LABORATORIO DE

INMUNOLOGIA.

Dra. Andrea Sakurada Z.

Hospital Clínico Universidad de Chile
Hospital Dr. Sótero del Río
En el laboratorio de Inmunología
existen diferentes técnicas que
permiten entregar resultados de
exámenes para apoyo al diagnóstico y
tratamiento clínico de las diferentes
enfermedades inmunológicas,
reumatológicas y mesenquimopatías en
general.
 ESTAS TECNICAS LAS
PODEMOS DIVIDIR EN 4
GRANDES GRUPOS
 1- TECNICAS DE AUTOINMUNIDAD

•DETERMINACION DE ANTICUERPOS
ANTINUCLEARES (ANA)

•DETERMINACION DE ANTICUERPOS
ANTI DNA(n) (DNA)

•DETERMINACION DE ANTICUERPOS
ANTIMITOCONDRIALES (AMA)
 2- TECNICAS NEFELOMETRICAS

•CUANTIFICACION DE
INMUNOGLOBULINA G (IgG)

•CUANTIFICACION DE
INMUNOGLOBULINA A (IgA)

•CUANTIFICACION DE
INMUNOGLOBULINA M (IgM)
2- TECNICAS NEFELOMETRICAS

•COMPLEMENTO C3 (C3)
•COMPLEMENTO C4 (C4)
•FACTOR REUMATOIDEO (FR)
• ANTIESTREPTOLISINA O (ASO)
3- TECNICAS ELECTROFORETICAS

•ELECTROFORESIS DE
PROTEINAS SERICAS (EF)
 4- TECNICAS DE ESTUDIO DEL
LIQUIDO ARTICULAR

•FISICO-QUIMICO (LA)

•CITOLOGICO (LA)

•ESTUDIO DE CRISTALES CON LUZ

POLARIZADA
 1- TECNICAS DE AUTOINMUNIDAD

TECNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA (IFI)

La IFI permite la detección de auto

anticuerpos circulantes contra antígenos
tisulares como:
•Anticuerpos antinucleares (ANA)
•Anticuerpos anti DNA(n) (DNA)
•Anticuerpos antimitocondriales (AMA)
La determinación de
anticuerpos anti nucleares y
anti citoplasmáticos a través
de la técnica de IFI consiste
en:
Colocar suero del paciente en un porta objeto
que contiene el sustrato.
Se produce la unión de los auto anticuerpos
específicos.
La unión Ag-AC se evidencia con un
conjugado (FITC) anti IgG humana, marcada
con isotiocianato de fluoresceína.
La lectura se realiza con microscopio de
fluorescencia con luz incidente, donde se puede
observar el color verde manzana en las
muestras positivas.
 INFORME DE RESULTADO DE
EXAMENES

Negativo (-)
Positivo (+)

•Todos los exámenes positivos se titulan a punto

final (se informa el título de la última dilución).

•Se coloca el nombre del sustrato de elección y

el nombre de la técnica.
 CARACTERISTICAS DEL
MICROSCOPIO
DE FLUORESCENCIA

Fluorescencia: La emisión de luz

ocurre solamente cuando la luz de
excitación está presente.

Fuente de luz: Lámpara de

mercurio de alta presión 100 W
 ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
(ANA)
La determinación de anticuerpos
antinucleares es esencial para el diagnóstico
de:
•Lupus eritematoso sistémico (LES).
•Enfermedad mixta del tejido conectivo.
•Lupus eritematoso sistémico inducido por
drogas.
•Hepatitis crónica activa autoinmune.
•Esclerosis sistémica progresiva.
•Síndrome de Crest.
•Artritis reumatoide.
•Dermatomiositis.
El sustrato de elección son las
células Hep-2 provenientes de
carcinoma de laringe humana,
donde podemos evidenciar los
diferentes PATTERN DE
FLUORESCENCIA, que
generalmente se asocian a
algunas de las patologías antes
mencionadas.
 PATTERN HOMOGENEO:

