JKZ ------------------------------- UNITE DE FORMATION ET DE RECHERCHE EN SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE(UFR/SVT) ------------------------- DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE ET MICROBIOLOGIE ------------------ LABORATOIRE DE BIOCHIMIE ALIMENTAIRE BIOTECHNOLOGIE INDUSTRIELLE ET BIOINFORMATIQUE (BAEBIB)
Exposé: TOXICOLOGIE GENERALE
Les Biomarqueurs : Mode d’action des enzymes anti-
oxydantes et de la génotoxicité
-BAWAR Barthélemy Enseignant: Dr. Maurice
-TRAORE Sakonon OUEDRAOGO 1 Plan
Introduction
Bref aperçu sur les
biomarqueurs Les enzymes anti- oxydantes La génotoxicité
Conclusion 2 Introduction (1/2) Dans l’organisme humain ou animal ; grâce à la présence d’antioxydants, il existe un équilibre physiologique subtil entre la production et l’élimination des espèces réactives de l’oxygène(ROS) et les espèces réactives de l’azote (RNS) Cet équilibre peut être rompu sous l’effet de certains stimuli pathologiques endogènes (hyper-LDLémie, hypertension, diabète…) ou exogènes (polluants environnementaux, tabagisme…), [1] conduisant à un stress oxydant d’où le problème de la génotoxicité. [6].
3 Introduction (2/2) Les antioxydants peuvent être des enzymes ou de simples molécules. Certains sont produits par l’organisme, ce sont les antioxydants endogènes, ou proviennent de l’alimentation ou la médication, et sont donc exogènes. [5]. Les enzymes antioxydants possèdent une grande affinité pour les ROS, avec lesquelles elles réagissent très rapidement pour les neutraliser. [2]. Les enzymes antioxydants sont étudiés en tant que biomarqueurs de même que la génotoxicité 4 Bref aperçu sur les biomarqueurs
5 Bref aperçu sur les biomarqueurs1/2).
Définition et concept Un biomarqueur est une caractéristique biologique mesurable liée à un processus normal ou non. [18]. Dans le domaine de l'écologie, un biomarqueur permet de détecter la présence de polluants dans l'environnement et l'impact de certaines pratiques. Dans le domaine médical, un biomarqueur peut être utilisé pour le dépistage médical ,le diagnostic, la réponse à un traitement médical, la rechute après un traitement, la toxicité d'une molécule.[18]. Le biomarqueur est alors le plus souvent une protéine (dosable dans le sang ou la présence d'une molécule dans l'urine). 6 Bref aperçu sur les biomarqueurs(2/2)
Principe Le principe de l'utilisation d'un « biomarqueur » est de rechercher la signature biologique de l'impact ou de la présence d'un xénobiotique dans l'organisme, ou de l'effet induit d'un changement ou stress environnemental et non la mise en évidence directe de la cause. [18].
Les biomarqueurs peuvent aussi révéler un évènement (contact
avec un toxique ou pathogène) passé. [18].
7 Les antioxydants enzymatiques(1/10)
La superoxyde dismutase (SOD) EC 1.15.1.1
Structure dimérique de la Cu-SOD cytoplasmique humaine
8 Les antioxydants enzymatiques(2/10)
La superoxyde dismutase (SOD) EC 1.15.1.1
Cette métalloprotéine est classée en trois catégories, la SOD cytosolique (Cu- et Zn dépendante), la SOD mitochondriale (Mn- dépendante), et la SOD extracellulaire. C’est l’enzyme antioxydante “anti-O2•- ” la plus importante dans toutes les cellules vasculaires car elle catalyse la dismutation de l'anion superoxyde en eau oxygénée. [3]. L’absence de cette enzyme peut être létale. La superoxyde dismutase est induite dans diverses pathologies associées au stress oxydatif, dont l'obésité(durant la jeunesse) [10].
9 Les antioxydants enzymatiques(3/10)
La catalase EC1.11.1.6
Structure d'une catalase d'érythrocyte humain
10 Les antioxydants enzymatiques(4/10)
La catalase EC1.11.1.6 La catalase est une oxydoréductase héminique. C’est une enzyme intracellulaire, localisée principalement dans les peroxysomes. Elle catalyse la réaction de détoxification du H2O2 (généralement produit par la SOD). Elle est surtout présente au niveau des globules rouges et du foie. [2] [18]. 2 H2O2 → 2 H2O + O2
Cette enzyme est utilisée en bactériologie systématique pour
l'identification des bactéries. [18].
