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LES MICROSCOPES

REALISER PAR :
ELGHEYLANI MOHAMED
BAH AHMED SALEM
AIDA MARIEM

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PLAN
I. Introduction générale
II. Microscope optique
III. Microscope à fond clair
IV. Microscope à contraste de phase
V. Microscope à fluorescence
VI. Microscope inverse
VII. Conclusion

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Introduction générale
• Le microscope vient du mots grecs anciens  mikrós qui signifie
« petit » et skopeîn « regarder »
• La microscopie est un ensemble de techniques d'imagerie  des objets
de petites dimensions et invisibles à l'œil nu.
• Le premier microscope était inventé en 1595, à l’époque du roi Henri
IV. par Zacharias Janssen, un fabricant de lunettes hollandais,  qui a eu
l’idée de superposer deux verres de lentille dans des tubes
coulissants, afin de grossir de très petites choses.

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 Microscope optique

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Introduction

• définition :Le microscope optique


ou microscope photonique est un
instrument d'optique muni d'un
objectif et d'un oculaire qui permet
de grossir l'image d'un objet de
petites dimensions et de séparer
les détails de cette image afin qu'il
soit observable par l'œil humain.
• Domaine d’utilisation:il est utilisé
dans le laboratoire médical,
physique des matériaux et dans la
géologie.
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Schéma synoptique
Loeil d
l obser e
vateur

objectif oculaire I

L
im
ag
e
ca
pt
Object

ep
ar
la

tin
e
condenseur

Source
lumineuse
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Principe de fonctionnement :

• Le microscope optique utilise la lumière .


• Il est doté de deux lentilles : 
* l'objectif, pour agrandir l'objet que l'on souhait e observer (il existe
plusieurs grossissements) ;
* l'oculaire pour que les rayons arrivent à l'oeil de manière parallèle,
ce qui permet à l'oeil de se reposer . Des instruments supplémentaires
permettent de régler la quantité de lumière (le diaphragme ) ou la mise
au point pour affiner l'observation de l'échantillon placé sur la platine
porte-échantillon.

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Trajet optique

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Schéma de principe du microscope optique

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Etape 1 :L'objectif L1 donne une image A1B1 intermédiaire, réelle et
renversée de AB, située dans un plan image quelconque de L1 qui est dans
ce cas le plan focal objet de L2.

Etape 2 :A1B1 est alors objet pour l'oculaire L2 et comme il est situé dans
son plan focal objet L2 agit comme une loupe et donne une image A'B' à
l’infini qui sera virtuelle, renversée et plus grande que l'objet.

Etape 3 :Cette image à l'infini devient objet pour l'œil de l'observateur qui
n'accommode pas et l'observe comme au travers d'une loupe, à travers
l'oculaire L2.

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Fiche d'entretien et maintenance
• La qualité des examens de laboratoire dépend de l'état du microscope
et l'état du microscope dépend de l'entretien qu'on lui apportera.
Pour toutes ses composants contre la poussière l'humidité et les
chocs .
Composants Entretien
Les oculaires * Protection de la poussière: après utilisation,
mettre une housse sur le microscope.* Nettoyage
des oculaires : la lentille externe (où on met
l'oeil) se nettoie avec un chiffon sec ou un papier
qui ne raye pas (papier spécial pour les lentilles,
kleenex, sopalin, papier toilette).
Les objectifs * Nettoyage de l'objectif x100 à immersion:
essuyer l'huile après chaque utilisation avec un
papier qui ne raye pas (papier lentille, kleenex,
papier toilette).

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Composants Entretien
Le condenseur • essuyer la lentille du condensateur avec un chiffon
ou un papier qui ne raye pas.
• pour enlever la poussière, utiliser un pinceau fin ou
souffler de l'air avec une poire (poire optique pour
appareil photo).

