Staphylococcus

Cat+
Micrococcus

DIAPO4
Coques
Enterococcus

Cat-
Streptococcus
Gram+

Bacillus

Cat+
TEST CATALASE
Bacilles

Lactobacillus

Neisseria
Cat- Oxy+
Coques

Acinetobacter
Oxy-
Gram-

Pseudomonaceae
ORIENTATION DE L’IDENTIFICATION

TEST OXYDASE

Oxy+

Vibrionaceae
Bacilles

Enterobacteriaceae
Oxy-
 MACRO-GALERIE

Exploration du:
Métabolisme énergétique
Métabolisme glucidique
Métabolisme protidique
 Métabolisme énergétique
Différences entre respiration et fermentation
Les bactéries chimiotrophes oxydent des molécules organiques et réduisent des
coenzymes (NAD+, FAD+, NADP+ ...)
Leur réoxydations passent :
- par une chaîne de transporteurs avant de réduire un accepteur final, on parle
de respiration (O2 = respiration aérobie, NO3-, NO2-, SO42-... = respiration anaérobie)
- par une molécule organique interne, on parle de fermentation

VF Type respiratoire

Hugh et Leifson Voie d’attaque du glucose

Bouillon nitraté Présence de Nitrate réductase
 Métabolisme glucidique

 Un glucide utilisé prouve que la bactérie

 peut le faire pénétrer
 a les enzymes permettant son hydrolyse en ose et
 possède le métabolisme d'utilisation l'ose.
 Mise en évidence :
 d'un produit ou de l'utilisation du substrat
 d'une enzyme
Lecture des résultats
 par acidification ou alcalinisation du milieu et virage d'un
indicateur coloré
 par la mise en évidence d'un produit formé (chromogène)
 par culture sur un milieu présentant un substrat unique
 Métabolisme glucidique
Citrate Simmons Utilisation du citrate comme
source unique de C.
Hajna Kligler Utilisation du glucose, du lactose
Production de H2S, de gaz.
Disque ONPG Mise en évidence de l’ONPG
hydrolase
Mannitol mobilité nitraté Utilisation du mannitol +Mobilité.
+ Présence de nitrate réductase.

Clark Lubs: VP et RM Type de fermentation:

Acide mixte (RM), Butanediolique
(VP).
 Métabolisme protidique
• On étudie
– La capacité d’hydrolyser une protéine
– La dégradation de différents acides aminés ou de
dérivés azotés comme l’urée

• Mise en évidence
– De produit de réaction enzymatique

• Lecture des résultats

– par présence d’un indicateur de pH (LDC,ODC, ADH,
Uréase)
– par l’ajout d’un réactif (Tryptophanase)
– par l’utilisation d’un produit visible à l’œil nu (TDA)
 Métabolisme protidique
Urée indole Présence de l’uréase
Présence de la TDA
Présence d’une tryptophanase ou
Production d’indole
Présence de l’arginine dihydrolase
ADH, LDC, ODC
Présence de la lysine décarboxylase
Présence de l’ornithine décarboxylase

Gélatinase Présence d’une protéase

 Milieu VF

• OBS:
OBS Culture dans tout le tube

• INT:
INT Bactéries cultivant en
présence et en absence d’O2

• CC°: Bactéries aéro-anaérobies

Milieu Hugh et Leifson

• OBS: Virage coloré du vert au jaune

en condition aérobie et anaérobie

• INT: Acidification du milieu en

condition aérobie et anaérobie

• CC°: Voie d’attaque du glucose

fermentaire sans exclure la voie
oxydative
 Métabolisme glucidique

Citrate Simmons Utilisation du citrate comme

source unique de C.
Hajna Kligler Utilisation du glucose, du lactose
Production de H2S, de gaz.
Mannitol mobilité nitraté Utilisation du mannitol.
Mobilité.
Présence de nitrate réductase.
Clark Lubs: VP et RM Type de fermentation:
Acide mixte (RM), Butanediolique
(VP).
Milieu Hajna Kligler : un exemple
Culot:
OBS:Virage
OBS du RP du rouge au jaune.
INT: Acidification du milieu donc le Glu a été fermenté en composés
acides.
CC°:Glu+
CC°:
OBS:Présence
OBS: de bulles.
INT: La fermentation du glucose s’accompagne d’une production de
gaz provoquant la fragmentation de la gélose.
CC°: Gaz+
Pente:
OBS: Virage du RP du rouge au Jaune.
INT: Acidification du milieu, le glucose est utilisé en 1er mais comme
il est en faible quantité la croissance se poursuit grâce à l’utilisation
du Lactose.
CC°: Lac+
Jonction culot-pente:
Pas de production d’H2S. H2S-
 Test ONPG

• OBS: Apparition d’une coloration

jaune

• INT: Hydrolyse de l’ONPG en

ONP
• CC°: Présence de beta galactosidase
Bactérie beta galactosidase +
Citrate Simmons

• OBS: Absence de culture sur milieu citrate

Simmons

• INT: Bactérie ne pouvant pas cultiver

avec le citrate comme seule source de
C.

