DEFINITIONS (1)

Stérilisation:
•Opération ayant pour but d’éliminer ou de détruire tous les
microorganismes vivants, portés par un objet parfaitement
nettoyé

Stérilité:
•Absence de microorganisme vivant
•La probabilité d’avoir une unité non stérile soit < 10-6
 Résultat : atteindre un niveau d’assurance de stérilité
(NAS) 10-6 : probabilité de rencontrer une unité non stérile
inférieure à 1 par million.
 DEFINITIONS (2)
Niveau d’assurance de stérilité (NAS)
On ne peut en effet ni garantir dans l’absolu, ni vérifier, la
stérilité de tous les articles contenus dans une population
stérilisée.
L’inactivation des microorganismes par des procédés physiques
ou chimiques suit une loi exponentielle (probabilité statistique
qu’un microorganisme puisse survivre ).
Le NAS d’un procédé de stérilisation indique le degré
d’assurance avec lequel une population d’articles est rendue
stérile par le procédé considéré.
Un NAS de 10− 6, par exemple, correspond à une probabilité
d’au plus 1 microorganisme viable pour 1 × 106 unités
stérilisées du produit final.
Le NAS associé à un procédé, pour un produit donné, est établi
sur la base d’études de validation appropriées.
NECESSITE DE STERILISER???
 Éviter l’introduction de microorganismes pathogènes ou pas
dans l’organisme :
 Matériel médicochirurgical
 Préparations médicamenteuses par voie oculaire ou

parentérale ou appliquées sur peau lésée

Alimentation des personnes sensibles
(immunodéprimés
Alimentation entérale
Air ambiant des blocs opératoires

 Ces microorganismes peuvent être dangereux :

Pour l’homme : si pathogène infection voire septicémie
Pour le médicament : déstabilisation
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (1)

 Détruire les microorganismes / chaleur sèche ou humide

 Appliquée à des préparations ou matériels conditionnés
dans son conditionnement définitif ou dans des protecteurs
de stérilité
 Pour les médicaments : chaleur humide = méthode de choix
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (2)
 Sensibilité des microorganismes à la chaleur :
 Espèce microbienne et forme végétative ou sporulée
 Durée du traitement
 Nombre initial de germes
 Température
 Milieu
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (3)
 Sensibilité
des microorganismes à la chaleur:
Durée et nombre de germes
Le nombre de survie varie en sens inverse de la durée du
traitement selon une équation logarithmique: Log N/N = - kt
²

N0 : nombre de germes initial

N : nombre de germes au temps t
 La stérilité est un état éphémère
 « il convient chaque fois que possible, de choisir un
procédé permettant la stérilisation du produit dans son
récipient final (stérilisation terminale) »
 Travailler en zone d’atmosphère contrôlée
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (4)
 Sensibilité
des microorganismes à la chaleur:
Diminution du nombre de germes initiaux

 Matériel et verrerie très propres

Matières premières très pures et bien conservées
 Eau fraichement distillée, pour les solutions

aqueuses
Atmosphère aussi pauvre en germes que
possible
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (5)
 Sensibilité
des microorganismes à la chaleur:
La température

Temps nécessaire à la destruction des spores d’une

espèce microbienne en fonction de la température :
relation logarithmique

Exemple : spores de clostridium botulinium

9 min à 115°C 30 min à 110°C 4h à 100°C
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (6)
 Sensibilité
des microorganismes à la chaleur:
La nature du milieu
Humidité : les germes sont beaucoup plus résistants à la
chaleur en milieu sec qu’en milieu humide

Composition : agent bactéricide

pH
 STÉRILISATION PAR LA CHALEUR
Principe (7)
 Sensibilité
des microorganismes à la chaleur:
La nature du milieu
Humidité : les germes sont beaucoup plus résistants à la
chaleur en milieu sec qu’en milieu humide

Composition : agent bactéricide

pH
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR SECHE (1)

Pour cette méthode de stérilisation terminale, les conditions

de référence sont de 160 °C minimum pendant 2 h au moins
 D’autres barèmes : 170°C pendant 1h ou 180°C /30 min
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR SECHE (2)

