LAS CLULAS TRONCALES LA MEDICINA REGENERATIVA

Se requieren clulas troncales en los tejidos donde existe una necesidad recurrente de reemplazo de clulas diferenciadas que no tienen la capacidad de dividirse como por ejemplo los eritrocitos.

En muchos tejidos, la condicin de diferenciacin completa es incompatible con la divisin celular.

En algunos tejidos, como el hgado, frente a dao traumtico o por drogas se producen clulas diferenciadas de reemplazo por simple proliferacin de clulas previamente diferenciadas que generan clulas hijas del mismo tipo (Mitosis).

Sin embargo, en muchos otros tejidos adultos, donde hay continuamente un recambio de clulas, las nuevas clulas diferenciadas de reemplazo se generan continuamente a partir de clulas troncales aparentemente no diferenciadas.

En la figura, se ilustran ejemplos de tejidos donde esto ocurre. En el intestino, las clulas troncales no diferenciadas se encuentran en el fondo de las criptas.

Cuando estas clulas se diferencian, empiezan a migrar hacia las criptas, reemplazando a las clulas que mueren al terminar su ciclo de vida en la punta de las criptas. Las clulas muertas son eliminadas al lumen intestinal.

En el caso de la epidermis, las clulas troncales se encuentran en la base del epitelio. Las caractersticas de las clulas troncales son: 1) No se encuentran diferenciadas completamente sino que estn determinadas a diferenciarse en un cierto linaje. 2) pueden dividirse sin lmites.

3) cuando se dividen, cada clula hija tiene dos opciones: puede permanecer como clula troncal o puede entrar en un proceso que la lleva a diferenciarse de manera terminal e irreversible

REPROGRAMACIN NUCLEAR Desde el punto de vista gentico, por reprogamacin nuclear se entiende el cambio en la expresin gnica de una clase de clula a otro tipo de clula no relacionada con ella. Como sealan Gurdon y Melton, las primeras evidencias experimentales sobre reprogramacin se obtuvieron en las dcadas de los 50 y 60 del siglo pasado con los trabajos sobre clonacin en anfibios.

J.B. GURDON D.A. MELTON, Nuclear reprogramming in cells: Science 322 (2008) 1811-1815.

CLULAS TRONCALES Y MEDICINA REGENERATIVA En 1981, Martin J. Evans aisl y cultiv las clulas troncales pluripotentes embrionarias en el ratn, siendo galardonado por ello con el premio Nobel de Medicina o Fisiologa en 2007

M.J. EVANS M.H. KAUFMAN, Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos: Nature 292 (1981):154-156.

CLULAS TRONCALES Y MEDICINA REGENERATIVA Diecisiete aos despus de la investigacin de Evans, en 1998, James A. Thomson identific y cultiv las clulas troncales pluripotentes de los blastocistos humanos, iniciando lo que ya se conoce como la dcada prodigiosa de las clulas troncales.

Por clula troncal se entiende cualquier Clula indiferenciada que tiene la capacidad de dividirse de forma ilimitada y, en un cierto momento, diferenciarse dando lugar a diferentes tipos de clulas especializadas. De acuerdo con esta segunda capacidad, las clulas troncales pueden ser totipotentes, pluripotentes y multipotentes en razn a su mayor o menor versatilidad o potencialidad, tal como se definen a continuacin.

 Clula totipotente: Clula troncal que tiene la capacidad de diferenciarse en el embrin y en tejidos y membranas extraembrinicas. La totipotencia es la capacidad funcional de una clula de dar lugar a un individuo completo tras un proceso de desarrollo normal. En el embrin humano, parece ser que solamente son totipotentes los blastmeros hasta el estadio de mrula de 16 clulas.

