Le choix des micro-organismes pour la

microbiologie industrielle

Préparé par:
BEKKA Fahima
 Importance relative des groupes microbiens
producteurs d’ATBs
Mircro-organismes producteurs % du Total des antibiotiques décrits
d’ATBs

Lichens et algues 0.8

Champignons
Penicillium 4.1
Aspergillus 3.0
Fusarium 1.2
Cephalosporium 0.8
Autres fungi imperfecti 5.4
Basiiomycètes et ascomycètes 5.0
Bactéries
Pseudomonadaceae 1.3
Bacillaceae 7.0
Autres eubactéries 1.7
Actinomycètes 69.7
2
Fréquence des divers genres d’actinomycètes
dans le sol d’après l’étude de 50 000
échantillons issus de 16 sols différents
Genres %
Streptomyces 95.34
Nocardia 1.98
Micromonospora 1.4
Thermomonospora 0.22
Actinoplanes 0.20
Microbispora 0.18
Mycobacterium 0.14
Streptosporangium 0.10
Actinomadura 0.10
Micropolyspora 0.10
Pseudonocardia 0.06
Microellobosporia 0.04
3
Les actinomycètes

4
 Micro-organismes d’importance industrielle

 Gram +

 Hétérotrophe
 Aérobie
Mésophile

 Structure sub-cellulaire est procaryote bien que leur

morphologie est semblable à celle des moisissures
 Spores de déssimination
 Sensibilités aux ATBs, résistance aux antifongiques,
sensibilité aux bactériophages
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 Classification
Règne : Bacteria

Division : Firmicute

Classe : Thalobacteriaceae
 

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 Critères d’identification
Certain actinomycètes peuvent être identifiés uniquement
par leur morphologie, pour d’autre la composition en aa,
sucre, lipide est obligatoire

Critères morphologiques

 Macromarphologique  Micromarphologique
 La couleur du mycelium  La sporulation
aérien et du substrat
Présence de pigment  Présence ou non de
sporange
 fragmentation ou non du
mycélium 7
Critères chimiques
 Acides aminés
 Les acides aminés dans la
paroi se trouve dans le
peptidoglycane, chez les
actinomycètes on trouve des
aa particuliers (DAP,
Glycine…)
 Sucres
 il existe des sucres
caractéristiques et
notamment les couples
arabinose-galactose,
arabinose- xylose
On trouve également chez
quelques actinomycètes le
Madurose, Rhamnose et
Arabinose
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La combinaison des aa caractéristiques et des sucres
caractéristiques a permis d’établir des chimiotypes et une
classification selon les critères chimiques

Type IC DL DAP + GLYCINE

Type II D DL DAP + GLYCINE+ ARABINOSE+ XYLOSE
Type III B DL DAP + MADUROSE
Type III C DL DAP
Type III E DL DAP + RHAMNOSE + GALACTOSE
Type VI A DL DAP + ARABINOSE + GALACTOSE
Type V ORNITHINE + LYSINE
Type VI LYSINE
Type VII DAB + GLYCINE
Type VIII ORNITHINE

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Isolement et sélection de
souches productrices
d’antibiotiques

10
11
12
13
Propionibacterium
 PROPIONIBACTERIUM

Classification
Règne : Bacteria

Phylum : Actinobacteria

Classe : Actinobacteria
 
Ordre : Actinomycetales
 
Famille : Propionibacteriaceae
Genre : Propionibacterium
15
 PROPIONIBACTERIUM

Caractéristiques principales
du genre Propionibacterium
• Bacilles Gram+, asporulés immobiles et de formes irrégulière,

• Généralement catalase positif,

• Anaérobies ou aérotolérants,

• Le pH favorable est la neutralité,

• La croissance est optimale pour des températures comprises entre 30 et

37 °C.

• Elles peuvent se développer dans des milieux biliés et salés,

• Le métabolisme est de type fermentaire; les glucides sont attaquées avec

16
production de CO2, d’acides acétique et propionique.
 PROPIONIBACTERIUM

Quelques caractères permettant de différencier

les espèces du genre Propionibacterium

17
 PROPIONIBACTERIUM

les espèces du genre Propionibacterium sont

divisées en deux groupes selon leur habitat  

Le genre Propionibacterium

Propionibactéries du lait Propionibactéries de la peau

Ou Dans le domaine médical

propionibactéries classiques bactéries corynéformes anaérobies

18
 PROPIONIBACTERIUM

Habitat
Propionibactéries du Propionibactéries de
lait la peau
 fromage et autres  La peau
produits laitiers
 La bouche
 Sol
 Le tractus intestinal
 Ensilage des humains et des
 Saumure de animaux
fermentation des olives
19
 PROPIONIBACTERIUM

Différentes espèces du
genre Propionibacterium
Propionibactéries du lait Propionibactéries
de la peau
subsp freudenreichii
P. freudenreichii P. acnes
subsp shermanii

P.jensenii - P. thoenii - P. granulosum -

P. acidipropionici P. avidum –
P propionicum
P. cyclohexanicum, 1997
P. microaerophilum, 2001 P. australiense, 2002
20
 Les
Propionibactéries
de la peau
21
 L’espèce type:
Propionobacterium
acnes

22
 Les
propionibactéries
du lait
23
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT

Généralités
Les bactéries propioniques laitières 
levain fromager pour les fromages à pâte
pressée cuite (type emmental)
 ouverture de la pâte (CO2)
 arôme caractéristique

Fin d ’affinage : environ 109 CFU/g de

bactéries propioniques laitière

Bactéries alimentaires,
elles sont intéressantes pour la production
de vitamine B12

24
 Principales
LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT

caractéristiques
• Leur GC% varie de 64 à 68% selon les espèces.