•Se observa en el 60 a 70 % de
los lupus eritematoso
sistémico.
•En el 100 % del lupus inducido
por drogas.
 PATTERN PERIFERICO:

•Se observa en proporción

variable en el lupus
eritematoso sistémico.
 PATTERN MOTEADO:

•Se observa en el 100% de la

enfermedad mixta del tejido
conectivo.
 PATTERN NUCLEOLAR:

•Se observa en el 90 a 100 % en

la esclerosis sistémica
progresiva.
 PATTERN
ANTICENTROMERO

•Se observa en el 90 a 100%

en el síndrome de Crest.
 ANTICUERPOS ANTI-DNA(n)
La determinación de anticuerpos anti-
DNA(n) de doble hebra, se utiliza
para la confirmación de LUPUS
ERITEMATOSO SISTEMICO
ACTIVO.
El sustrato de elección es la Crithidia
luciliae, que es un protozoo que se
encuentra en la glándulas salivales
de las moscas y que tiene un
kinetoplasto rico en DNA(n) nativo de
doble hebra.
 ANTICUERPOS
ANTIMITOCONDRIALES (AMA)
La determinación de AMA es de
utilidad en el diagnóstico de :

•Cirrosis biliar primaria

(altos títulos)
•Hepatitis crónica activa
(bajos títulos)
 El sustrato de elección es riñón
de rata. Se Puede observar la
fluorescencia en el citoplasma
de las células de los túbulos
renales que es un tejido rico en
mitocondrias.
En células Hep-2 podemos
observar un pattern de
fluorescencia positivo sugerente
de anticuerpos anti-
mitocondriales.
 2- TECNICAS
NEFELOMETRICAS
La nefelometría es una técnica
automatizada que permite
cuantificar proteínas del suero y
otros líquidos biológicos. Tiene
una alta sensibilidad y precisión.
Los nefelómetros miden la luz
dispersa, la reacción de
inmunoprecipitación es
producida por el complejo
antígeno-anticuerpo.
 CUANTIFICACION DE
INMUNOGLOBULINAS
IgG, IgA, IgM
Nos orienta como está
reaccionando el sistema de
defensa específico humoral. Los
niveles de cada una de ellas
pueden estar aumentados o
disminuidos dependiendo del tipo
de patologías en las cuales estén
involucradas.
 CUANTIFICACION DE
INMUNOGLOBULINAS
IgG, IgA, IgM
 COMPLEMENTO C3
COMPLEMENTO C4
El complemento C3 y C4 se
encuentra:

Disminuido
•Lupus eritematoso sistémico
•Glomerulonefritis

Aumentado
•procesos inflamatorios (artritis
reumatoide)
 SISTEMA DEL
COMPLEMENTO

Es un conjunto de unas 30 proteínas del

plasma y otros líquidos orgánicos que
interaccionan entre sí y con otros
componentes del sistema de inmunidad
innata y adaptativa, éstas se encuentran en
forma inactiva y se activan de forma
secuencial para mediar una serie de
reacciones inmunológicas.
 SISTEMA DEL
COMPLEMENTO

Este es un sistema de activación

enzimático en cascada, el producto de una
reacción es a su vez una enzima para la
siguiente reacción, produciéndose una
respuesta rápida y amplificada del estímulo
inicial, con la finalidad de producir la lisis
celular.
 EL COMPLEMENTO SE ACTIVA
POR
TRES VIAS DIFERENTES

•La vía clásica que corresponde al sistema

de inmunidad adaptativa
•La vía alternativa que corresponde al
sistema de inmunidad innata
•La vía de las lectinas que corresponde al
sistema de inmunidad innata
 EL COMPLEMENTO SE ACTIVA POR
TRES VIAS DIFERENTES

Las tres vías comparten las últimas

fases, consistentes en el
ensamblaje, sobre la superficie del
microorganismo, del denominado
complejo de ataque a la membrana.
 VIA CLASICA

Esta vía se activa cuando se forman

complejos Ag-AC. Los anticuerpos
solubles o libres no activan el
complemento. La activación de la vía
clásica comienza por la unión del
complejo C1 a anticuerpos unidos a
antígenos .La vía clásica conecta con el
sistema inmune adaptativo por medio de
su interacción con inmunocomplejos.
 VIA ALTERNATIVA

Esta vía no necesita anticuerpos para

activarse, por lo que es un mecanismo
de defensa importante en las etapas
iniciales de la infección cuando todavía
no se han sintetizado cantidades
importantes de anticuerpos. Se activa
directamente sobre la superficie de
muchos microorganismos.
 VIA ALTERNATIVA

Opera varios días antes de que entre

en acción la vía clásica (la clásica tiene
que esperar a que se hayan producido
anticuerpos).La vía alternativa conecta
con el sistema de inmunidad innata,
interaccionando directamente con la
superficie del microorganismo.
 VIA DE LAS LECTINAS

Reconocida recientemente como una

tercera forma de iniciar la activación del
complemento, consiste esencialmente en
una forma distinta de activar los
componentes C2 y C4 de la vía clásica.
 VIA DE LAS LECTINAS

La vía de las lectinas es una variante de

la vía clásica, se activa sin la presencia
de anticuerpos, se activa por medio de
una MBP (proteína de unión a manosa)
que detecta residuos de este azúcar en
la superficie bacteriana, y activa al
complejo C1qrs.
El resto de la vía es similar a la clásica y
por lo tanto pertenece al sistema de
inmunidad innata.
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
 FACTOR REUMATOIDEO

El FR son autoanticuerpos dirigidos

contra los determinantes antigénicos del
fragmento Fc de la molécula Ig G. El
FR puede ser IgG, IgM, IgA. El mas
frecuente es el IgM.
Es de utilidad en el diagnóstico de
Artritis Reumatoide donde se encuentra
aumentado.
 ANTIESTREPTOLISINA O

El Streptococcus B-hemolítico del grupo A,

produce un número de exotoxinas, que
pueden actuar como antígenos una de estas es
la estreptolisina O.
En una infección estreptocócica reciente la
antiestreptolisina O se halla elevada en el
80% de los casos.
Su determinación es importante en pacientes
con:
•Fiebre reumática
•Glomerulonefrítis
3- TECNICAS ELECTROFORETICAS

La electroforesis de proteínas plasmáticas es

la migración y separación de estas por la
acción de un campo eléctrico.
Las proteínas migran del polo (-) cátodo al
polo (+) ánodo
La EF es muy importante en el diagnostico de:
-Mieloma Múltiple
-Hipogamaglobulinemias
-Síndrome Nefrótico
 4- TECNICAS DE ESTUDIO DEL
LÍQUIDO ARTICULAR

•FISICO-QUIMICO (LA)

•CITOLOGICO (LA)

•ESTUDIO DE CRISTALES CON

LUZ POLARIZADA (LA)
-El Liquido articular es un
ultrafiltrado del plasma que posee
casi todos los elementos de este,
excepto factores de la
coagulación.

-El médico obtiene la muestra por

una artrocentesis aséptica de
alguna de las articulaciones que
se desee puncionar.

-Se coloca en un tubo estéril con

heparina como anticoagulante
(3 gotas de heparina por ml de
EL ESTUDIO DEL LA ES IMPORTANTE
PARA EL DIAGNOSTICO DE
-Artritis inflamatorias
-Artritis séptica
-Artritis por cristales:

•Cristales de urato monosódico.

Diagnostico de Gota

•Cristales de Pirofosfato de Calcio.

Diagnostico de Seudogota o
Condrocalcinosis
OTRAS TÉCNICAS INMUNOLOGICAS

Medición de Antígeno-Anticuerpo:
Reacciones de aglutinación.
Reacciones de precipitación.
Nefelometría.
ELISA
TÉCNICA DE ELISA