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Université Sultan Moulay Slimane

Ecole Supérieure de technologie


Béni Mellal

Technique de dosage d’
histamine
Réalisé par:
MOHAMED ELGAROUG

Encadrement:
Prof. Wafa TEROUZI

Filières: DUT-AI2
Plan
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01. Dosage d’Histamine


01-1. Définition
01-2. Objectif

02. Méthode de dosage d'Histamine


02-1. Méthode AOAC
02-2. Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC)

03. Méthode spéctrofluorimétrique de Lerke et Belle


03-1. Principe
03-2. Réactif
03-3. Appareillage
03-4. Dosage
Introduction 3

En chimie analytique , le dosage est l'action qui


consiste à déterminer la quantité de matière , la fraction
ou la concentration  d'une substance précise présente
dans une autre ou dans un mélange

méthodes physico-chimiques de dosage 


méthodes physiques de dosage
méthodes chimiques de dosage
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01
Dosage d’histamine
Définition
Objectif
Définition/Objectif 5

L'histamine résulte de la dégradation de l’histidine (acide aminé) présente chez le poisson en


histamine par décarboxylation (réaction chimique) sous l’action d’enzymes bactériennes.

Objectif
Déterminantion de la qualité des produits halieutiques + éviter l’intoxication chez le
consommateur.
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02

Méthode
de
Méthode HPLC
AOAC dosage
Méthode de dosage d’histamine
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Méthod AOAC

Principe Avantages Inconvénients

L’histamine est extraite de


l’échantillon avec une Très précise, sensible Longue à mettre en œuvre
solution de méthanol à 75%. et reproductible. et elle doit être effectuée par
L’extrait méthanolique est des analystes
passé dans une colonne expérimentés.
échangeuse
d’ions puis l’histamine éluée
est complexée avec OPA.
Méthode de dosage d’histamine
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HPLC

Principe Avantages Inconvénients

cette méthode repose sur Nécessite un équipement


l’utilisation d’une phase mobile et Très précise, sensible sophistiqué et du personnel
d’une phase stationnaire . La HPLC et reproductible. spécifiquement formé à ce
repose sur la circulation d’un fluide matériel.
dans une colonne.
Les amines biogènes sont extraites
de l’échantillon à tester puis on
pratique une dérivatisation de ces
amines
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03

Méthode specrtofluorimétrique
Principe
Réactif
Appareillage
Dosage
Définition 10

La méthode Lerke et Bell (1976) de dosage de l’histamine


est applicable à tous les produits de la pêche quelque soit,
leur mode de conditionnement ou de préparation.
Principe
Cette méthode est procédée par l’extraction de l’histamine
par une solution de TCA puis sa fixation sur la résine échanguse
d’ion, l’élution par l’acide Chlorhydrique pour être dosée par
fluorimétrie après addition d’ortho-phtalaldehyde (OPA).
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Réactifs

Solution d’acide chlorhydrique à 0.2N

Solution tampon à pH 4.62

Solution d’acide chlorhydrique à 0.7N


TCA : solution trichloro-acétique

Solution d’hydroxyde de sodium 1N


Solution d’O-phtaladéhyde (OPA)
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Appareillage

Balance Hachoir PH mètre Mixeur

Micropipettes Colonne en verre Système de filtration Fluorimètre


Dosage selon la méthode spéctrofluorimétrique
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de Lerke et Belle

01 02 03
Extraction Purification. Complexation
Dosage 14

Extraction Purifaction Complexation

 5g Chair+ 45ml de TCA (10%) +  Chromatographie par une colonne remplie de résine  1ml de NaOH + agitation
Homogénéisation+ filtration Filtrat échangeuse d’ions:
 2ml éluât+1ml NaOH + 0,1 OPA
 0,2 ml de filtrat + 20ml de la solution  L’ajout de 100ml du tampon
tampon d’acétate 3.30min
 L’ajout de 20 ml du HCl (0,2 N) Eluât  2ml HCL 0,7N
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Méthode spéctrofluorimétrique de Lerke et Belle

2ml
Solution(1)+100ml tampon éluât+1ml
Filtration NaOH+0,1
Solution(2)+ OPA
5g Chair+45ml TCA 0,2ml filtrat + 2ml HCL
20ml HCL
20ml tampon 0,7N+
0,2N
Solution(3

3:30
min

fluorimétre
Filtrat
Solution (1) Solution(2) Eluât Solution(3)

Extraction Purification Complexation


Conclusion 16

En fin il faut connaitre que l’objectif majeur de dosage


d’histamine est de comparer la qualité marchande des
produits destinés à l’export et ceux vendus dans le
marché local dit dans les grandes surfaces. Et aussi
pour éviter l’intoxication des gens.
Merci