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cofactores
Eritrocito: 5 isoenzimas
L 4 3 2 1 0
M 0 1 2 3 4
PK - genética
Gen : PKM PKLR
Cromosoma: 15q22 1q21
Exones: 11 12
Salteo exon: 10 9 1 2
Subunidades: PK-M1 PK-M2 PK-L PK-R (L’)(L)
PM: 55000 60000 63000 57500
AA: 530 531 574
Dominio N
AA 1 - 84
N Dominio C
AA 432-574
www.pymol.org
CEFA 14
C
Tetrámero
PK-R
CEFA 14
www.pymol.org
Isoenzimas PK en eritrón
Reticulocitos
y GR jóvenes: 1 homotetrámero - PK-R1
(L’4)
17 familias descriptas
3 pacientes con caracterización molecular
Eritrocitosis 2ª a 2,3DPG
2) 62 ArgGln homocigota
+ AE G6PD
Deficiencia PK (OMIM 266200)
Prevalencia 51 casos / millón blancos
> 160 mutaciones identificadas
(70 % con sentido equivocado)
Superóxido
dismutasa
del O2
O2 – •
superóxido
Haber-Weiss
Reacción de
2H+ e
Catalasa
H2O2
Peróxido de H
e
peroxidasa
OH
Glutation
-
2 GSH
OH •
hidroxilo
H+ e GS-SG
–
anión
H2O
• radical agua
Glucosa Glu H 2O + ½ O 2 MetaHb
HK
Cys - prevención
GC Catalasa - reducción
G6P Gly Fe++
NADP+ 2 GSH H2O2 Hb Cb5+++ NADH
G6PD
ox
Fe+++
NADPH GS=SG 2 H20 Hb AzMet NADP+
F1-6DP
R5P red
Hemicromos reversibles
AH x stress
oxidante
Cantón
V > 110 %
G6PD: frecuencia génica
en negros americanos
Variante A 0.11
Variante A- 0.2
200
G6PD: actividad enzimática (%)
AE
110 %
100
60 %
0
60 días 120
Herencia de patología ligada al cromosoma X
Normal Normal Hemicigota Normal
AE = 30 %
AE = 70 %
Lyon – Beutler = mosaicismo
Deficiencia G-6PD – Cuadro clínico
- Anemia hemolítica crónica no esferocítica (AHCNE)
- Crisis hemolítica por stress oxidante
Clase II: más precoz, más severa, potencialmente mortal
Clase III: más tardía, menos severa, autolimitada
- Infecciones (GR = espectador inocente? Oxido nítrico?)
- bacterianas (neumonía), virales (hepatitis)
- Drogas (o sus metabolitos) = listas
- Favismo (Vicia faba) = vicina divicina
convicina isouramilo
Heterogeneidad: geográfica, familiar, individual
Individuo: mutación, edad, ß-glucosidasa
Habas: cantidad, maduración, preparación
- Ictericia neonatal por hipoconjugación (inmadurez, Gilbert)
por hiperhemólisis (infecciones, drogas)
- Acidosis diabética AE % GR Otros
- Efectos sobre otras células I 0-1 3
leucocitos: predisposición infecciones II 5 30
cristalino: cataratas III 12 >60
Deficiencia G6PD
Deficiencia G6PD – Cuerpos de Heinz
Deficit G-6PD: metodología diagnóstica
1) Pruebas de detección: mancha fluorescente
prueba de Brewer
prueba de Jacob-Jandl
2) Actividad enzimática: Medir NADPH a 340 nm
Ojo: - hemólisis reciente: edad celular, % reticulocitos
- transfusión reciente
- contaminación neutrófilos
Opciones: esperar 2-3 semanas
comparar con otras enzimas (Hx – TGO)
estudio familiar
3) Movilidad electroforética
4) Propiedades: Km G6P 25o C
Km NADP 25o C
Ki NADPH 25o C
sustratos análogos: 2-deoxi-glucosa-6P
galactosa-6P
deamino-NADP
termoestabilidad a 51o C
actividad a diferentes pH
5) Estudio molecular
G6PD dimérica
Modelo tridimensional
Gen Gd (Xq28)
F8C
CBBM
TEL CEN
(GpC)
5´ 3
´ G6P NADP
Exon = II
(1) 205
V
386-387
X515 = 59256 daltons
436 pb (Intron II: 9857 pb) Gen: 18500 pb
(Met)Ala Lys Lys Arg
Acetilada
Dímero
Tetrámero
Aminoácidos
1 100 200 300 400 500
I
II
III
IV Mutaciones gen G-6PD
Detección G-6PD (-) en dadores de sangre
16 % (9/54) Europa
40 % (5/20) Africa
5 % (3/59) Asia
45 % /9/20) India
10 % (3/30) América