• CC°: Bactérie Citrate -

Milieu Mannitol mobilité Nitraté
• OBS: Virage coloré du rouge au jaune
• INT: Acidification du milieu Utilisation du
mannitol
• CC°: Bactérie Man+
• OBS: Trouble autour de la piqûre centrale.
• INT: Diffusion de la bactérie dans la gélose
• CC°: Bactérie Mob+
• OBS: Coloration rouge après ajout de
Réactif de Griess
• INT: Présence de nitrites.
• CC°: Bactérie a transformé les nitrates du
milieu en nitrites Bactérie NRB+
 Test RM

+RM

Test VP

+Naphtol
+NaOH
Milieu Clark Lubs
 Test RM

• OBS: Coloration rouge

• INT: Acidification du milieu

Utilisation du glucose et production
d’acides mixtes pH<4.5

• CC°: Bactérie RM+ réalisant la

fermentation acide mixte
 Test VP

• OBS: Absence de Coloration rouge

vif en surface

• INT: Présence d’acétoine

• CC°: Bactérie VP+ réalisant la

fermentation butanediolique
 Métabolisme protidique

Urée indole Présence de l’uréase

Présence de la TDA
Production d’indole

ADH, LDC, ODC Présence de l’arginine dihydrolase

Présence de la lysine décarboxylase
Présence de l’ornithine décarboxylase
 TDA -
+ FeCl3

UREASE -
TDA +
Lecture
directe de
l’uréase

Milieu urée-indole UREASE +

Ensemencé avec la INDOLE -
bactérie

+Kovacs

INDOLE +
Test uréase Test TDA Test Indole

Milieu Urée Indole

 Test uréase

• OBS: Milieu orangé

• INT: Absence de dégradation de

l’urée

• CC°: Bactérie uréase-

 Test TDA

• OBS: Milieu jaune

• INT: Pas de production d’acide

indole pyruvique, la bactérie ne
possède pas la tryptophane
désaminase.

• CC°: Bactérie TDA-

 Test Indole

• OBS: Coloration rouge vif en

surface

• INT: Production d’indole grâce à la

présence chez la bactérie d’une
tryptophanase.

• CC°: Bactérie indole+

ADH LDC ODC

ADH, LDC, ODC

 Test ADH

• OBS: Coloration jaune du milieu

• INT: Les bactéries ont acidifié le

milieu à partir du glucose mais ne
l’ont pas réalcalinisé en utilisant
l’arginine, les bactéries ne possèdent
pas d’arginine dihydrolase.
• CC°: Bactérie ADH-
 Test LDC

• OBS: Coloration violette du milieu

• INT: Les bactéries ont acidifié le
milieu à partir du glucose puis
réalcalinisé en décarboxylant l’acide
aminé la lysine

• CC°: Bactérie LDC+

 Test ODC

• OBS: Coloration violette du milieu

• INT: Les bactéries ont acidifié le
milieu à partir du glucose puis
réalcalinisé en décarboxylant
l’ornithine.

• CC°: Bactérie ODC+

• Bactéries: Bacille Gram-, oxydase-, AAF,
voie d’attaque fermentative, NR+.
– Enterobactérie

• Glc+, Lac+, H2S-, Gaz+, Man+, Mob +,

ODC+, LDC+, ADH-, Ind+ uré-, TDA-,
RM+, VP-,.
 Enterobacter

Providencia
Citrobacter

Salmonella
Escherichia

Klebsiella

Yersinia
Shigella

Proteus
Serratia
+ +
Glc +  + + + + + + +

Lact + + + + - - - - - -
ONPG + + + + + - +/- - - +
Indole + - - +/- - - +/- +/- + +/-

VP (Acétoïne) - - + + + - - - - +*

Citr - + + + + +/- - +/- + -

Mob. + + + - + + - + + +*
Urée - - - + - - - + - +
PDA - - - - - - - + + -
H2 S - +/- - - - + - +/- - -