pero sin que los
analitos se lleguen a
descomponerse
Inyección con válvula de
muestreo
Inyección con y sin partición (split-splitless)

Inyectores
INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA
Propósito: Introducir la muestra a la
columna en estado de vapor
Inyección con Jeringa Inyección con Válvula
• Válvulas de muestreo de gases

• Inyección Manual
• Válvulas de muestreo de líquidos
• Inyección Automática
Dispositivos Auxiliares de Muestreo
• Purga y Trampa
• Head Space (Espacio de Cabeza)
Inyectores
Inyección con Jeringa
La muestra debe ser inyectada como un bloque. Para

obtener picos reproducibles y de buena apariencia, las
inyecciones deben ser rápidas y consistentes
Inyectores
Técnicas de Inyección con Jeringa
1. Cargar el volumen deseado

de líquido, entonces halar el
émbolo para remover el líquido
de la aguja
2. Insertar la aguja a través del
septum, tan lejos como esta
llegue
3. Presionar START , bajar el
émbolo y remover la jeringa
del puerto de inyección
Inyectores
Resumen de Técnicas de Inyección con

Jeringa
Inyectores
Inyectores
Inyectores
Consideraciones con la Septa

Debe ser usados dentro de las temperaturas límites
recomendadas para evitar:
• Fugas
• Descomposición
• Pérdidas de muestra
• Reducción de flujo de la columna o en el venteo de la
división
• Picos fantasmas
Inyectores
Picos fantasmas pueden ser reducidos o eliminados usando

varias técnicas combinadas:
Inyectores
Puertos de Inyección
Empacados y Capilares
En esta sección usted será capaz de:

• Identificar los componentes de los puertos de
inyección empacados y capilares
• Entender la dinámica de flujo del puerto de

inyección capilar
• Entender la diferencia entre los modos de inyección

con división y sin división
Inyectores
Inyectores
PUERTO DE INYECCIÓN ON-COLUMN

Inyectores
Esquema de un Inyector Frío en Columna

Inyectores
Puerto de Inyección con/sin División

Inyectores
Diagrama de Flujo
con División
Inyectores
Diagrama de Flujo
con División
Inyectores
Diagrama de Flujo
con División
Inyectores
Inyectores
Inyectores
Puerto de Inyección
Capilar
Inyectores
¿Dónde Ocurre la División?

Inyectores
Ultrasonido con solvente

- Generalmente solvente de limpieza o de la muestra
- Evitar solventes clorados
- Inerte primero – Tolueno
- Alcohol segundo – Metanol
• Secar
Inyectores
INYECTOR SIN
DIVISIÓN
Inyectores
INYECTOR SIN
DIVISIÓN
Inyectores
INYECTOR SIN
DIVISIÓN
Inyectores
Inyectores
Inyectores
Inyector de Vaporización con Temperatura

Programada (PTV)
Razones para usar un PTV

Inyecciones de gran volumen :
hasta 250 L
Sistema con límite de detección

mas bajo
Menor preparación de muestra
Inercia:
• Provee inyección sin división fría
• Puerto mejorado para compuestos
termosensibles
PTV Inyectores
Inyector de Vaporización con Temperatura Programada Modos

de Operación:
Este puerto de inyección tiene cinco (5) modos de operación:
1. El modo con división se usa generalmente para los análisis de

componentes mayoritarios
PTV Inyectores
2. El modo sin división se usa para análisis de trazas.
3. El modo con división por pulsos es similar al modo con división,

pero con un pulso de presión aplicado al inyector durante la
introducción de la muestra para acelerar el transporte de material
a la columna
4. El modo sin división por pulsos permite un pulso de presión

durante la introducción de la muestra
5. El modo de purga de disolvente se usa para inyección de gran

volumen. Se puede realizar inyecciones simples ó múltiples según el
análisis
PTV Inyectores
PTV Modo por Pulsos

Los modos de pulso de presión (con/sin división) aumentan la
presión del inyector justo antes del comienzo de un análisis y lo
devuelven al valor normal después de un tiempo especificado. El
pulso de presión barre la muestra fuera del inyector y hacia dentro
de la columna más rápido, reduciendo la opción de descomposición
de la muestra en el inyector
PTV Inyectores
PTV Modo de Purga de Disolvente
La muestra se introduce en el inyector en frío. Si las condiciones se

eligen correctamente y la muestra es adecuada, los analitos se
depositan en el liner del inyector mientras el disolvente se evapora
y se elimina. Inyecciones grandes o múltiples se utilizan para
concentrar la muestra en el inyector antes de pasar a la columna
para el análisis.
PREPARACIÓN DE
MUESTRAS
Giann Carlos Peñaloza

