INTRODUCCIÓN AL

MODULO DE
CITOGENÉTICA:
Para comenzar el estudio de la Citogenética Medica , debemos definir su concepto:

La citogenética es la ciencia , que como sub-especialidad , estudia los cromosomas y la

división celular.

EVOLUCION HISTORICA DE LA GENETICA:

ESTUDI O DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
ANTECEDENTES
• 1882 – 1956: PERI ODO DE GESTACI ON DE LA
CI TOGENETI CA HUMANA

– 1882. W. Flemming visualizó y dibujó los cromosomas

humanos
– 1888. Waldeyer introdujo el término de CROMOSOMAS
– 1923. Painter reportó que “el número diploide de
cromosomas en células humanas parecía ser 46”
– 1949. Barr y Bertram descubrieron la cromatina sexual
– 1950. T.C. Hsu descubrió “accidentalmente” la utilización
de soluciones hipotónicas para dispersar los cromosomas
mitóticos
– 1956. Tjio y Levan, estudiando células fetales del pulmón
en mitosis y Ford y Hamerton , en estudios de células
testiculares en meiosis DESCUBRI ERON QUE EL NÚMERO
CORRECTO DE CROMOSOMAS EN HUMANOS ES 2N = 46.
 EN 1956 SE I NI CI A

LA ERA DE LA CI TOGENETI CA CLI NI CA

ESTUDI O DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
ANTECEDENTES (cont.)

• 1956 – 1966: LA EPOCA DE ORO DE LA

CI TOGENETI CA CLI NI CA

1959. J . Lejeune reportó ‘la presencia de un

cromosoma pequeño extra en la idiocia
mongoloide”, como la llamó Down.

1961. M. Lyon planteó su hipótesis de

inactivación del cromosoma X.

1960 – 1969. Descrubimiento de enfermedades

producidas por aberraciones numéricas de
cromosomas.
ESTUDI O DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
ANTECEDENTES (cont.)

• 1969 – 1977: ERA DEL BANDEO CROMOSÓMI CO

1969. Caspersson describió la tinción de bandas
Q. Posteriormente se describieron otras técnicas
de bandas (G, C, R, T, NOR).

1973. Rowley describió el cromosoma de

Philadelphia (Ph) como una translocación 9;22.

1976. J . Yunis describió la técnica de alta

resolución con bandas.
 ESTUDI O DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
ANTECEDENTES (cont.)
• 1977 – Actual: ERA DE LA CI TOGENÉTI CA
MOLECULAR

1981. Mapeo del gen de la insulina en 11p

utilizando técnicas de I SH radiactiva (Harper).

1985. Tecnología de Hibridización I n Situ

Fluorescente “FI SH” (Ward, Landegent y cols.).

1991. Microdisección de cromosomas (Trautmann

y cols.).

1992. Microdisección y pintado reverso de los

cromosomas (Telenius).
DEL CROMOSOMA AL GEN
Es decir : la citogenética es el estudio de los cromosomas
y las enfermedades relacionadas, causadas por un
número y/o estructura anormales de los cromosomas.
 Ahora bien : ¿ QUE ES UN CROMOSOMA ?.
Los cromosomas son estructuras filamentosas, situadas en el nú cleo celular, que tienen forma de
ovillos y portan los factores hereditarios o genes. Dicho de otro modo; las unidades de la
herencia estan constituidas por segmentos de ADN, de diferentes longitudes a los cuales se les
denomina GENES, estas cadenas de ADN se encuentran localizadas en el nú cleo y tienen la
propiedad de evidenciarse durante la división celular en corpú sculos, que junto con proteinas (
histonas) forman los cromosomas.
La palabra cromosoma se deriva del griego chroma (color) y soma (cuerpo), por ser estructuras
que se tiñen fuertemente con colorantes bá sicos. La localización exacta del gen en un cromosoma
es su locus ( lugar), en plural locis ( lugares). Cada cromosoma tiene miles de loci dispuestos en
una forma definida, y el numero y disposición de los genes en los cromosomas homologos es
idéntico. Los genes que ocupan loci homologos se denominan alelomorfos o congeneres. Cada
individuo por lo tanto, tiene 2 de cada clase de genes, 1 de cada par de cromosomas.
A finales del siglo XIX, muchos investigadores habían tratado de esclarecer cuá l era el nú mero
de cromosomas de la especie humana. En los años 50 se creía que cada célula contenía 48
cromosomas y que el sexo estaba determinado por el nú mero de cromosomas X presentes en el
momento de la fecundación. Alrededor de 1956, Tjio y Levan, basados en métodos novedosos
para la época, concluyeron que el nú mero exacto era 46. Muy poco después se demostro que
ciertas patologías humanas podian ser debidas a la perdida o ganancia de un cromosoma
completo así como también a la alteracion de un gen simple.
Normalmente los cromosomas no se pueden ver con un microscopio óptico, pero
durante la división celular se condensan lo suficiente como para poder ser
fácilmente analizados a 1.000 aumentos.

