UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA POSTGRADO DE AGRONOMIA CULTIVO DE TEJIDOS

Multiplicacin in vitro del helecho de cacho de venado (Platycerium bifurcatum) a partir de esporas.

Ing. Nathalia Gonzalez

Julio 2009

INTRODUCCIN
ORIGEN: Australia DESCRIPCION: Frondas frtiles Frondas Estriles. Rizomas PROPAGACION: Lento crecimiento USOS: Medicinal Ornamental Artesanal.

HELECHOS

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Implantar esporas de helecho de cacho de venado in vitro utilizando diferentes medios de cultivo evaluando el comportamiento en cuanto a formacin y germinacin de los gametofitos dentro del laboratorio

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Multiplicacin in vitro del helecho de cacho de venado a partir de las esporas en medios slidos y lquidos. Evaluar el desarrollo y germinacin de los gametofitos propagados a partir de esporas. Establecer y comparar las diferencias cuantitativas en los gametofitos y esporofitos en los diferentes medios de cultivo.

ANTECEDENTES
Helecho Cacho de Venado (Platycerium bifurcatum)
Rizomas Gruesos Ramificados Escamosos

Frondas Frtiles 90 cm de longitud Colgantes 2-3 bifurcadas de textura coricea Frondas Estriles 60 x 45 cm Sesiles, erectos Redondeados Textura papiracea

ASPECTOS AGROECOLOGICOS Temperatura: Optima > de 21 C Humedad: Alta.

Radiacin: Perjudicial exceso de luz.

Suelos: Porosos. Riego: Si es necesario. Fertilizacin: N, P, K, Ca, Mg. Plagas y Enfermedades: Cochinillas, caros, pulgones y nematodos Hongos como botrytis y el pytium y algunos virus.

PROPAGACION DE LOS HELECHOS

PROPAGACION in vivo DE LOS HELECHOS

Estolones. Divisin de plantas. Esporas.

PROPAGACION in vitro DE LOS HELECHOS

Secciones de hojas. Esporas.
Hoja frtil con yema vegetativa

ESTRUCTURAS DE PROPAGACION ASEXUAL

Camloh y Gogala, 1991 Brotes adventicios en hojas. IBA no promueve enraizamiento.

Camloh, 1994

Hojas juveniles in vitro. < Desarrollo en medios que contenan BA. Esporofito = plantas donadora. Escamas foliares. Efecto de la sacarosa. Clulas de hojas. Masas gametofiticas iniciales. 1 gametofito produce 1 esporofito.

Dolinsek y Camloh, 1997

Teng y Teng, 1997 Dolinsek, 2002

Hojas. Efecto de la sacarosa. Gemetofitos = gametofitos provenientes de esporas.

ESTRUCTURAS DE PROPAGACION SEXUAL (ESPORAS)

Camloh y Gogala, 1992

Masas Gametofticas iniciadas Efecto de Sacarosa, pH y agar Desarrollo esporofitico en suelo. Efecto de edad y esterilizacin de esporas.

Camloh, 1999

Becerra

Metodologas de desinfeccin Medios lquidos y slidos

MATERIALES Y METODOS

DESINFECCION DE ESPORAS EN CAMARA DE FLUJO LAMINAR

IMPLANTACION DE ESPORAS

Inmersi n de las esporas en etanol 70% por 30 seg.

Inmersin de las esporas en hipoclorit o de sodio 5,25% por 5min.

3 lavados con agua destilada desionizad a y estril

MS; 1,5%sacar osa; 0,7%de agar; pH 5,7

MS; 3,0%sacar osa; 0,7%de agar; pH 5,7

MS; 4,5%sacar osa; 0,7%de agar; pH 5,7

T0: MS; 1,5% sacarosa; 0,7% de agar. T1: MS; 3,0% sacarosa; 0,7% de agar. T2: MS; 4,5% sacarosa; 0,7% de agar.

Cuarto climtico bajo condiciones controladas (26 2 C y 16 horas de iluminacin a 2 M/sm)

METODOLOGIA UTILIZADA

METODOLOGIA A UTILIZAR
OBTENCION DE GAMETOFITOS

GERMINACION DE GAMETOFITOS (0,5 cm aprox. de dimetro)

Miller y Miller (1961); 4% de sacarosa; pH 5.7 con papel de filtro

Miller y Miller (1961); 3% de sacarosa; 0,8 % de agar; pH 5.7

T0: Miller y Miller; 3,0 % de sacarosa; 0,8 % de agar. T1: Miller y Miller; 4,0 % de sacarosa.

El diseo estadstico utilizado fue completamente aleatorizado. Se realizaron tres (3) tratamientos, siete (7) repeticiones siendo la unidad experimental de un frasco.

Las variables: ocurrencia y tiempo de germinacin. presencia de prtalos. formacin de esporofitos contaminacin.

RESULTADOS Y DISCUSION

Obtencin de Gametofitos

Bajos % de Contaminacin

Obtencin de Esporofitos

Porcentaje de frascos con esporas cultivadas in vitro procedentes del helecho de cacho de venado (Platycerium bifurcatum) en los diferentes tratamientos 3 semanas despus de implantados.

Tratamientosy 0 1 2

Frascos contaminados (%) 4,76 6,34 3,17

T0: MS; 1,5% sacarosa; 0,7% de agar. T1: MS; 3,0% sacarosa; 0,7% de agar. T2: MS; 4,5% sacarosa; 0,7% de agar.

T0

T1

T2

Esporas de helecho de cacho de venado (Platycerium bifurcatum) tres semanas despus de implantadas in vitro en diferentes medios de cultivo T0 (MS; 1,5% sacarosa; 0,7% de agar), T1 (MS; 3,0% sacarosa; 0,7% de agar) y T2 (MS; 4,5% sacarosa; 0,7% de agar).

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES La metodologa de desinfeccin utilizada permiti obtener altos niveles de sobrevivencia en las esporas. Es recomendable seguir utilizando la misma metodologa de desinfeccin en futuras investigaciones. Es conveniente continuar realizando observaciones peridicas que permitan evidenciar las respuestas de las explantas (esporas) bajo condiciones de cultivo in vitro. El comportamiento en vivero de las plantas obtenidas en condiciones de laboratorio debern ser evaluadas tambin en otras investigaciones para conocer la mejor forma de iniciar la propagacin in vitro del helecho de cacho de venado (Platycerim bifurcatum).