Détermination de la CMI et

CMB par macrométhode en

milieu liquide

Par Rémi Moreda- Lycée Docteur Lacroix - Narbonne

 Jour 1
Réalisation de la gamme de dilution d’antibiotique.

Dilutio n d e l’Antib io tiq ue

1 mL Tub e
2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11 Re je te r

}
1m L
fina l
So lu tio n m è re
}

d ’a ntib io tiq u e à Dilua nt 1 m L

2 00m g /L
Jour 1
Préparation de l’inoculum.

100 µL

E.c o li e n b o uillon 25 m L d e b ouillon

nutritif inc ub é Mue lle r-Hinton
18 h à 37°C.
Jour 1
Ensemencement de chaque tube.

Tub e Ajo ut d e l’ino c ulum

1 2 3 4 5 6 7 ...
1 mL

Ino c ulum }2m L

fina ux
}
Ga m m e a ntib io tiq ue
Dilua nt 1 m L

Incubation 24 h à 37°C
 Jour 1
Évaluation de la concentration bactérienne dans l’inoculum :
réalisation des dilutions de l’inoculum.
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

Le matériel :

Tubes de diluant Pipette graduée ou pipette paille de 1mL

de 9 mL
Ino c ulum
-1 -2 -3 -4
Dilution : 10° 10 10 10 10
Facteur de
dilution : 1 10 100 1000 10000
Jour 1
Évaluation de la concentration bactérienne dans l’inoculum :
ensemencement d’une gélose de dénombrement à l’aide d’une anse calibrée.
Strie d e 10 µL
d e la d ilutio n
10.-1

10 -1 Gé lo se PCA

10 -2
10 -3
10 -4

Incubation 24 h à 37°C
Jour 2
Lecture de l’antibiogramme et détermination de la CMI.

Tub e
1 2 3 4 5 6

Dé te rm ina tio n
CMI
++ - - - + ++
+ = c ro issa nc e (tro ub le ) ;
- = a b se nc e d e c ro issa nc e visib le (p a s d e tro ub le ).
Jour 2
Évaluation de la concentration bactérienne dans l’inoculum

-1 Report des résultats sur le

10 compte rendu.

-2
10
10 -3
10 -4
Jour 2
Détermination de la CMB à partir des boîtes fournies
Tub e
1 2 3 4 5 6

Dé te rm ina tio n
C MI
++ - - - + ++

Dé no m b re m e nt surviva nts.
Le c ture a p rè s inc ub a tio n d e 18h à 37°C

Tub e n°4
Tub e n°3
Dé te rm ina tio n
Tub e n°2
C MB