Para recoger células con sus cromosomas en este estado condensado se las expone a
un inhibidor de la mitosis, que bloquea la formación del huso mitótico y detiene la
división celular en la etapa de metafase.
 ESTRUCTURA DE LOS CROMOSOMAS:

Se ha podido conocer por medio de microscopia óptica y consta de:

- Brazos cortos (p)
- Brazos largos (q)
- Centrómero (zona de constricción primaria). Es responsable del movimiento del
cromosoma durante la división celular
- Telómeros (extremos de ambos brazos)
- En cromosomas acrocéntricos, aparecen los satélites.
- En algunos puede haber constricciones secundarias, denominadas gaps.

- Los cromosomas 1, 9, 16 y el Y tienen regiones de heterocromatina constitutiva (h), que

está formada por ADN altamente repetitivo e inactivo que no se expresa.

Los telómeros son secuencias TTAGGG repetidas en tá ndem, que se mantienen gracias a la enzima
telomerasa; una reducción en esta enzima y por consiguiente en el nú mero de repeticiones de la secuencia
TTAGGG es uno de los mecanismos implicados en la muerte celular y el envejecimiento. Juegan un papel
fundamental en el sellamiento de los extremos de los cromosomas, así como en la conservación de su
estabilidad e integridad. (Ver ilustraciones).
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IDENTIFICANDO LOS CROMOSOMAS
CLASIFICACION DE LOS CROMOSOMAS:
Los cromosomas se clasifican :

Atendiendo a la pocision del centromero, en:

- Metacéntricos: Los que tienen el centrómero a igual distancia de ambos telómeros, o sea, en el centro, sus brazos son
de igual tamaño.

- Submetacéntricos: Los que tienen el centrómero má s hacia un brazo que hacia otro, por lo que tienen brazos cortos y
brazos largos.

- Acrocéntricos: Los que tienen el centrómero en el extremo de los brazos cortos, generalmente tienen apéndices
llamados “satélites.”

Atendiendo a la posición del centrómero y el tamaño de los cromosomas, se dividen en varios grupos:

- A: metacéntricos grandes, comprende del 1-3.

- B: submetacéntricos grandes, son 4 y 5.
- C: submetacéntricos medianos, incluye del 6 – 12 y el X
- D: acrocéntricos medianos con satélites, 13-15
- E: submetacéntricos cortos, 16-18
- F: metacéntricos cortos, 19 y 20
- G: acrocéntricos pequeños, incluye 21, 22 y el Y

El cromosoma Y tiene los brazos cortos un poco má s largos que los otros 2 de su grupo y no tiene satélites. ( Ver Ilustraciones).
 CROMOSOMAS HOMOLOGOS :

Son aquellos que se emparejan durante la meiosis y contienen identicos loci.

En los gametos se presentan la mitad de la dotación cromosómica de una célula somática.

Así, en un organismo diploide (2n) donde cada cromosoma presenta dos copias
(homólogos), los gametos tendrán sólo una copia de cada uno (n). Es decir, se reduce
el contenido de material genético a la mitad, de modo de que cuando los gametos se
fusionan para formar un cigoto, el número original de cromosomas se restablece.
CROMOSOMAS POLITENICOS Y
PLUMOSOS :
Algunos cromosomas gigantes sirven como una fuente importante de información
para estudiar la morfología microscópica de los cromosomas.

Los mayores son los cromosomas Plumosos, los cuales se encuentran en los ovocitos
primarios de los vertebrados.