Tratamiento de muestras
CAMPO DE APLICACIÓN DE LAS

TÉCNICAS SEPARATIVAS
Para aumentar los límites de la cromatografía gaseosa

capilar:
Para masas molares altas
1. Derivatizar
2. Aumente la temperatura de la columna
3. Disminuya el espesor de la fase ligada
Para polaridades altas

1. Derivatizar
2. Cambie la fase estacionaria por una mas polar
3. Disminuya el espesor de la fase ligada
4. Hágalo por HPLC
ESCOGIENDO LA TÉCNICA CORRECTA PARA

DESARROLLAR UN MÉTODO EFICIENTEMENTE
CAMBIOS EN EL DESARROLLO DE MÉTODOS Y EN LA

EFICIENCIA CROMATOGRÁFICA
OBJETIVOS
REMOVER LA MATRIZ DE LA MUESTRA
SEPARAR EL MAYOR NÚMERO DE INTERFERENCIAS
CONCENTRAR LOS ANALITOS DE INTERES

CRITERIOS PARA ESCOGER LA TÉCNICA

DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS
1. On- line Vs of-line
2. Limpieza Vs concentración, ej: análisis de trazas
3. Efectos de matriz, ej: acuosa Vs no acuosa

4. Nivel de cuantificación requerido
5. Tamaño de la muestra, ej: 10 mg Vs 10 g
6. Resolución de la columna, capacidad, eficiencia, selectividad, especificidad
7. Sensibilidad del detector

8. Selectividad química del proceso de preparación:
Ninguna: Filtración
Bajo: Diálisis, GPC
Alto: SPE
Extracción en
fase sólida (SPE)
Extracción en fase sólida (SPE)
VENTAJAS DE LA EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SPE)

OBJETIVOS DEL SPE

OBJETIVOS DEL SPE

UN CARTUCHO TIPICO DE SPE

SELECTIVIDAD QUÍMICA CON SPE

SELECTIVIDAD QUÍMICA CON SPE
Interacciones
Hidrofóbicas
SORBENTES EN SPE
PASOS EN SPE
TRES MANERAS DE REALIZAR

SPE
Selective Extraction. Select an SPE sorbent that will bind selected components of the
sample — either the compounds of interest or the sample impurities. The selected
components are retained when the sample passes through the SPE tube or disk (the
effluent will contain the sample minus the adsorbed components). Then, either collect the
adsorbed compounds of interest through elution, or discard the tube containing the
extracted impurities.

SPE
Selective Washing. The compounds of interest and the impurities are retained on the
SPE packing when the sample passes through; the impurities are rinsed through with
wash solutions that are strong enough to remove them, but weak enough to leave the
compounds of interest behind.

SPE
Selective Elution. The adsorbed compounds of interest are eluted in

a solvent that leaves the strongly retained impurities behind.
Límites de detección y reproducibilidad en el análisis de

orgánicos volátiles en Agua
Technique Detection Limit Coefficient of

with FID (ppb) Variation (%)
SPME 0.05-0.2 1-3
Static Headspace 5- 10 1-3
Dynamic Headspace 0.005-0.05 4-8

MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SPME)
DEFINICIÓN DE MICROEXTRACCIÓN EN FASE

SÓLIDA
Es un atécnica que usa una fibra de silica fundida a la que se le ha
adherido un polimero adsorbente, para la extracción de
compuestos volátiles
Existe un equilibrio de partición entre el polímero ligado a la fibra y

la muestra o el headspace
Direct sampling SPME Headspace SPME

MICROEXTRACCIÓN EN
FASE SÓLIDA
Proceso:
 Repartición de los
analitos entre la fase
estacionaria y la
matriz.
 Desorción de los analitos
concentrados sobre la
fase estacionaria en un
instrumento analítico.
MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA
INMERSIÓN EN FASE VAPOR

