UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE AGRONOMIA DEPARTAMENTO DE BOTANICA AGRICOLA CATEDRA DE FITOPATOLOGIA, PROTECCION VEGETAL III

POSTULADOS DE KCH

Integrantes: Rosa Fuentes Jess Hernndez. Maracay, Octubre de 2011

Introduccin
Antecedentes

Bacterias
Hongos

Objetivos

General: Aplicacin de los postulados de Kch con objeto de saber cul es el agente participante.

Especficos:
Caracterizar sntomas y signos de los patgenos a estudiar. Caracterizar la patogenicidad de hongos y bacterias. Definir los posibles agentes causantes de la enfermedad.

Materiales:

Medios de Cultivo

PDA (200 gr. de papa, 20 gr. de dextrosa y 15 gr. de agar)

AN (5 gr. de Peptona, 3 gr. extracto de carne y 15 gr. de agar)

3%

Buffer
3%

Metodologa:
Primer postulado de Kch: El patgeno debe encontrase asociado con la enfermedad en todas las plastas enfermas que se examinen.

Bacterias. Sntomas: Pudricin del fruto Necrosis Signos: Presencia de exudado

Hongos. Sntomas: Pudricin del fruto Necrosis

Segundo postulado de Kch: El patgeno debe aislarse en medios de cultivo y desarrollarse en un cultivo puro para describir sus caractersticas.

Hongos Seleccionar parte en donde se aprecie zona de transicin en la planta o fruto, despus se la lava con agua de chorro para eliminar la tierra, luego con A.D.E. y se desinfecta con hipoclorito de sodio al 3 % por 3 minutos. En la zona de transicin quitar la corteza usando un bistur previamente estril dejando al descubierto el tejido interno. Cortar 5 trocitos de 2-3mm y sembrarlos en medio de cultivo (AN) en forma equidistantes cerca de u mechero. Se logro obtener un buen crecimiento de colonias siendo una sola la que se contamino, se retiro y se reaisl como medida preventiva para evitar contaminaciones futuras.

Bacterias Se selecciono y se corto un trozo de tejido enfermo tomando la zona de transicin en el aj. Se lavo con agua de chorro y despus de desinfecto con hipoclorito al 1% por 1 minuto. Luego se macero con A.D.E. separando el lquido y con un anza de platino desinfectada se toman 2 anzadas y se realiza un estriado por agotamiento en el medio de cultivo (AN) cerca del mechero. A las 24 horas se hace el marcaje de las colonias que han nacido. A las 48-72 horas se observan colonias puras de bacterias. Estas colonias puras se proceden a aislar a travs del mtodo de estriado por agotamiento.

Bacterias Tercer postulado de Kch El patgeno desarrollado en un cultivo puro, debe ser inoculado en plantas sanas de la misma variedad o especie en donde apareci la enfermedad y debe producir la misma enfermedad en las plantas inoculadas.
Antes de realizar cualquier procedimiento se realiza una prueba de KOH a una de las colonia previamente aislada siendo estas de tipo Gram Negativa (-), siendo indicativo de ser patognica. Se le coloca A.D.E. a la capsula y luego se hace un raspado con un bistur separando todo el material bacteriano del medio del cultivo, colocndolo en un envase. El inoculo anteriormente aislado se inocula en la planta Philodendra, se desinfecta con alcohol, luego se le efectu pequeas heridas o agujeros con una inyectadora. En esta zona donde se hicieron estas heridas se coloca un algodn empapado con la solucin bacteriana en una parte del tallo y en otra parte un algodn humedecido con A.D.E. (Testigo). Se Guarda el experimento en una cmara hmeda para asegurar la ingreso y desarrollo del fitopatogeno.

Hongos Antes de aplicar el tercer postulado se realizo una impresin con cello tape al cultivo puro, observndose al microscopio Conidios de Fusarium. Se tomo muestra de cada uno de los puntos de crecimiento del hongo colocndose en una capsula con A.D.E. Luego se filtro en una gasa y as se obtiene la solucin del hongo. Despus se procede a limpiar el fruto de parchita, a la cual se le hicieron heridas con agujas de inyectadotas, a una se le aplica algodn empapados en A.D.E. y en la otra se le aplica un algodn con la solucin del inoculo. De este liquido de inoculo de hongo se extrajo una muestra de aproximadamente 1mm. y se coloco en el hemtocimetro, determinndose la siguiente concentracin de inoculo: 6x104 No. /cc.

Cuarto Postulado de Kch El patgeno debe reaislarse una vez ms en un cultivo puro (si es posible) y sus caractersticas deben coincidir con las descritas en el segundo postulado.

Hongos Se reaisl el hongo tomado en las muestras del fruto de parchita con heridas y sin ellas. En el fruto sin heridas no se evidencio la presencia del patgeno. En las plantas con heridas si se not la presencia del hongo a travs de sntomas como la pudricin del mismo, pero al ser observado en el microscopio no se observo presencia de Fusarium solo de Asperguillum.

Bacterias
Se procedi a hacer un reaislamiento de la bacteria. Se aplica la tcnica del KOH al 3% para saber la Gram Negatividad (-) del patgeno; y se comprueba que si es un patgeno. Se realizo la prueba de la oxidasa obteniendo un resultado positivo y la catalasa negativa.

Resultados y discusin

Hongos
Divisin
Clase Orden Familia

Ascomycota
Euascomycetes Hypocreales Hypocreaceae

Gnero
Especies

Fusarium
F. oxysporum, F. solani, F. verticilloides, F. dimerum, F. chlamydosporum, etc.

Bacterias
Reino Filo Bacteria Proteobacteria Gammaproteobacteri a Enterobacteriales Enterobacteriaceae Erwinia

Clase
Orden Familia Genero

xitos y fracasos

Bibliografa Agrios, G. N. 1998. Fitopatologa. 2da Edicin. Editorial. Limusa. Mxico, D.F. Arauz, L. 1998. Fitopatologa. Un Enfoque Agroecologico. Editorial De La Universidad De Costa Rica. San Jos, Costa Rica. Ministerio De Agricultura, Pesca Y Alimentacin.1991. Manual De Laboratorio. Diagnostico De Hongos, Bacterias Y Nematodos Fitopatogenos. Madrid