• Temps de génération est élevé, 7 h à 10 h sur milieu au

lactate de sodium (YEL), et 5 à 10 j sont nécessaires pour
obtenir des colonies sur le milieu gélosé YEL.

• Elles sont mésophiles, leur optimum de croissance se situe

entre 25 et 35 °C.

• La plupart des souches sont thermorésistantes (72°C. 15s).

• La thermisation (60-63°C. 2-10 s) appliquée au lait des

Emmentals ne détruit donc pas les souches sauvages. 25
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT

Exigence nutritionnelle
Sucres Glucose,lactose, fructose
Sources de Acides lactique, acides
carbones Acides citrique, acides aspartiques

Alcools Glycérol, érythritol, adonitol

Besoins impératifs Biotine (vitamine H), acide

en vitamines pantothénique (vitamine B5)
les principaux (Na,P,K,Mg,Mn,Ca,S,Fe ).
minéraux
Les principaux Le propionate, l’acétate et le gaz
produits de carbonique 26
fermentations
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: dénombrement

Dénombrement
Pesée aseptique

10 g fromage + 90
ml de citrate de
sodium 2%

Homogénéisation
pendant 30s 27
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: dénombrement
1 ml

9 ml d’ eau
peptonée
1 ml
à 0,1 %
stérile

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7

Ou bien
LGA (Lithium-Glycérol-
YELA (Yeast-Extract-
Agar)
Lactate-Agar

Incubation en anaérobiose à 30°C

pendant 10 jours 28
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: dénombrement

Sélectivité des milieux est due

YELA (Yeast-Extract- Lactate-Agar) absence d'oses

LGA (Lithium-Glycérol- Agar) absence d'oses + lithium

comme inhibiteur et
dégradation du glycérol
• Utilisation de milieux régénérés : 20 min au bain marie
à ébullition suppression des dérivés de l’O2

• Anaérobiose :
– Chambre anaérobie
– Jarre anaérobie
29
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: isolement

Isolement
Isolement d’une
Colonie bien séparée Le milieu SLA
(Sodium
Lactate Agar )

Incubation en anaérobiose à 30°C

pendant 7 jours

30
Identification
présomptive

31
 Forme et couleur des DU LAIT
LES PROPIONIBACTÉRIES

colonies
 Colonies lenticulaires de couleur variable (crème, rose,
orange et rouge brun)

P. freudenreichii P. freudenreichii
• Colonies de couleur crème de
diamètre supérieur à 2 mm.

• Sur LGA, l'observation d'un

halo de décoloration traduisant
la fermentation du glycérol
(virage du pourpre de
bromocrésol du violet au jaune).
32
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT

Coloration du Gram
La forme peut
aller de petit
bâtonnet à la
forme cocoidale

Elles sont regroupées

en paires ou en courtes
chaînes ou en V ou en Y
ou en amas
33
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

Fermentation de l’acide
lactique
Incubation à 30°C pendant
Tubes contenant de milieu Van 7 jours en anaérobiose
Niel faiblement gélosé (0,3%)
en surfusion sont ensemencés
dans la masse
Résultats

Van Niel contient Formation de gaz (CO2)

de lactate comme seul
source de carbone
34
LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

Réduction des nitrates

Ensemencement d’une gélose au nitrate en
tube incliné

Incubation à 30°C pendant 7 jours en

anaérobiose. Le milieu au nitrate doit être
enrichi d’extrait de levure (0,5g/l)

Mise en évidence de nitrite

35
LES PROPIONIBACTÉRIES LAITIÈRES: identification présomptive

Hydrolyse de
Principe l’esculine

L'esculétine réagit avec les ions Fer III

pour former un précipité noir dans le milieu
36
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

Technique
Ensemencement par piqûre centrale d’une
gélose à esculine

Incubation à 30°C pendant 7jours

Milieu Milieu avec forte

grisâtre. Pas coloration noir :
d’hydrolyse de hydrolyse de
l’esculine : l’esculine
esculine - esculine +
37
 Fermentation de substrats
LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

carbonés

o Extrait de levures ,
NaCl, Peptones Résultat
pancréatiques, K2HPO4,
o Agar à 3g/l,
o Bleu de bromothymol: Indicateur
coloré de pH
Jaune : acidification
o Substrats carbonésVert bleu du milieu
38
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

Culture sur lait

tournesolé Incuber à 30°C/
7 jours
Lait tournesolé ensemencé

A: acidification
C: coagulation décoloration du lait

39
 LES PROPIONIBACTÉRIES DU LAIT: identification présomptive

Croissance en présence de
sels biliaires
Incuber à 30°C/
Milieu de base (bouillon
7 jours
nutritif enrichi de 0,5%
d’extrait de levure)
additionné de 20% de bile
ensemencé Résultats

Croissance
40