 Clula pluripotente: Clula troncal presente en los estadios tempranos de desarrollo embrionario (blastocisto) que puede generar todos los tipos de clulas en el feto y en el adulto y es capaz de autorrenovacin. Las clulas pluripotentes, sin embargo, no son capaces de desarrollarse en un organismo completo.
La pluripotencia es la capacidad funcional de una clula de dar lugar a varios linajes celulares o tejidos diferentes. No obstante, podra ocurrir que una clula pluripotente de la masa celular interna se convirtiera en totipotente

 Clula multipotente: Clula troncal presente en los tejidos u rganos adultos que tiene una capacidad limitada de reactivar su programa gentico como respuesta a determinados estmulos que le permiten dar lugar a algunos, pero no todos, los linajes celulares diferenciados. Algunas clulas troncales presentes en tejidos u rganos adultos son multipotentes. A veces se utiliza el trmino plasticidad como equivalente a multipotencia.

Hay varias clases de clulas troncales (embrionarias, adultas, pluripotentes inducidas) cuya eficacia en el establecimiento de cultivos de tejidos en el laboratorio y sus valoraciones ticas y jurdicas son diferentes.

CLULAS TRONCALES EMBRIONARIAS (CLULAS ES, EMBRYONIC STEM CELLS) Es evidente la posible utilizacin de las clulas ES en Medicina como terapia celular directa o como productoras de cultivos de tejidos in vitro para sustituir in situ los tejidos u rganos daados. En el organismo humano adulto se estima que existen algo ms de 200 tipos de clulas diferentes cuyo origen se puede retrotraer a las clulas troncales pluripotentes indiferenciadas presentes en la masa celular interna (MCI) del embrin en su fase de blastocisto. La cuestin cientfica est en llegar a conocer cules son las instrucciones por las que una clula pluripotente indiferenciada se diferencia hacia un determinado tipo celular.

De dnde pueden obtenerse las clulas ES?, esencialmente de tres fuentes: 1) de la MCI de embriones producidos por FIV con el nico propsito de obtener cultivos de tejidos; 2) de la MCI de embriones sobrantes de programas de FIV; 3) de la MCI de embriones somticos obtenidos por tcnicas de clonacin mediante transferencia de ncleos

Este sera el caso de la aplicacin de la tcnica de transferencia nuclear a la clonacin no reproductiva con fines teraputicos. Se trata, por tanto, de transferir el ncleo de una clula somtica diferenciada al citoplasma de un ovocito previamente enucleado, convirtindolo as en el equivalente de un cigoto que puede iniciar un proceso de desarrollo embrionario normal.

Sin embargo, el destino de este embrin no es el de ser transferido al tero de una mujer para dar lugar tras la gestacin al nacimiento de un individuo clnico de la persona a quien perteneciera la clula somtica donadora del ncleo, sino el de mantenerlo en el laboratorio durante un tiempo mximo de catorce das a partir del momento de la transferencia del ncleo y utilizar sus clulas troncales pluripotentes para tratar de establecer en el laboratorio determinados cultivos de tejidos u rganos.

La utilizacin de las clulas troncales embrionarias tiene una valoracin tica negativa por cuanto implica la destruccin de embriones humanos, sea cual sea su origen.

Por ello, tuvo mucha resonancia en los medios de comunicacin el que, en 2006, el grupo de investigacin dirigido por el Dr. Robert Lanza, de la compaa biotecnolgica Advanced Cell Technology (Worcester, Massachussets, USA) y la Universidad de Wisconsin, haca pblico un trabajo en el que demostraban que no era imprescindible destruir completamente un embrin de ratn para obtener clulas troncales.

Colaboradores, la comunidad cientfica ha lanzado el mensaje de que ya estaban resueltos los problemas ticos que de alguna manera empaaban el horizonte de la aplicacin de las clulas troncales embrionarias humanas en la Medicina Regenerativa del futuro porque podan obtenerse sin necesidad de destruir los embriones puesto que los embriones biopsiados pueden ser transferidos al tero de la mujer sin aparente prdida de viabilidad en comparacin con embriones a los que no se les ha extrado ningn blastmero:

De hecho, en programas de Reproduccin Humana Asistida mediante FIV se viene utilizando la tcnica de diagnstico gentico preimplantacional (DGP) en la que se analizan las caractersticas genticas del embrin a partir de un blastmero separado de un embrin en estadio de unas pocas clulas. No obstante, desde el punto de vista tico podran plantearse algunas dudas

1) En primer lugar, habra que cuestionar si los cuerpos embrioides en los quederivan los blastmeros a travs de las varias etapas de manipulacin realmente no pueden equipararse con los blastocistos normales; especialmente en aquellos casos en los que se forman clulas troncales embrionarias (ES) y extraembrionarias (ET).

2) Cul es el estatuto de los blastmeros individuales de un embrin de 8- o 10-clulas? son totipotentes y, por tanto, potencialmente capaces de originar un ser humano? A pesar de que se ha venido aceptando en tiempos anteriores que los blastmeros humanos mantenan su totipotencia hasta el estadio embrionario de 16 clulas, aseguran Lanza y colaboradores que nunca se ha demostrado en mamferos que puedan generarse organismos completos a partir de blastmeros individuales procedentes de mrulas en estadio de 8- a 16-clulas.

3) Si al blastmero aislado del embrin se le agregan clulas troncales embrionarias para que les sirvan de estmulo, eso implica que se ha tenido que destruir previamente otro embrin. Y otro tanto habra que decir de las clulas troncales embrionarias que se utilizan como cocultivo. La nica solucin sera realizar la estimulacin del blastmero humano y el co-cultivo con clulas embrionarias de ratn, pero no sabemos si sera un procedimiento igualmente eficaz. Por otro lado, parece que lo que se pretende es eliminar el uso de clulas no humanas en el proceso.

4) Cul ser el destino del embrin resultante de 7 clulas? Realmente las parejas que se sometan a un programa de FIV desearn correr el riesgo de que se manipulen innecesariamente sus embriones si no iban a realizar el DGP?

5) Quin solicitar la aplicacin de esta tcnica a pesar de que se ofrezca la posibilidad de que se pueda crear un banco de lneas celulares del propio hijo?

CLULAS TRONCALES ADULTAS En cualquier caso, hay que tener presente la noticia esperanzadora de que podra ser innecesaria la utilizacin de clulas troncales embrionarias si llegan a hacerse una realidad los cultivos de tejidos a partir de clulas troncales adultas (clulas AS, adult tem cells) presentes en los propios rganos adultos. Esto evitara cualquier problema tico puesto que la manipulacin slo afectara a las clulas somticas del organismo humano sin necesidad de crear un embrin.

En 2001, los National Institutes of Health (NIH) de los Estados Unidos sealaban algunas caractersticas de las clulas AS: Las clulas AS pueden proliferar sin diferenciarse durante un largo perodo de tiempo (caracterstica conocida como autorrenovacin a largo plazo), pudiendo dar lugar a clulas maduras con formas caractersticas y funciones especializadas.

 Algunas clulas AS tienen la capacidad de diferenciarse en otros tejidos diferentes a aqul del que proceden (multipotencia, plasticidad)

 Las clulas AS son raras, difciles de identificar y de origen desconocido. Los mtodos de caracterizacin estn basados en la determinacin de marcadores de superficie celular y sus patrones de diferenciacin in vitro.

 Se han obtenido clulas AS a partir de cerebro, mdula sea, sangre perifrica, pulpa dental, cuerda espinal, vasos sanguneos, msculo esqueltico, epitelios de la piel y del sistema digestivo, crnea, retina, hgado y pncreas y en tejido muscular y adiposo; es decir, se han encontrado clulas AS en tejidos derivados de las tres capas germinales embrinicas.

La importancia de las investigaciones con clulas troncales adultas se pone de manifiesto por los datos suministrados en 2009 por los NIH (National Institutes of Health) de los Estados Unidos, segn los cuales actualmente hay en el mundo un total de 2.307 ensayos clnicos actualmente en marcha frente a solamente 5 con clulas troncales embrionarias.
Sin embargo, es posible que con la entrada en el gobierno de los Estados Unidos de la Administracin Obama se incremente el nmero de investigaciones con clulas embrionarias.

Ya la empresa Geron ha anunciado el inicio de una investigacin clnica para tratar de corregir lesiones irreversibles de mdula espinal utilizando clulas troncales embrionarias
Informacin de Contacto Company Headquarters Sede de la empresa Geron Corporation Geron Corporation 230 Constitution Drive 230 Constitucin de unidad Menlo Park, CA 94025 USA Menlo Park, CA 94025 EE.UU. Tel: 650-473-7700 Tel: 650473-7700 Fax: 650-473-7750 Fax: 650473-7750 Email: info@geron.com Correo electrnico: info@geron.com

Casi simultneamente, en el Reino Unido se ha autorizado otra investigacin con clulas ES para tratar casos de infarto cerebral mediante la inyeccin de las clulas ES directamente en el cerebro de los pacientes. En ambos casos se trata, sobre todo, de comprobar que el tratamiento con las clulas ES no induce la produccin de tumores (investigacin en fase I).

En el contexto de las aplicaciones clnicas de las clulas troncales adultas podra decirse que el negocio de las clulas corre ms que la ciencia.

Esta cita hace referencia a que, junto a los bancos privados de cordn umbilical que existen ya desde hace aos, han surgido en diversas partes del mundo compaas que conservan tambin clulas troncales mesenquimales procedentes de dientes de leche (algn da, el Hada de los Dientes -equivalente anglosajn al Ratn Prez espaol- le podra salvar la vida a tus hijos, dice el anuncio comercial de la empresa norteamericana Bioiden)

De sangre menstrual (la empresa CElle utiliza como eslogan publicitario tu milagro mensual) o de grasa corporal para un eventual uso del donante cuando se desarrollen aplicaciones teraputicas.

http://www.celle.com/spanish/index.aspx

Como seala el artculo periodstico en palabras del Dr. Matesanz, director de la Organizacin Nacional de Trasplantes de Espaa, este fenmeno de guardar cada vez ms muestras biolgicas encaja en toda una filosofa de sociedad rica.

En Espaa, se estima que unas 25.600 familias han guardado muestras de cordn umbilical aunque la mayora (25.000) han optado por bancos extranjeros para evitar la legislacin espaola que obliga a compartir, en su caso, las muestras con quien las necesite, de manera que slo unas 600 familias han optado por alguna de entre la docena de empresas privadas que existen. Adems, es importante poner de manifiesto que la gente normalmente no sabe que, en cifras estimativas, en el mundo se han realizado unos 8.000 trasplantes con clulas troncales de donante frente a solamente cuatro casos de autotrasplante

LA REPROGRAMACIN CELULAR: CLULAS TRONCALES PLURIPOTENTES INDUCIDAS (iPS), UNA ESPERANZA TICA PARA EL FUTURO La revista Science public un trabajo del grupo liderado por Thomson en el que demostraron haber logrado reprogramar clulas somticas adultas humanas (procedentes de prepucio de recin nacido y de piel de feto) y convertirlas en clulas troncales pluripotentes, introduciendo en ellas mediante un vector viral cuatro genes (Oct4, Sox2, Nanog y Lin28) que regulan la transcripcin (factores de transcripcin). Estas clulas troncales pluripotentes inducidas (clulas iPS, induced pluripotent stem cells) tienen cariotipo normal.

Es importante sealar que ya en 2006 Yamanaka haba logrado la reprogramacin de clulas somticas de piel en ratn utilizando los mismos cuatro genes, por lo que se le puede acreditar la paternidad de la tcnica que fue ratificada por el grupo de investigacin de Rudolf Jaenisch del Whitehead Institute for Biomedical Research y del MIT, Cambridge, Massachusetts, USA.

REPROGRAMACIN DIRECTA Un nuevo paso conceptualmente diferente a la tcnica de induccin de clulas troncales pluripotentes (iPS) de Yamanaka y Thomson lo ha dado el grupo de Douglas A. Melton al reprogramar in vivo clulas adultas de ratn (clulas exocrinas del pncreas) transformndolas directamente (reprogramacin directa) en clulas beta pancreticas capaces de producir insulina (islotes de Langerhans).

Para ello, utilizaron como vector un adenovirus en el que se haban incorporado tres factores de transcripcin (Ngn3, Pdx1 y MafA) que el grupo de Melton haba identificado previamente como responsables de la diferenciacin de las clulas beta pancreticas.

La nueva tcnica de reprogramacin directa se salta el paso intermedio de las clulas iPS por el que la clula tratada se revierte al estado de maduracin de una clula para que sea pluripotente. Es evidente que se ha abierto un nuevo y esperanzador campo para la medicina regenerativa del futuro. (ES). Adems, como en el caso de la utilizacin de las clulas troncales adultas (AS) y las clulas troncales pluripotentes inducidas (iPS), se obvian los problemas ticos que plantea la utilizacin de las clulas troncales pluripotentes embrionarias

Los defensores de continuar investigando con clulas troncales embrionarias humanas defienden su posicin, argumentando que si no hubiera sido por estas investigaciones no se hubiera llegado a conocer el papel de los factores de transcripcin Oct3/4, Sox2, c-Myc, Klf4 , Nanog y Lin en el proceso de reprogramacin celular de clulas somticas adultas.

CUL ES EL ESTADO DE LA CUESTIN EN LA CLONACIN HUMANA POR TRANSFERENCIA NUCLEAR? La clonacin humana mediante la tcnica de transferencia del ncleo de una clula somtica al citoplasma de un ovocito previamente desprovisto de sus cromosomas puede hacerse con fines reproductivos es decir, intentando el nacimiento de un nio o nia clnicos (clonacin reproductiva) o con fines no reproductivos de investigacin o fines teraputicos (clonacin teraputica).

Desde hace unos pocos aos se viene intentando la transferencia nuclear interespecfica mediante la transferencia de ncleos somticos humanos a ovocitos de otras especies animales con objeto de estudiar el comportamiento del ncleo humano transferido y su capacidad de reprogramacin (desdiferenciacin y rediferenciacin).

Utilizaron ovocitos de vaca en lugar de ovocitos humanos, obteniendo 7 embriones somticos aloplsmicos (citoplasma bovino ncleo humano) que ellos llamaron ovocitos bovinos reconstruidos por transferencia nuclear de fibroblastos humanos (SCNTreconstructed bovine oocytes). La excusa tica que se maneja para justificar esta tcnica es la de ahorrar la utilizacin de ovocitos humanos.

REFLEXIONES TICAS: DEL IMPERATIVO CATEGRICO KANTIANO AL IMPERATIVO TECNOLGICO Uno de los problemas bioticos que actualmente vivimos es el que contrapone al imperativo categrico kantiano con el imperativo tecnolgico. Siempre se ha dicho que a nuevos avances cientficos, nuevos problemas ticos, pero que intentar detener el avance cientfico es imposible. Cuando se oye decir que la ciencia es imparable se puede hacer una doble interpretacin: constatar que, efectivamente, el progreso cientfico es continuo o bien asumir que la ciencia es imparable porque los cientficos no estn dispuestos a parar, en cuyo caso podemos estar ante un problema biotico

Se oye decir con frecuencia que es imposible detener el progreso cientfico porque es lo mismo que querer poner puertas al campo ya que todo lo que se pueda hacer, se har o, todava con mayor radicalidad, como se puede hacer, hay que hacerlo, cayendo en el imperativo tecnolgico de un fundamentalismo cientfico.

muchas veces se oye decir que el fundamentalismo religioso es un obstculo para el progreso de la ciencia, habra que tener en cuenta tambin que muchos cientficos han hecho de la ciencia su religin cayendo en un autntico fundamentalismo cientfico.