(HEADSPACE)
MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA
Ventajas Desventajas
 Manipulación mínima de la
muestra.  Fragilidad de la fase estacionaria.
 Tiempos de análisis cortos.  pH muy ácidos o básicos

disminuyen la vida útil de la fibra.
 Se prescinde del uso de
disolventes orgánicos.
 Los volúmenes de muestra < 1 mL.
 Reutilizable.
 Bajo costo.
APLICACIÓN DEL MÉTODO HS-SPME:
DERIVATIZACIÓN DE COMPUESTOS
CARBONÍLICOS DE BAJO PESO MOLECULAR,
SOBRE LA FIBRA
Sustancias
carbonílicas
volátiles
Método SPME: Saturación de
la fibra con el agente derivante
PENTAFLUORFENILHIDRAZINA
Soluciónde
Solución dePFPH
PFPH
Método SPME: Exposición en el HS
Solución de
Solución de aldehídos
aldehídos
DESORCIÓN
NMD OBTENIDO POR HS-SPME CON DERIVACIÓN SOBRE
LA FIBRA DE CCV MEDIDOS COMO DERIVADOS
PENTAFLUORFENILHIDRAZÓNICOS.
CompuestoNMD, fmol Compuesto NMD, fmol

Etanal 90±0,2 Heptanal 34±0,2
Propanal 45±0,2 Octanal 40±0,2
Acroleína 11±0,2 Nonanal 39±0,2
Butanal 43±0,3 Decanal 41±0,2
Crotonaldehído16±0,1 trans-2-Pentenal 11±0,1
Pentanal 40±0,2 trans-2-Hexenal 10±0,2
Hexanal 43±0,2 trans-2-Heptenal 12±0,2
E. E. Stashenko, M. A. Puertas, W. Salgar, W. Delgado and J.R. Martínez, J. Chromatogr. A,

2000, 886, 175.
Martos P. A. and Pawliszyn J. Anal. Chem. 70, 1998, 2311-2320 (363 pmol para
formaldehído)
ANÁLISIS MEDIANTE LA TÉCNICA DE
HEADSPACE-SPME DE ALDEHÍDOS
VOLÁTILES GENERADOS POR LA
OXIDACIÓN TÉRMICA DEL ACEITE DE
GIRASOL
HEADSPACE-SPME DE ALDEHÍDOS VOLÁTILES
Determinación de compuestos carbonílicos
volátiles en el aliento humano
TIPOS DE FASE SÓLIDA
• CB/PDMS:Carboxen/Polydimethylsiloxane
• PDMS: Polydimethylsiloxane
• CW/DVB: Carbowax/Divinylbenzene
• PA: Polyacrylate.
EFECTOS DE DIFERENTES FASES SÓLIDAS EN LA

EXTRACCIÓN DE HEXANAL DE ACEITE DE SOYA
Hexanal Peak
Mean CV (%)
CB/PDMS 499 4.2

PA 739 7.2
PDMS 966 3.2
CW/DVB 1,520 2.9 (10.7)
CV: Coefficient Variation (%) for n =5

Significant difference (P<0.05)
EFECTO DEL DIAMETRO DEL POLIMERO ADHERIDO A LA FIBRA

SOBRE LA EXTRACCIÓN DE 1.0 ppm DE BENCENO
100
80
100 m
60
Mass (ng)
56 m
40
20
15 m
0
0 200 400 600
Time (S)
EFECTO DE LA TEMPERATURA DE EXTRACCIÓN SOBRE EL

CROMATOGRAMA DE LOS COMPUESTOS
Extracted at 25 °C
Extracted at 130 °C
Extracted at 200 °C
HEADSPACE
HEADSPACE DINÁMICO
LA TÉCNICA HEADSPACE ES UNA TÉCNICA BASTANTE

SENSIBLE
HEADSPACE
INSTRUMENTACIÓN
PURGA Y TRAMPA
EL CALENTAMIENTO POR MICROONDAS
Schematic of sample heating by convection
Sample
Convection currents
Vessel wall
Temperature on the outside is in excess