Le miroir Essuyer le miroir avec un chiffon ou un papier qui ne


raye pas. On peut imbiber légèrement le papier avec
de l'alcool, jamais de xylène.
système électrique Pour les Lampes, fusibles: pas de réparation possible.
Ce sont des pièces du microscope qui se changent,
toujours en avoir en stock en faisant attention à avoir
les bonnes références Éviter de mettre les doigts sur la
lampe en la changeant.

parties peintes il s'agit du pied du microscope et de la platine. Elles se


nettoient avec un chiffon sec ou un chiffon avec de
l'alcool

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 microscope à fond clair

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Introduction

A quoi sert?
• Le microscope en fond clair, à l'opposé du microscope à fond noir, permet de
recueillir la lumière de la source directement dans les objectifs, après avoir
été transmise par l'échantillon. Celui-ci est éclairé par-dessous et observé
par-dessus. Bien que la préparation des échantillons soit peu contraignante,
cette technique est limitée par un faible contraste et une faible résolution.
On peut améliorer l'observation en colorant les échantillons.
• Utilisation du microscope en fond clair Ce microscope peut être utilisé pour
visualiser des objets vivants variés (bactéries, unicellulaires...) ou fixés
(coupes histologiques...).et l'observation des structures cellulaire internes
après coloration

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Schéma synoptique

OCULAIRE

OBJECTIF

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Fiche d’ entretien
solution Cause possible panne

Engager l'objectif jusqu'au cran, Objectif mal placé, condenseur trop Champ d'observation sombre
remonter le condenseur, nottoyer bas,lentilles sales
les lentilles
Nottoyer les Parties optiques poussiéreuses Particules visibles dans le champ
d'observation
Ajuster l'ouverture numerique Condensseur trop bas,diagrame Image fllotantes
suivant l'objectif choisi faiblement ouvert
desserrer Boutton trop serré Mise au point rapide très forte

Ajuster ces paramétre,utiliser des Distance interpupillaire mal Vue avec les deux yeux non uniforme
objectifs simillaires ajustée,pas de compensation
dioptrique,occulaires non assortis

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 Microscope à contraste de phase

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définition et Principe
Principe de fonctionnement
de fonctionnement
• Définition :Un microscope à contraste de phase (ou en contraste de
phase) est un microscope optique qui transforme en niveaux
de contraste les différences d'indices de réfraction entre deux
structures, lesquelles se traduisent en différences de phase pour les
ondes lumineuses les traversant.
• Ne nécessite pas de colorants
• Domaine d utilisation s’applique aux cellules vivantes.
D’où vient le contraste?

Variations d’intensité, de couleurs, de


Absorption, diffusion, réfraction, réflexion.
netteté

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• Lumière incidente traverse diaphragme annulaire
et focalisée en anneau circulaire sur l'objet.
• Lumière qui ne traverse pas l'objet reste intacte
et est focalisée par l'objectif sur l'anneau gris
épais de la plaque de phase qui absorbe une
partie du faisceau et change sa phase
• Quand objet réfracte ou diffracte la lumière c a d
une modification de la phase et déviation des
ondes lumineuses vers région mince de la plaque
de phase.
• Ces ondes interfèrent avec faisceau d'ondes non
réfractées. Image finale constituée de différents
degrés de brillance ou d'extinction en fonction de
l'indice de réfraction de chaque point de l'objet

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Schéma synoptique

Diaphragme
et Plaque Plan d
lumière condenseur spécimen Objectif
condenseur De phase image
annulaire

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Technique fonctionnel

• Onde surround (S): non diffracté.


• Onde diffractée (D): retardé et
atténué par les spécimens. .
• Onde de particules (P):
interférence, P = S + D. La
différence d'amplitude est trop
petit pour être observé.

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Technique fonctionnel

Onde S: avancé et atténué par


l'anneau de phase.
P=S+D
La différence d'amplitude est grande
assez pour être observé et les
spécimens semblent sombres
comparés à l'arrière-plan depuis | P |
<| S |. 23
Trajet optique

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Fiche de maintenance
SOUS ENSEMBLES ELEMENTS N V R
Mouvements de mise au point
STATIF Parties électrique
Diaphragme de champ & Filtres
PLATINE Mouvements X Y + Rotation
CONDENSEUR Diaphragme d’ouverture

Contacts du support
BOITIER(S) LAMPE(S) Contacts de la prise
Centrage
ILLUMINATEUR Diaphragme(s)
Lames et cubes semi réfléchissants
Ecart inter pupillaire + prisme et lentilles
TUBE D’OBSERVATION Trajets optiques
Commandes mécaniques

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SOUS ENSEMBLES ELEMENTS N V R
Corrections dioptriques
OCULAIRES Lentilles
Réticules & Bonnettes
PORTE OBJECTIFS Parties électriques

OBJECTIFS Systèmes de rétractation

Prisme de Wollaston
CONTRASTES CONTRASTES Modules et bagues
Filtres de polarisation

Alignement entre les sous ensembles


CONTRÔLE FINAL Centrages et réglages
Contrôle visuel de l’image

V=vérification N= nettoyage R=réglage ou remplacement


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 Microscope à fluorescence

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Domain d’utilisation
• Le principal domaine d'utilisation de la microscopie de fluorescence
est le domaine biomédical dans les applications de recherche
fondamentale, appliquée, de diagnostic, de contrôle de qualité, etc
• La microscopie de fluorescence dans le domaine du visible est un outil
très utilisé en biologie car très adaptée à l’étude de cellules vivantes .
• Le microscope en fluorescence permet de visualiser des objets qui
sont naturellement fluorescents (chlorophylle...), ou des molécules
rendues fluorescentes pour mieux les observer (protéines couplées à
la GFP, DAPI pour l'ADN, fluorochromes...).

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• A quoi sert?
Ce type de microscope, permet de visualiser la fluorescence émise par
les marqueurs fluorescents introduits dans l'échantillon à étudier. Pour
cela, le microscope est équipé d'un jeu de filtres et de miroirs
dichroïques. On trouve dans le microscope deux types de filtres. Des
filtres d'excitation, qui permettent de sélectionner les longueurs
d'ondes qui vont exciter l'échantillon et des filtres d'émission qui vont
permettre d'éliminer lors de l'observation, certaines longueurs d'ondes
émises par le fluorochrome en réponse à l'excitation.

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Schéma synoptique

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Fiche d entretien
Solution Causees possible panne
Engager l'objectif jusqu'au cran, Objectif mal placé, condenseur trop Champ d'observation sombre
remonter le condenseur, nottoyer les bas,lentilles sales
lentilles

Ajuster ces paramétre,utiliser des Distance interpupillaire mal ajustée,pas Vue avec les deux yeux non uniforme
objectifs simillaires de compensation dioptrique,occulaires
non assortis

Nottoyer les Parties optiques poussiéreuses Particules visibles dans le champ


d'observation
Engager l'objectif jusqu'au Objectif mal placé,parties optiques- Image floue
cran,nottoyer,utiliser l'huile lame-lamelle sales,huile immersion non
d'immersion,enlever les billes d'aire utilisées pour l'objectif humide,bulle
d'aire dans l'huil d'immersion

Vérifier ces etats Ampoule grillée,cable non Lampe non allumée


branché,fusible sauté
Recouvrir d'une lamelle Echantillon mobile Objectif puissant touche l'echantillon
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 Microscope inverse

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Définition et Principe de fonctionnement

Définition :Technique du microscope inversé À l'inverse de


la microscopie optique classique où la lumière arrive sur l'échantillon
par le bas et où l'observation se fait par le dessus, pour le microscope
inversé la source de lumière est placée au-dessus de l'échantillon et les
objectifs en dessous.
domaine d utilisation :Ce microscope est beaucoup utilisé pour
l'observation de cellules en culture in vitro, mais peut l'être en général
pour observer des objets épais ou situés sur le fond de boîtes de pétri.

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• Le microscope
inversé est
un microscope dont
l'échantillon est
illuminé par dessus
et observé par
dessous. Offrant un
large espace entre le
condenseur et la
platine

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Schéma synoptique

SOURCE
CONDENSEUR DE
OCULAIRE LUMIERE

OBJECTIF ECHANTIONNAGE

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TRAJET OPTIQUE

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Fiche de maintenance

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CONCLUSION
• Finalement les microscopes jouent un rôle très important dans
différentes domaines ,car ils ne sont pas seulement l'outils de
diagnostic le plus important dans le laboratoire médical mais ils
aident aussi  les scientifiques à étudier les microorganismes, les
cellules, les structures cristallines et les structures moléculaires.
• Et Nous avons essayé dans cette exposé de vous informer sur les
différents tubes des microscopes ,sur le principe de fonctionnement
et le méthode d'entretien .

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merci pour votre attention

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