Stérilisateur Poupinel
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR SECHE (3)
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (1)
 Production de vapeur d’eau par chauffage sous pression :
vapeur saturante = gaz stérilisant
 Dénaturation des macromolécules bactériennes (noyau et

parois) sous l’action de la chaleur: hydrolyse partielle des

chaînes peptidiques

La stérilisation par la vapeur saturée sous pression est la

méthode recommandée par la pharmacopée,
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (2)
Autoclave de laboratoire
Autoclave de laboratoire
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (3)
Fonctionnement de l’autoclave de laboratoire
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (4)
Autoclave industriel
 C’estune enceinte à une ou deux portes étanches par un
joint dans laquelle on admettra de la vapeur ou de l’eau
surchauffée
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (5)
Diagramme de stérilisation
Les différentes phases d’un
cycle de stérilisation sont :
- purge de l’air
- pré-traitement ou
chauffage de la charge
- stérilisation
- refroidissement
- séchage
STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE (6)
Stérilisateur à la vapeur sous pression en
continu
2 colonnes d’eau A et C, et la chambre de stérilisation B
Colonne A : entrée en continu des flacons à stériliser qui

vont croiser l’eau chaude et s’échauffent

 Colonne C : sortie des flacons où ils vont croiser l’eau

froide
 Chambre de stérilisation B : séjour des flacons 20 à 30
min dans la vapeur à 121°C en effectuant des
mouvements de montée et de descente ( injection de
vapeur d’eau sous pression)
Stérilisateur à la vapeu
sous pression
en continu
STÉRILISATION PAR LES GAZ (1)
Oxyde d’ethylene
STÉRILISATION PAR LES GAZ (2)
Formaldehyde
STÉRILISATION PAR LES GAZ (3)
Acide peracetique
STÉRILISATION PAR LES RAYONNEMENTS
STÉRILISANTS (1)
Rayonnements inonisants  et 
STÉRILISATION PAR LES RAYONNEMENTS
STÉRILISANTS (2)
Les irradiateurs utilisant les électrons accélérés ()
STÉRILISATION PAR LES RAYONNEMENTS
STÉRILISANTS (3)
Les irradiateurs à rayonnement 
STÉRILISATION PAR LES RAYONNEMENTS
STÉRILISANTS (4)
La radiostérilisation UV
STÉRILISATION PAR LES RAYONNEMENTS
STÉRILISANTS (4)
La radiostérilisation UV
STÉRILISATION PAR FILTRATION (1)
STÉRILISATION PAR FILTRATION (2)
PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(1) :
Quand???
 PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(2) :
L’objectif de la préparation aseptique est de maintenir la
stérilité d’un produit obtenu à partir de composants
préalablement stérilisés par l’une des méthodes citées plus
haut. Le moyen d’atteindre cet objectif est d’opérer dans
des conditions et au sein d’installations conçues pour
empêcher la contamination microbienne. La préparation
aseptique peut comprendre le remplissage et la fermeture
aseptique des récipients, le mélange aseptique des
composants de la formulation suivi du remplissage et du
conditionnement aseptiques.
 PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(3) :
Pour maintenir la stérilité des composants et du produit
au cours de la préparation, il convient de porter une
attention vigilante aux aspects suivants :
–  environnement,
–  personnel,
–  surfaces critiques,
–  stérilisation des récipients/fermetures et opérations
de transfert,
–  durée maximale de stockage du produit avant mise en
récipient final.
 PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(4) :
La validation du procédé de préparation comprend des
contrôles adéquats portant sur l’ensemble de ces
paramètres, et le procédé lui-même fait l’objet de
vérifications régulières par simulation avec des milieux de
croissance microbienne, qui sont ensuite mis en incubation
et examinés en vue de la détection d’une éventuelle
contamination microbienne. Par ailleurs, dans le cas des
produits stérilisés par filtration ou préparés dans des
conditions aseptiques, un échantillon approprié de chaque
lot est soumis à l’essai de stérilité (2.6.1) avant libération
du lot.
PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(5) :
PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES (6) :
Filtration stérilisante de l’air
PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES(4) :
Les isolateurs et hottes
PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES (8):
Les enceintes stériles à flux d’air laminaire
 PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES (9):
Classification des enceintes stériles

4 types d’enceintes stériles : ≠ qualité de l’air qui y règne

 PRÉPARATION ASEPTIQUE ET ENCEINTES
STÉRILES (10):
Classification des enceintes stériles
Recommandations pour la surveillance microbiologique des
ZAC en activité
 CONTRÔLE DE STÉRILISATION (1):
Essai de stérilité
L’essai s’applique aux substances, préparations et produits
qui doivent être stériles selon la Pharmacopée. Toutefois,
un résultat favorable signifie seulement qu’aucun
microorganisme contaminant n’a pu être décelé dans
l’échantillon examiné, dans les conditions de l’essai.
CONTRÔLE DE STÉRILISATION (2):
Essai de stérilité
 CONCLUSION
 La stérilité est un état éphémère
 « il convient chaque fois que possible, de choisir un procédé
permettant la stérilisation du produit dans son récipient final
(stérilisation terminale) »
 Travailler en zone d’atmosphère contrôlée