11 Les antioxydants enzymatiques(5/10)
La glutathion peroxydase (GPX) : EC 1.11.1.9
Dimère de glutathion peroxydase de PDB 2F8A.
12 Les antioxydants enzymatiques(6/10)
La glutathion peroxydase (GPX) : EC 1.11.1.9
Les enzymes de cette famille sont Sélénium (Se)-dépendantes.
La glutathion peroxydase (GPX) est présente dans le cytoplasme où
elle joue un rôle majeur dans la régulation de l’état redox physiologique intracellulaire des cellules vasculaires. [12].
Elle catalyse la réduction des hydroperoxydes (H2O2), et des
peroxydes lipidiques en utilisant le glutathion réduit (GSH) comme donneur d’hydrogène. [13].
13 2 GSH + H2O2 → GSSG + 2 H2O
Les antioxydants enzymatiques(7/10)
L’hème oxygénase : EC 1.14.99.3
Structure d'une hème oxygénase humaine cristallisée (PDB 1TWR)
14 Les antioxydants enzymatiques(8/10)
L’hème oxygénase : EC 1.14.99.3
L’hème oxygénase dégrade l’hème (prooxydant) en biliverdine, puis en bilirubine qui est un antioxydant, en CO et en fer, et peut prévenir l’oxydation des LDLs. On distingue l’hème oxygénase constitutive et inductible. Cette dernière est induite par le stress oxydant et les oxLDLs, et possède un effet antiathérogène chez la souris. [17].
15 Les antioxydants enzymatiques(9/10)
Les thiorédoxines (TRx) et la thiorédoxine réductase (TRxR)
16 Les antioxydants enzymatiques(10/10)
Les thiorédoxines (TRx) et la thiorédoxine réductase (TRxR
Les thiorédoxines sont des enzymes à activité antioxydante intrinsèque
Une fois oxydée, la thiorédoxine est réduite par la thiorédoxine réductase
(TRxR) qui est une enzyme possédant un groupement sélénocystéine dans son site actif [4]. La TRxR intervient aussi dans la dégradation des peroxydes lipidiques et du peroxyde d’hydrogène et dans la régénération du radical ascorbyl en acide ascorbique. [14]. De très nombreux substrats ont été identifiés in vitro pour la thiorédoxine, tels que la ribonucléase, les hormones gonadotrophines chorioniques, les facteurs de coagulation, le récepteur des glucocorticoïdes et l'insuline ; la réduction de l'insuline est traditionnellement utilisée comme test de 17 l'activité de la thiorédoxine[15]. La génotoxicité (1/9)
Définition La génotoxicité se définit comme la capacité de certains agents dits « génotoxiques » à induire des dommages à l’ADN pouvant conduire à des mutations géniques ou chromosomiques. Ces dommages, une fois fixés dans le génome, peuvent avoir des conséquences délétères sur la santé des organismes exposés et/ou de leur descendance : mortalité embryonnaire, malformations congénitales, infertilité, cancers, etc… [7].
18 La génotoxicité (2/9)
Les agents génotoxiques
Les mutagènes physiques sont principalement les radiations ionisantes hautement énergétiques telles que les rayons X ou gamma et les radiations non ionisantes comme la lumière ultraviolette. [8]. Les mutagènes biologiques sont notamment des virus tels que les rétrovirus. Les agents chimiques dont les polluants organiques sont les plus distingués avec les hydrocarbures aromatiques polycycliques (2- Méthylanthracènes, Pyrène), les nitrosamines (N- nitrosodibutylamine), Les pesticides (Nitrofène), Les solvants organiques (1,2-dichloroéthane ; Dichlorométhane), Les métaux 19 lourds (Mercure, Cadmium). [8]. La génotoxicité (3/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Les adduits encombrants Les adduits encombrants qui correspondent à l’entité chimique résultant de l’établissement d’une liaison covalente entre une molécule chimique électrophile et un site nucléophile d’une base de l’ADN. Parmi les sites nucléophiles, les azotes aromatiques, les groupements hydroxyles et carbonyles des bases constitutives de l’ADN sont les cibles privilégiées des génotoxiques. Certains agents mutagènes tels que les HAP et les amines aromatiques sont capables de réaliser ce type de liaison entraînant 20 la formation d’un complexe appelé adduit (pour produit d’addition) La génotoxicité (4/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Les adduits encombrants Cette lésion entraîne une modification de la structure spatiale de l’ADN au voisinage de l’adduit qui va perturber sa reconnaissance par l’ADN polymérase au cours du processus de réplication.
