La spectroscopie d’UV-visible Réalisée par : Chahinez Louerrad
Encadré par: Mme, Bendahmane Année universitaire: 2020/2021 PLAN DE TRAVAIL:
Introduction Principe Loi d’absorption de la lumière Appareillage et Fonctionnement Application Exemple d’application Les avantages Conclusion INTRODUCTION La spectroscopie d’absorption dans l’UV et le visible est une méthode très commune dans les laboratoires. Elle est basée sur la propriété des molécules d’absorber des radiations lumineuses de longueur d’onde déterminée.
I - DOMAINE SPECTRAL Le domaine UV-visible s'étend environ de 10 à 800 nm. UV-lointain : 10 nm - 200 nm. Porches-UV : 200 nm - 400 nm. visible : 400 nm - 800 nm. SPECTRE ÉLECTROMAGNÉTIQUE ET DOMAINE D’OBSERVATION DES SAUTS ÉLECTRONIQUES PRINCIPE: L‘énergie interne d’une molécule est composée de la somme de l‘énergie électronique responsable des liaisons entre les atomes, et des énergies de vibration et rotations dues aux mouvements interne des électrons dans la molécule. Les mouvements de translation des molécules n’intéressent pas directement le spectroscopies, car cette énergie n’est pas quantifiée. ∆Etot = ∆Erot + ∆Eéle + ∆Evib Lorsque la molécule reçoit un rayonnement ultraviolet ou visible, et qu’elle peut l’absorber, son énergie interne augmente en tant qu’énergie électronique. Cette dernière étant en effet généralement très supérieure aux énergies de vibration ou de rotation qui relèvent du domaine infrarouge. Transition électronique (UV-Visible)
Saut d’un électron d’une orbitale moléculaire fondamentale occupée à une
orbitale moléculaire excitée vide. Lorsqu’elle a lieu, la matière absorbe un photon dont l’énergie correspond à ∆E entre ces niveaux fondamentale et excité. LOI D’ABSORPTION DE LA LUMIERE
LOI DE BEER-LAMBERT Soit une lumière monochromatique traversant une solution absorbante de concentration C contenue dans une cuve d’épaisseur l. Une partie de ce rayonnement sera absorbée par l’échantillon et une partie sera transmise. Lambert et Beer ont étudié les relations qui existent entre I0 et I : l'intensité d'une lumière monochromatique traversant un milieu où elle est absorbée décroît de façon exponentielle :
I = I0 E –klC I0 est l'intensité de la lumière incidente * I est l'intensité après passage à travers la cuve contenant la solution (intensité transmise) * l est la distance traversée par la lumière (épaisseur de la cuve) (en cm) * C est la concentration des espèces absorbantes * k est une constante caractéristique de l’échantillon, il exprime l'atténuation de l'énergie du rayonnement électromagnétique à travers le milieu.
Cette équation peut se réécrire : Log (Io/I) = klC/2.3 = εl C.
* log (I0/I) est appelé absorbance (A) * I/I0 = T est la transmission (T) •% T est la transmittance
•ε est le coefficient d'extinction molaire
• A = - log T = εl C
Validité de la loi de Beer-Lambert:
Lumière monochromatique . Faible concentration. Solution ne doit pat être fluorescente, ni hétérogène.
Solution n’est pas le siège d’une réaction photochimique.
TECHNIQUES EXPERIMENTALES
V.1 - APPAREILLAGE ET FONCTIONNEMENT L’étude des absorptions nécessite l’utilisation d’un appareil appelé spectromètre. SPECTROMÈTRE D'ABSORPTION UV- VISIBLE MONOFAISCEAU
Une source polychromatique (émettant dans l’UV ou le visible) est placée devant un prisme. Ce système dispersif va décomposer le rayonnement polychromatique émis par la source. En orientant correctement le système diaphragme-échantillon-photodétecteur, la solution contenue dans la cuve sera irradiée avec un rayonnement quasi monochromatique. Le diaphragme, une simple fente fine, permet d’éclairer l’échantillon avec un faisceau de faible largeur, donc de bonne qualité monochromatique, le photodétecteur mesurant quant à lui l’intensité du rayonnement transmis après traversée de la solution échantillon, notée I t,λ. SPECTROMÈTRE D'ABSORPTION UV- VISIBLE DOUBLE FAISCEAU
Dans le montage à double faisceau, la source passe par le monochromateur puis est partagée en 2 faisceaux: l'un dirigé vers le «blanc» c'est-à-dire le compartiment contenant le solvant, l'autre dirigé vers le compartiment de l'échantillon. L'intensité lumineuse est mesurée par 2 photodiodes ou un photomultiplicateur. APPLICATION:
Analyse qualitative Les spectres UV fournissent généralement peu de renseignements sur la structure moléculaire des composés comparés aux spectres IR. Néanmoins, on les utilise soit pour une confirmation soit pour une identification grâce aux règles empiriques.
Analyse quantitative L’analyse quantitative par la spectrométrie UV-visible est très employée grâce à l’utilisation de la loi de Beer-Lambert. Comme applications, on peut citer : Dosage du fer dans l’eau ou dans un médicament
Dosage des molécules actives dans une préparation pharmaceutique
Dosage du benzène dans le cyclohexane
Autres applications D’autres applications sont connues pour le Contrôle Qualité ou le suivi de la cinétique d’une réaction, la détermination des constantes de dissociation des acides ou des constantes de complexassions, la détermination des masses molaires... LES AVANTAGES DE LA SPECTROSCOPIE UV-VISIBLE:
un large domaine d’application (chimie minérale, organique, biochimie, ...);
90% des analyses médicales reposent sur la spectrométrie UV-visible,
une grande sensibilité : les limites de détection atteignent couramment 10-4M à
10-5 M et jusqu’à 10-6 M après certaines modifications,
une sélectivité largement adaptable : il existe souvent une longueur d’onde que seuls certains corps à doser absorbent.
une grande précision : les erreurs ne dépassent pas 5% et peuvent être réduites à quelques dixièmes de pour-cent sous certaines précautions, la simplicité et la rapidité d’utilisation. CONCLUSION: La spectroscopie UV-Visible permet ainsi d’accéder qualitativement à des renseignements quant à la nature des liaisons présentes au sein de l’échantillon (via l’ordre de grandeur de λmax et εmax) mais également de déterminer quantitativement la concentration d’espèces absorbant dans ce domaine spectral (via la loi de Beer-Lambert). Non destructive et rapide, cette spectroscopie est largement répandue en travaux pratiques de chimie (après construction d’une droite d’étalonnage et report d’une mesure expérimentale) ainsi qu'en analyse chimique ou biochimique. On peut citer par exemple le dosage des ions nitrates dans les eaux de piscine (après adjonction d’un additif formant un complexe coloré) ou la détermination de la pureté de l’ADN et de certaines protéines après leur extraction. + PLUS VIDEO SUR YOUTUBE