Los cromosomas politenicos (de filamento múltiple) los cuales se encuentran en los
tejidos específicos de algunas larvas de insectos son también cromosomas gigantes
favorables para el estudio citológico, además están Neurospora grasa, Zea mays,
Paramecium Aurelia, Bacteriófagos, Coli - fago.

Estas especies son instrumentos biológicos favoritos manejados por los genetistas.

Los cromosomas politenicos son el resultado de la multiplicación cromosomica

reiterada, no acompaña de división nuclear.
Este proceso da como resultado la producción de cromosoma 2x donde “x” da el
numero de ciclos de multiplicación. En el caso de los núcleos de las células de las
glándulas salivales de larvas de Drosophila melanogaster que han completado su
crecimiento, han ocurrido 9 o 10 ciclos consecutivos de multiplicación cromosomica ) .

Estos autores identificaron a los cuerpos nucleares como cromosomas gigantes que
aparecían por pares.

También demostraron la presencia de elementos comparables en los cromosomas

gigantes y en los de otras células del mismo organismo.
 Características de los cromosomas Politenicos.

Los cromosomas gigantes politenicos se corresponden en su estructura lineal con

otros cromosomas de la misma especie.

La diferencia radica en que los filamentos duplicados se agrupan juntos por medio
de un proceso especial y no se separan por división celular para formas parte de
nuevas células.
Los cromosomas gigantes demuestran su independencia de la forma de sus funciones,
detectados en unas serie de órganos de los dipteros y en primer lugar en sus glándulas
salivales, los cromosomas gigantes se forman debido a que las cromatinas que
surgen en una serie de síntesis sucesivas de DNA, no se separan, sino que se mantienen
juntos íntimamente asociados, la división de cromosomas sin que estos sean separados
recibe el nombre de endomitosis.
Estos núcleos endomitoticos los contienen los cromosomas gigantes politécnicos que
tienen una estructura característica que se aprecia con detalle.

En las células de las glándulas salivales de larvas Drosophila, una serie de síntesis
de DNA sin separación de cromatidas, conduce a la formación de cromosomas
que contienen 1000 -2000 cromatidas, la proporción entre las dimensiones, formas y
estructuras internas de los cromosomas comunes y sus análogos en los núcleos de las
células de las glándulas salivales de Drophila.
El rayado del cromosoma gigante que esta relacionado con la presencia del disco
de coloración oscura (acumulación de DNA), surge debido a la unión de cromomeros
homólogos de todas las cromatidas hijas, la disposición de los discos es idéntico en
todos los individuos y en todos los tejidos (donde son detectados) de un mismo
organismo, la sustancia que contiene el cromosoma se acostumbra a denominar cromatina.

El estudio de los cromosomas muestra la existencia de 2 tipos de cromatina en la

composición cromosomica, que son la eucromatina y la heterocromatina.

En los cromosomas gigantes la eucromatina esta representada por zonas bien

delimitadas de cromosomas con el dibujo de discos.
CARIOTIPO :
Cada ser humano tiene aproximadamente 30.000 genes que determinan el crecimiento,
el desarrollo y el funcionamiento de nuestros sistemas físicos y bioquímicos.

Normalmente, los genes se encuentran distribuidos en 46 cromosomas (23 pares)

dentro de nuestras células.

Los pares del 1 al 22 son iguales en hombres y mujeres y se conocen como autosomas.
El par número 23 está compuesto por los cromosomas que determinan el sexo.
Las mujeres tienen dos cromosomas X y los hombres un cromosoma X y un cromosoma Y.

Los espermatozoides y las células ováricas son diferentes de las demás células
del organismo. Estas células reproductivas tienen sólo 23 cromosomas independientes
cada una. Cuando un espermatozoide y un óvulo se combinan, al comienzo del
embarazo, forman una célula nueva con 46 cromosomas. El ser humano resultante es
genéticamente único y su diseño está determinado por el padre y la madre en
partes iguales.
Antes de referirnos a los métodos o técnicas de estudios cromosomicos, vamos a definir: ¿ Que
es un CARIOTIPO?.
El cariotipo no es mas que el ordenamiento de los cromosomas, atendiendo a la clasificacion
anteriormente expuesta, que incluye: el tamaño y la forma del cromosoma ,así como la
agrupación de los pares por numero y letras.
Es decir que, un cariotipo nos informa de la constitución cromosomica de un individuo y nos
permite analizar si existen alteraciones en la misma.

