b

Cncer b0

Regresin
Tamao tumor

APOPTOSIS: * Sinnimo de muerte celular programada * Originalmente describa caractersticas morfolgicas de cierto tipo de muerte celular. * Apoptosis Vs. Necrosis * Proceso fisiolgico esencial requerido en procesos del desarrollo y en el mantenimiento de la homeostsis tisular.

APOPTOSIS (Caractersticas morfolgicas y bioqumicas)

Contraccin del citoplasma Condensacin de la cromatina Formacin de protrusiones de la membrana plasmtica. Exposicin de la fosfatidilserina en la superficie externa de la membrana plasmtica. Los organelos retienen su integridad No hay ruptura de la membrana con lo que se evita la liberacin de componentes celulares al medio. Degradacin del DNA en fragmentos oligonucleosomales. Formacin de cuerpos apoptticos. (In vitro) Las clulas son reconocidas y eliminadas por fagocitos evitando una inflamacin

inapropiada.

MP N
PS MN MN CH

MV

FC

MN

CM

ER

Li.Ji y col. Cell.Biol.Int. 2000

to

25

50

100 mM

Etanol 25, 50,100 mM Sol. Hanks SFB 0.1% 24h

Del Bello B.y col. FASEBJ 1999

*Cel. Vivas I.P AV *Apoptotica I.P AV + *Necrtica I.P + AV -

NECROSIS (Caractersticas morfolgicas) La clula se hincha. La mitocondra se dilata Los organelos pierden su integridad

La membrana plasmtica se rompe

Se libera el material citoplasmtica provocandose una respuesta inflamatoria.

Alteraciones Neurodegenerativas AIDS, etc.

Cancr, etc.

Expansion clonal de celulas preneoplasicas ?????????????

Proliferacin

Apoptsis

b CANCER

Aumento en el proceso Proliferativo EXPANSION CLONAL ACUMULACION DE CELULAS PRENEOPLASICAS Disminucin en el proceso Apopttico b 0 b : a Regresin o crecimiento

a b

PROLIF, MUERTE

a -b

Programas de seguridad.

Programas a travs de los cuales se eliminan clulas proliferan en forma inapropiada o defectuosa, para asegurar la integridad celular.

Apoptosis Envejecimiento celular.

 Para que estudiar las vas que conducen al proceso de apoptosis?

Actualmente se estudian las vas de sealizacin que conducen a la apoptosis, como blancos potenciales para terapias en procesos de carcinognesis.

Vas de induccin de apoptsis

TNF

TNFR1

A) Receptores en superficie celular

TRADD RIP
DD DD DD DD DD DD DD

B) Mitocondrial

Mitocondria

Otras BH3 proteinas

Bax

Cyto c Apaf-1

Bcl-2 (Bcl-XL) (Bfl1)

RECEPTORES Y LIGANDOS DE MUERTE

OPGL RANKL TRANCE

TRAIL APO-2L

TWEAK APO-3L

CD95L

TNF-a

light

TRAIL-R4

TRAIL-R3

TRAIL-R2

TRAIL-R1

TNF-R2

TNF-R1

APO-1 Fas CD95

TNF

TNFR1

ASK Cinasa reguladora seales apoptosis

TRADD
DD

TRAF2

C-IAP1/2 ASK1 ? NIK MKK7 IKK

JNK
I-kB -NF- kB C-JUN C-IAP1/2 NF- kB AP1 c-jun Fas

DD DD DD DD DD DD

RIP

CASPASAS

Cistein-proteasas. Proteasas cistein-aspartil especficas. Fragmentan en el extremo COOH terminal de residuos de A. Asprtico (entre el prodominio y cada una de las subunidades) Sintetizadas como zimgenos inactivos o proenzimas. 30-50 kDa Presentan : * un prodominio amino-terminal * una sub-unidad grande 20 kDa * una sub-unidad pequea 10 kDa Las enzimas activas parecen ser heterotetrmeros, compuestos de 2 subunidades pequeas y 2 subunidades grandes.

CASPASAS

10

Caspasas iniciadoras:

- prodominios grandes - interaccionan con protenas adaptadoras especficas - permite que las caspasas iniciadoras entren en contacto entre ellas, promoviendo la activacin de un zimgeno por la accin de otro * Modelo de induccin por proximidad *** Caspasas 8 y 9

Caspasas efectoras: - prodominios cortos - fragmentan protenas reguladoras y estructurales - Responsables directas de caractersticas apoptticas. *** Caspasas 3,6 y 7 Degradacin de DNA * ICAD CAD Condensacin de cromatina Fragmentacin del ncleo * Laminas 3 Se inhabilitan procesos de reparacin * PARP de DNA

Modelo de Induccin por Proximidad.

Pro-like

Pro-like

Pro-like

Pro-like

Pro-like

Adapter protein

Pro-like

Aggregated L zymogens
S

Realese of active (processed) proteases

Pro L

Trans-proteolysis
S L S

Pro L S

Pro L S

TNF

Fas L

TRAIL/ Apo2L

TNFR1

DD DD DD DD DD DD

DD DD DD

TRADD RIP TRAF2

DD

C-flip
D E D

DD DD DD DD DD

FADD
D E D

TRAIL-R3

TRAIL-R4

D D E E D D

D D E E D D

TRAIL-R1/R1

Bid

tBid Caspasa-8 activa DISC

C-IAP1/2 ASK1 ? NIK MKK7 IKK

Adaptador ? ProCaspasa-8 Caspasa-8

Procaspasa-3y7

JNK
I-kB -NF- kB C-JUN C-IAP1/2 NF- kB

Caspasa activa 3 y 7

AP1

c-jun Fas

Bratton y col. Exp.Cell.Res.2000

Mitocondria

Bad

Elementos que regulan la induccin de apoptsis en los que se involucra la mitocondria

* Familia BCL-2
Pro- apoptticos Bax Bak Bad Bid Bim Bik Bcl-xs Bok Anti-apoptticos. Bcl-2 Bcl-Xl Bcl-w MCL-1 Al

Fas ligand Fas

Death receptors Independent stimuli 14-3-3

P

Survival factors

DISC
FADD Bid Caspase 8 Bax

Bad Kinases (Akt, MAPK, PKA, Rsks, PAK)

tBid

Calcineurine PP1a

tBid APOPTOSOMA Caspase 9 Apaf-1 Cyt c

Downstream caspases AIF

smac

Cytosol

Bax

tBid

Apoptotic signal

Bcl-xL

Bcl-2

Matrix Cytochrome c

ADP ATP ADP

H+ IV H+ III H+ H+ I

ADP H+ ATP
H+

VDAC closure DYm

ATP

Water, solutes Opening of the PTP

Bax channel

BaxVDAC channel

Lipidic pore or protein-lipid complex

Water, solutes HK

Outer member

BPR

CK

Intermembrane space
Cph. D

Atractyloside Ca2+, Bax, ROS Inner membrane Matrix Cyclosporin A Bongkrekic acid, ATP

Apoptosoma
Apaf 1 : factor activador proteasas apoptticas

ATPdATP

Cyto c

CARD

NB

Apaf1 monomer

Apaf1 oligomer

CARD

L S pro-Casp-9

Caspasa-9

S L L S

L L L s s s s s s

L s s L L L

Pro-caspasa 3 Active casp-3 Apaf1-Casp-9 complex apoptosoma CARD L S pro-Casp-9

Proteinas reguladoras

Pro-apoptotica
SMAC Diablo Protena mitocondrial. Multimrica. (Aprox. 25 kDa) Neutraliza a las IAPS.

Anti-apoptotica
XIAP (IAPs)
Proteinas Inhibidoras de la apoptsis. Citoslicas, inhiben a nivel de caspasa 9 Identificada en el genoma de baculovirus

XIAP cIAP1 cIAP2 NAIP Bruce Survivin pIAP

BIR RING CARD UBC

Proteinas reguladoras

Anti-apoptotica
Flip (ADEDs)
DD

Proteina Inhibidora FLICE (Dominio de muerte asociado a Fas) Altamente expresados en clulas tumorales Inhibicin de apoptosis a nivel de receptores. Interfiere con la activacin de caspasa 8 mediada por Fas.

TNFR Fas TRAIL receptors

Growth Factor receptors Other BH3 proteins Bcl-2 (Bcl-XL) (Bfl1) Akt
BAD

ERK-P
w Bax

Mitochondria

Cyto c Flip (ADEDs)

DD Induction

Apaf-1 Casp-9

PI3K

Casp-8 Casp-3

Other Caspases
Cell death

Other Caspases

XIAP (IAPs)

IKK

I-kB
SMAC Diablo NFkB

VIA DE SEALIZACION DE LAS CINASAS ACTIVADAS POR MITOGENOS VIA ERK Proliferacin y diferenciacin TIROSIN CINASAS Grb/sos VIA P38 VIA ERK3

VIA JNK/SAPK

VIA ERK5

(RESP. A ESTRS) ? ? ?

Ras

Rac/Cdc42

TAK 1, TAO

o
Raf

PAKs
MEKK1-3 MEK 4 MEK3, MEK6 MEK5

ERK3 CINASA

MEK 1,2
ERK 1,2

JNK/SAPKs

P38

ERK5

ERK3S

VIA DE SEALIZACION DE LAS CINASAS ACTIVADAS POR MITOGENOS Ras sos GTP Grb2 GDP MEKK 1 PAK c-fos c-jun
AP-1 B B a a x x
Bcl-2

Ras
GTP

P Raf

MKK1/2

MKK4

ERK 1/2

GADD 153

MEKK 3

JNK 1/2 P38 MKK3/6 Bcl2

BID
APOPTOSOMA

CL100 BID

ROS

Tirosin- cinasa P P P P P Grb2 SOS GTP SRO Y Ras

NADPH oxidasa Rac cdc42

Efector inactivo

GDP

Pak MLK1 MEKK 1,4 P MEK 4,7

P P
GST-P ?

P P JIP-1 P

JNK

GSH

REF 1 TRX
P P

GSSG

c-jun P

J N K

APOPTOSIS Fas L
c-jun Hem

AP1

P P P P JNK

Bcl-2

Bax n Cit-c

AIF

Pro-caspasa 9 Bid caspasa 9

Bax n
t-Bid Bax Bax

Apaf-1

dATP Pro-caspasa 3/7

PARP

MEEK1
caspasa 2 F r a g m e n t a c i o n s u s t r a t o

B-raf

caspasa 3 caspasa 8

ERK
AP1

caspasa 6 caspasa 10

c-jun

Fas caspasa 7

Apoptosis independiente de caspasas caspasas Bcl-2

Caractersticas apoptosis

Proteasas MMP

calpainas catepsinas perforinas granzima B

Bax, p53 citoplasmtico Bid, PARP lisosomal y extracelular asisten el ingreso de perforinas granulos ICAD,laminas citotxicos procaspasas Apoptosis Indep. caspasas

Perforina Granzima B

CTLs activado

Granzimas Perforinas

Grnulos citotxicos

ICAD Laminas Pro-caspasas Bid, Bax

Envejecimiento celular
G0
Ciclina D CDK4

M G2

Rb E2F

G1 S

Reprime genes blanco

P Rb P P P

E2F

Transcripcin

 Envejecimiento celular
Arresto del ciclo celular que limita la propagacin continua, al detenerse en la fase G1 del ciclo, adoptando una morfologa caracterstica pero mantenindose metabolicamente activa. La senectud celular prematura se presenta tras la exposicin a varias condiciones de estrs

Rb
CDK4
INK4A

RAS MYC

envejecimiento ARF MDM2

p21

p53

apoptosis

Los caminos de la resistencia a MYC

apoptosis
ARF Bcl-2

envejecimiento

tumor
Defecto apoptosis

p53

defecto

Cel. normal

INK4A

mutacin Tumor

p53

resistente a frmacos

b RAS

envejecimiento
INK4A
Defecto envejecimiento

p53

apoptosis p53

mutacin

Cel. normal

Tumor resistente a frmacos

c oncogen

apoptosis p53

mutacin

p53

defecto Tumor resistente a frmacos