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MÉTODOS
MICROBIOLÓGICOS
RÁPIDOS
Dewin Marquez P.
Lila Maturana P.
Gisell Mercado P.
Alcides Oviedo P.
Laura Prada L.
Contenido
01 Introducción
02 Tipos de métodos
microbiológicos rápidos
03 Validación
04 Entrenamiento
Introducción
3
Métodos convencionales
Limitaciones
4
Métodos microbiológicos rápidos (RMM)
5
Usos de
los RMM
01
Mejor rendimiento
04 Reducción de errores
02
03
Eficiencia laboral
7
Aceptación Regulatoria
Con respecto al control y reducción de contaminación de microbios en productos, la FDA apoya a quienes:
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Tipos de Métodos Microbiológicos Rápidos
La RMM o los métodos alternativos se pueden clasificar en varios medios. Una forma es
basada en la tecnología o aplicación. Los métodos pueden agruparse en 6 categorías:
01
Análisis de componentes celulares
Amplificación de ácidos
03
nucleicos 02
Medición directa
05
04
Espectroscopía óptica
06 Sistemas microelectromecánicos 9
Métodos basados en el crecimiento
Medios selectivos
para la detección
rápida de
microorganismos 06 01 Microbiología
de impedancia
específicos
Tinción fluorescente y
recuento de 05 02 Detección de
microcolonias 1 dióxido de carbono
mediante excitación
láser
Utilización de
Uso de imágenes digitales y
autofluorescencia para la
04 03 sustratos
bioquímicos y
detección rápida y el carbohidratos
recuento de micro colonias
10
Detección de dióxido de carbono
AWESOME
SLIDE
Microbiología de impedancia
La relación entre la capacitancia en la superficie del electrodo y la
conductancia de los cambios iónicos en los medios de los subproductos
producidos durante el crecimiento permite el cálculo de la impedancia..
Uso de imágenes digitales y autofluorescencia
para la detección rápida y el recuento de micro
colonias
Este método resuelve el problema de los métodos de cultivo en los que la
visualización de colonias requiere varios días.
AWESOME
SLIDE
AWESOME
(PCR) para detectar bacterias y otros microbios.
SLIDE
Citometría de flujo y
Citometría en fase
sólida
2
Demostración del marcado
directo de células individuales
con tintes de viabilidad o
marcadores fluorescentes sin
necesidad de crecimiento
celular
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Demostración del marcado directo de células
individuales con tintes de viabilidad o
marcadores fluorescentes sin necesidad de
crecimiento celular
AWESOME
SLIDE
Bioluminiscencia de ATP
Prueba de Endotoxinas
16
Bioluminiscencia de ATP
ATP
• En la actualidad, existen
numerosos sistemas que utilizan
dispositivos del tipo escobillón o
hisopo para la toma de muestra
y luminómetros portátiles,
robustos, sensibles y fáciles de
utilizar que ofrecen lecturas
rápidas (en menos de 1 min) del
nivel de ATP
19
Bioluminiscencia de ATP
20
Prueba de Endotoxinas
Limulus polyphemus
21
Verificar
22
Ionización por desorción láser asistida por matriz
La ionización MALDI
(desorción/ionización
mediante láser asistida
por Matriz), acoplada a
un analizador TOF
(tiempo de vuelo), es una
técnica de ionización
suave utilizada en
espectrometría de masas
23
Espectroscopía óptica
Los métodos de espectroscopia óptica utilizan dispersión de luz y otras técnicas ópticas para detectar,
enumerar e identificar microorganismos (por ejemplo, contadores de partículas en el aire en "tiempo real").
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Amplificación de Ácidos Nucleicos
Riboimpresión
Se aprovecha que la secuencia 16S del ARNr está altamente conservada a nivel de género y
especie.
25
MÉTODOS DE PCR
• La PCR amplifica secuencias específicas de ADN a lo largo
del genoma microbiano.
26
SECUENCIACIÓN DE
GENES
27
SISTEMAS MICROELECTROMECÁNICOS
MICROARREGLOS DE ADN
28
SELECCIÓN DE
MÉTODOS
MICROBIOLÓGICOS
RÁPIDOS
29
• Al elegir implementar una RMM, es
importante asegurarse de que el nuevo
método apropiado para las fórmulas,
instalaciones y personal de la empresa.
Por ejemplo, La introducción de un
PARA TENER EN CUENTA… método con un mayor nivel de
sensibilidad debe estar alineada con la
biocarga existente en materias primas,
medio ambiente y productos terminados.
La guía para la implementación de
métodos rápidos está disponible tanto en
la USP y el Ph.Eur.
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Consideraciones clave
• Rendimiento de la inversión
- costes de explotación del método convencional;
- costes de explotación e inversión del RMM;
- ahorro de costes y evitación de costes del método rápido.
• Costo-beneficio
- El desembolso de capital y los costos de funcionamiento
dependerán del RMM elegido y del equipo adquirido.
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Validación
Validación
La evaluación del equipo
definir la
característica de la
prueba actual que el
Estrategia de validación en los diferentes grupos
RMM debe
reemplazar
de métodos
Métodos Métodos
demostrar la determinar las
cualitativos cuantitativos
equivalencia del medidas pertinentes
RMM con el método que establecen la
actual en ausencia de
la muestra de
equivalencia del
RMM con el método
• Exactitud • Exactitud
producto
Estrategia actual
• precisión • Precisión
de • Especificidad • Especificidad
validación • Límite de • Linealidad
detección • Rango
• Robustez • Robustez
demostrar la
equivalencia del
Esto puede requerir
RMM con el método
un análisis
establecido en
estadístico
presencia de la
muestra de ensayo.
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Cualificación del equipo
Introducción
mediante la
calificación de
Origen y
aprobación del
Roles y instalación (IQ)
responsabilidades
plan
Validación
del plan de
val – idation Calificación
(VP) operativa (OQ)
Descripción del
Derivación
sistema
Calificación de
rendimiento
Descripción (PQ)
general del
sistema
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Transferencia de método
37
Entrenamiento
38
Bibliografía
39
Muchas Gracias