of the boiling point of the sample.
Heat conductive
EL CALENTAMIENTO POR MICROONDAS
Rotación molecular
La absorción de la Fuerza iónica
energía MO depende Transparencia
de: Reflección
Absorción
Solvente
Molécula
Frecuencia
Geometría
CONSIDERACIONES PARA EL
DESARROLLO DE MÉTODOS POR MO
Tipode
• • Tipo demuestra.
muestra.
Tamañode
• • Tamaño demuestra.
muestra.
Relaciónsolvente:muestra.
• • Relación solvente:muestra.
Potenciade
• • Potencia deentrada.
entrada.
Tiempode
• • Tiempo deexposición.
exposición.
Limitacionesmecánicas
• • Limitaciones mecánicasdel
delrecipiente.
recipiente.
Cavidaddel
• • Cavidad delsistema
sistemaMO.
MO.
INTERACCIÓN DE LOS MATERIALES
CON LA RADIACIÓN MO
Reflectivo: Los metales reflejan

la energía MO y no se produce
calentamiento
Aislante
INTERACCIÓN DE LOS MATERIALES
CON LA RADIACIÓN MO
Conductor
Transparente: Muchos materiales permiten

el paso de la energía MO sin calentarse.
CAVIDAD MICROONDAS
Aislante
Guía de la onda
Agitador
Magnetrón
Ondas reflejadas Recipiente

irradiado
EQUIPOS MICROONDAS INDUSTRIALES
MICROONDAS EN PROCESOS
QUÍMICOS
VENTAJAS
Mínima cantidad de disolvente;
Tiempo de extracción: de horas a minutos;
Disminución del impacto ambiental;
Reproducibilidad y rendimientos comparables
con los métodos convencionales de
extracción.
APLICACIONES DE LA RADIACIÓN DE MICROONDAS
EN PROCESOS QUÍMICOS
 Extracción de herbicidas (J. Agric. Food Chem. 45, 1997, 3522)

 Degradación de ginsenoides (J. Agric. Food Chem. 47, 1999, 3522)
 Obtención de taxanos (J. Agric. Food Chem. 45, 1997, 4691)
 Contaminantes ambientales (Environ. Sci. Technol. 33, 1999, 2469)
 Síntesis de compuestos inorgánicos (Chem. Mater. 11, 1999, 882)
 Síntesis de tiocompuestos (Org. Lett. 1, 1999, 697)
 Extracción de lípidos:
Alimentos fritos (Food Chem. 76, 2002, 241)
Grasa de leche (Internat. Dairy J. 9, 1999, 667)
Semillas de soya (Food Chem. 66, 1999, 345)
ANALISIS CUANTITATIVO
Métodos básicos de cuantificación en GC.
• Normalización de área
• Normalización de área con factores de respuesta.
• Estandarización externa.
• Estandarización interna.
Análisis cuantitativo
NORMALIZACIÓN DEL ÁREA

Cálculo del porcentaje del área de cada pico que se
asume como el porcentaje en peso del analito:
  Donde:
Ax
área % X   100 - Ax Área del pico del analito X
 ( Ai) 
 
i  -  ( Ai) Suma de todas las áreas
i
CRITERIOS:
-Todos los analitos deben ser eluidos.
-Todos los analitos deben ser detectados.
-Todos los analitos deben tener la misma sensibilidad.
ESTANDARIZACIÓN EXTERNA
• Este método se lleva a cabo de forma gráfica y

puede ser incluido en un software.
• Se corren cantidades conocidas de los
estándares, se miden las áreas de los picos y
se hace una curva de calibración.
Desventajas:
-La inyección manual limita su aplicación
-Se deben introducir volúmenes constantes de
todas las muestras y los estándares
ESTANDARIZACIÓN INTERNA
• Una cantidad conocida de estándar (que no sea uno
de los analitos) se le añade a cada muestra y luego
se mide la relación de áreas entre el analito y el
estándar interno, y se hace una curva de calibración.
CRITERIOS (para el estándar)

AX -Ser de alta pureza.
AIS
-Debe eluir cerca de los picos de
interés pero resolverse de ellos
-Debe ser químicamente similar al
analito de interés
Concentración
-No debe reaccionar con ningún
componente de la muestra
ANÁLISIS CUALITATIVO
Se puede dividir en dos categorías:
Identificación Identificación no
Cromatográfica: Cromatográfica:
- Por datos de retención. - Identificación por
formación de derivados.
- Por adición de estándar.
- Identificación por
- Por series homologas
sustracción de un
(Índices de Retención de
componente.
Kovats).
- Identificación por técnicas
auxiliares (UV, IR, MS,
RMN ).
IDENTIFICACIÓN USANDO AGREGADO (SPIKING).
• Se utiliza cuando se
sospecha la presencia de
un analito, simplemente
se corre de nuevo la
muestra con el analito de
interés agregado a ella.
IDENTIFICACIÓN POR SERIES HOMÓLOGAS-

ÍNDICES DE KOVATS
• Los tiempos de retención isotérmicos para una serie
homóloga de compuestos depende logaritmicamente del
número de carbonos de la cadena.
Log t’R
No. De átomos de C

ÍNDICES DE KOVATS.
t’R (A) Tiempo de retención
ajustado del analito A
t’R (N) Tiempo de retención
ajustado de n-alcano con N
carbonos
t’R (n) Tiempo de retención
ajustado de n-alcano con n
carbonos (n = N + 1)

ÍNDICES DE KRATZ
Ik  100n  100 (t'x-t'n) 

Donde:  (t'N-t'n) 
• Ik Índice de retención de Kratz
• n número de átomos de carbono en el n-alcano que
eluye antes del
compuesto de interés
t'n
• Tiempo de retención ajustado del n-alcano que
eluye antes del compuesto de interés
t'N
• Tiempo de retención ajustado del n-alcano que
t'x
eluye después del compuesto de interés
• Tiempo de retención ajustado del analito
That´s all

Croma GC and Sample

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CROMATOGRAFÍA GASEOSA

Giann Carlos Peñaloza A.

“Unified Nomenclature for chromatography”

“La cromatografía es un método físico de

El término CROMATOGRAFÍA cubre todas las técnicas de

En CROMATOGRAFÍA gaseosa (GC) tenemos una fase

Cuando la fase móvil es un líquido estamos hablando

La primera publicación que describe el uso de GC fue

Los primeros instrumentos comerciales fueron fabricados

La GC como la conocemos hoy en día se desarrolló a final

En esta sección se introducirán:

• La forma como ocurre la separación

DIAGRAMA DE BLOQUE DEL CROMATOGRAFO GASEOSO

Gas de arrastre: Gas presurizado que se usa para

Gases del detector: Gases de soporte para ciertos

Introducción de la muestra: Introduce la muestra a la

Columna: permite la SEPARACIÓN de los componentes

Detector: Reconoce y responde a los componentes de la

Adquisición de datos: Convierte la señal del detector en

El fenómemo físico-químico responsable de la

La adsorción ocurre en la interfase entre el

LA CROMATOGRAFÍA GAS-SÓLIDO (GSC)

Empaque poroso con gran

Sólidos con grandes áreas

El fenómeno físico-químico responsable de la

La absorción ocurre en el interior del film de

LA CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO (GLC)

SEPARACIÓN POR PARTICIÓN O DIFERENCIA DE

ABSORCION Gran superficie líquida

Interacción fuerte entre la

la sustancia debe poderse “arrastrar” por el flujo de un

Mezclas cuyos constituyentes sean

La retención de los solutos se

RESOLUCIÓN: Capacidad de una columna para

SELECTIVIDAD: Capacidad de una columna para

En general es una buena práctica la medición de tres

2. Medida de la resolución R para dos picos difíciles de separar

3. Medida de la simetría del pico

Tiempo de retención (tR).

Tiempo muerto (tm).

Tiempo de retención ajustado (t’R). t’R = tR - tm

Selectividad (a). a = t’R2/t’R1

Eficiencia de Sistemas Cromatográficos

EFICIENCIA Capacidad de elución con el mínimo de

EFICIENCIA EN UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO

Efectos del ensanchamiento excesivo de picos:

Picos más anchos y menos

La Teoría de los Platos Teóricos

Supone que el volumen de fase estacionaria en cada

Cada “etapa” de equilibrio se

El numero de platos teóricos (N) se calcula por:

El numero de platos teóricos (N) se calcula por:

Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna

t’R = tR - tm Representa el tiempo de transito

Es un parámetro específico para cada columna aplicable

Es el mismo parámetro para todos los analitos en la

FID: butano o metano

TCD (Detector de Conductividad Térmica): acetonitrilo

FACTOR DE RETENCIÓN (k)

El factor k es una relación de la cantidad de tiempo que

Capacidad para diferenciar dos compuestos. a = t’R2/t’R1

a = t´ R2 /t´R1= k’2/k’1 k’= (tR–tM)/tM

k’1= Factor de capacidad del primer soluto