La formation et la persistance de telles lésions de l’ADN sont des
étapes clés vers la mutagenèse et le développement tumoral. [9].
21 La génotoxicité (5/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Les micro-adduits Les micro-adduits sont formés par l’alkylation d’une base azotée de l’ADN. Ces modifications bien que minimes perturbent la reconnaissance de la base par l’ADN polymérase lors de la duplication de l’ADN.
Les nitrosourées, les alkylsulfonates et les cyclosphosphamides qui
sont largement utilisés comme agents chimiothérapeutiques pour le traitement du cancer sont pour la plupart des agents alkylants. [8]
22 La génotoxicité (6/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Les lésions oxydatives Les lésions oxydatives de l’ADN qui sont générées lors de l’attaque des bases de l’ADN par les espèces réactives de l’oxygène.
Ces lésions concernent notamment la guanine dont le produit
d’oxydation majeur est la 8-oxo-7,8-dihydro-2’-desoxyguanosine (8- oxodGuo). [9].
23 La génotoxicité (7/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Autres modifications des bases de l’ADN Les agents génotoxiques impliqués sont pour la plupart des analogues de bases azotées, tels que le 5-bromo uracile ou la 2- amino purine, présentant des similitudes structurales avec les bases normales de l’ADN [6]. Elles seront incorporées à l’ADN où elles provoquent des mutations en générant des appariements incorrects de bases L’acide nitreux peut, quant à lui, provoquer la désamination de la cytosine ou de l’adénine pour produire respectivement de l’uracile ou de l’hypoxanthine qui présentent une forte homologie structurale 24 avec la guanine [7] La génotoxicité (8/9)
Mode d’action et effets des génotoxiques
Autres modifications des bases de l’ADN Les agents intercalants tels que le bromure d’éthidium ou la proflavine sont des molécules à géométrie plane qui peuvent s’insérer entre les paires de bases entraînant l’étirement de l’ADN et l’insertion d’une base surnuméraire. D’autres types de lésions; des pontages intra ou inter-brins qui correspondent à des liaisons covalentes anormales établies entre bases de l’ADN et aux cassures simples et doubles brins générées essentiellement par les rayonnements ionisants.
25 La génotoxicité (9/9)
26 les différents types de lésions primaires de l’ADN [7].
Conclusion
27 Conclusion (1/2
L’organisme humain ou animal possède un puissant système de
protection face aux effets délétères des Enzymes anti oxydants (EAO). Il comprend des enzymes qui ont des activités antioxydants et de nombreux antioxydants. Les principales enzymes qui protègent contre les dommages cellulaires dus aux EAO sont le superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT) la glutathion peroxydase (GPx), l’hème oxygénase et la thiorédoxine réductase. Comme les EAO ont une durée de vie brève, la mesure de ces activités enzymatiques dans le sang est un test peu contraignant qui permet d'étudier les effets d'une exposition chronique aux oxydants chez l'Homme et chez l’animal. 28 Conclusion (2/2)
En raison de la grande variété des substances impliquées, de leur
omniprésence dans l’environnement et des conséquences démo- écologiques possibles notamment sur la survie ou le renouvellement de certaines populations sauvages, l’étude de ces substances dites génotoxiques, représente un enjeu majeur pour la préservation de l’environnement. Les tests d’Ames ou le SOS Chromo permettent de démontrer le caractère génotoxique ou progénotoxique d’un grand nombre de polluants chimiques principalement de nature organique incluant notamment les HAP, les nitrosamines, les amines aromatiques, quelques pesticides, quelques solvants organiques et des molécules utilisées en chimiothérapie anticancéreuse.