Resultados de cariotipo humano normal:

- Hembra: 46,XX
- Varón: 46, XY
- Variantes de heterocromatina: 46, XX ó 46,XY, 1qh+ ó 1qh- (depende de la mayor o
menor extensión de la región de heterocromatina, lo mismo se informa para cada uno de los
cromosomas que contienen zonas de heterocromatina, como el 9, 16, Y si se presentan
heteromorfismos de estas regiones.)
 Para poder lograr el estudio de los cromosomas, se necesita obtener muestra de tejidos “diana”,
ellos son:
- Linfocitos
- Fibroblastos de piel
- Médula ósea
- Vellosidades coriónicas
- Líquido amniótico
- Sangre fetal
Estos 3 ú ltimos se emplean para el diagnóstico prenatal de enfermedades geneticas.

Ahora bien , después que se obtiene el tejido , por ejemplo: los linfocitos, ( por cultivos de sangre), ellos de
por si no entran en división celular, sino que hay que estimular esta división, añadiendo al medio de
cultivo, una sustancia llamada fito hematoglutinina ( PHA ), que actua en las primeras 15 horas y estimula
la división celular. Ya a las 48 horas de cultivo , ellos se encuentran en división y se detiene el ciclo en
Metafase, con colchicina, logrando así que los cromosomas sean mas visibles , pues se rompen las fibras
del huso y los cromosomas se detienen en el plano ecuatorial.
A traves de soluciones hipotónicas como: citrato de sodio y cloruro de potasio, se logra la expansion de los
cromosomas, sin que se superpongan , unos sobre otros y así son mejor contados. Por ultimo, se adicionan
sustancias fijadoras que detienen el proceso del ciclo celular, fijan la imagen y provocan la muerte de la
celula
 TÉCNICAS DE ESTUDIO CROMOSOMICOS:
Entre las técnicas mas frecuentes para el estudio de los cromosomas tenemos:
1- Técnicas de Bandas: Ha permitido la identificación longitudinal de los cromosomas y clasificar con
- mayor seguridad los pares de cromosomas homologos.
Bandas G: Es el tipo de bandas má s usado, se tratan los cromosomas con tripsina, que digiere parte de ellos, se cree que la
tripsina afecta las histonas ricas en Arg, luego se tiñen con Giemsa y las partes digeridas se tiñen claras y las no digeridas,
oscuras, de esta forma se logran alrededor de 400 bandas que siguen un patrón característico en cada cromosoma.

Bandas R: Es el patrón reverso de las G, se tratan las lá minas con buffer a diferentes concentraciones a altas temperaturas
y se tiñen con Giemsa también. Se usa para confirmar bandas claras u oscuras en las bandas G cuando hay dudas acerca de
determinadas zonas de un cromosoma.

Bandas Q: Para su obtención hay que teñir las lá minas con mostaza de quinacrina y verlas con microscopio de luz UV, se
observan bandas claras y oscuras igual, pero tiene la desventaja de que la fluorescencia de la quinacrina se va perdiendo y
dura poco la lá mina. Es muy ú til para identificar la heterocromatina del Y, que tiene gran fluorescencia con quinacrina. Se
piensa que las regiones del ADN ricas en pares A-T tienden a incrementar la fluorescencia de esta sustancia y que las ricas
en C-G, tienden a opacarla, por eso se obtienen bandas.

Bandas C: Son selectivas para zonas de heterocromatina constitutiva, como el centrómero, y los cromosomas 1, 9, 16, Y.
Las lá minas se tratan con una base, que puede ser NaOH o BaOH. Muy ú til para detectar variantes en la zona de
heterocromatina de estos cromosomas y algunas aberraciones que involucren estas zonas mencionadas.

Bandas de alta resolución: Con él se obtienen alrededor de 800 bandas por genoma haploide, se hace en etapa de
prometafase. Se realiza primero inhibición de la división celular con methotrexate, antagonista del á cido fólico, luego se
añade el á cido fólico para inducir mitosis y cuando aú n los cromosomas no se han enrollado y contraído lo suficiente, se
agrega colchicina para detener la mitosis. Es muy ú til, porque permite identificar con má s detalle mú ltiples aberraciones
cromosómicas.
METAFASE CROMOSOMAS HUMANOS
METAFASE CROMOSOMAS POR METODO TINCION BANDAS G
 ¿ QUE ES UN IDIOGRAMA?:
Un idiograma , no es mas que la representación esquematica de un cariotipo y puede utilizarse de guia en la clasificacion de
los cromosomas. En la actualidad existen idiogramas de los distintos tipos de bandas ( Q, G, R, y C ).

ESTUDIO DE LOS CUERPOS BARR:

En 1949, Murray Barr y su alumno Bertram observan por primera vez una diferencia entre las celulas femeninas y
masculinas , durante la interfase celular. Encontraron que en las neuronas de la mayoria de las gatas, aparecia una pequeña
masa de cromatina, cerca de la pared nuclear, que en los machos no aparecia y mas tarde se vio que esto ocurria hasta en
el hombre.
Estudios posteriores demostraron que este cuerpo de cromatina no era mas que un cromosoma X, que se replica tardiamente,
en relacion con el resto de los cromosomas, incluido el otro X, es por eso que se le llamo : Cuerpo Barr y se observa
solamente en celulas femeninas. A este cuerpo Barr, se le llama también: cromatina sexual, por ser un cromosoma X en
fase inactiva y se ha determinado que su presencia en una celula es igual al numero de cromosomas X-1, es por esta
razon que en el sexo femenino que presenta 2 cromosomas X, se ve un solo cuerpo de Barr, mientras que en el sexo
masculino no se observa ninguno.

TEJIDOS EN QUE SE OBSERVAN LOS CUERPOS BARR:

- Tejido Nervioso.
- Leucocitos Polimorfonucleares.
- Celulas epiteliales. ( mucosa oral).
En la prá ctica se realiza el estudio de la cromatina sexual tomando muestra de la mucosa oral y analizando sus células teñidas
con acetorceína. Es un proceder inocuo, sencillo, fá cil, muy ú til para identificar de manera preliminar algunas
aberraciones cromosómicas que involucran al X y para el aná lisis de los intersexos, así como la determinación del sexo
cromatinico fetal por aná lisis del contenido celular del liquido amniótico. Má s recientemente se ha estudiado por este
mismo método de la mucosa oral el cuerpo Y, cuyo principio es el de tinción con mostaza de quinacrina para ver la
fluorescencia de su heterocromatina.
Cuando se toma la muestra de la mucosa oral y después de teñida con acetorceina, se cuentan 100 celulas y en las mismas si aparece un 30 – 40
% de cuerpos Barr, se considera del sexo femenino.

Cuerpo de Barr Cuerpo Y

- Normal 25-50 %
- Aceto-orceína
- No coincide con el # de X
- Se observa en la periferia del nú cleo
- Microscopio de inmersión
- Normal 90-95%
- Mostaza de quinacrina
- Coincide con el # de Y
- En cualquier lugar del nú cleo
- Microscopio con luz UV

Existen otras técnicas mas recientes y mucho mas modernas para el estudio cromosomico:

Avances en el campo de la citogenética. Citogenética molecular.

- FISH: Hibridización fluorescente in situ. Se basa en la posibilidad de una cadena simple de ADN de hibridizar o unirse con la cadena
complementaria en el cromosoma, donde quiera que esté el fragmento. Se puede usar en metafase o interfase. Se visualiza el segmento
hibridizado con luz UV, permite diagnósticos muy precisos y rá pidos.

- Cariotipo espectral multicolor: Es una variante de FISH, en que se colorea cada cromosoma de un color diferente, con sondas fluorescentes
específicas, de esta forma son perfectamente identificables y muy ú tiles para reconocer determinadas aberraciones cromosómicas que es
estudiará n má s adelante.

- Otros estudios:
Citometría de flujo.
Hibridación genómica comparativa.
METODO DE ESTUDIO DE CARIOTIPO POR FLUORESCENCIA
ESPECTRAL
METAFASE POR METODO DE FLUORESCENCIA ESPECTRAL
CARIOTIPO POR METODO FLUORESCENCIA ESPECTRAL
La formación de un ser humano es el resultado de un intrincado y
complejo proceso, aun desconocido, que engloba factores geneticos y
ambientales. Debido a la extraordinaria complejidad de este proceso , no
debe sorprendernos que algo pueda ir mal, por lo que abordaremos ahora
el tema de las: