藍色忍冬 屬植 物 ( 藍靛果 忍冬 ) 萃取 物對 LPS( 脂肪多

醣類 ) 所導致 發炎 的作用

Effects of blue honeysuckle (Lonicera caerulea L.)

extract on lipopolysaccharide-induced inflammation
in vitro and in vivo

作者 ： Jin, X.H., Ohgami, K., Shiratori, K., Suzuki, Y., Koyama, Y.,
Yoshida, K., Ilieva, I., Tanaka, T., Onoe, K.and Ohno, S.

出處 ： Eye Research 82 (2006) 860–867

演講 者：蔡 一誠

日期 ： 2008/05/29
 摘要 1/2
　　
　　 The aim of the present study was to investigate the effects of blue
honeysuckle extract (BHE), which contains high level of phenolic compounds,
on endotoxin-induced uveitis (EIU). Male Lewis rats were randomly divided into
5 groups with 14 rats in each (eight rats for collection of aqueous humor, six
rats for histologic examination). EIU was induced by a footpad injection of
lipopolysaccharide (LPS). 1, 10, or 100 mg of BHE was injected intravenously
immediately after LPS injection.

　　　 The aqueous humor was collected at 24 h after LPS injection, the number
of infiltrating cells, protein concentration, nitric oxide (NO), tumor necrosis
factor (TNF)-α, and prostaglandin (PG)-E2 levels in the aqueous humor were
determined. Some eyes were enucleated for histologic examination and
immunohistochemical analysis. Immunohistochemical staining with a
monoclonal antibody against activated nuclear factor (NF)-kB was performed to
evaluate the effect of BHE on NF-κB activation.

　 　　 To further clarify the anti-inflammatory effect, RAW264.7 cells (a mouse

macrophage cell line) were stimulated with LPS in the presence or absence of
BHE and its major phenolics, cyanidin 3-glucoside (C3G), cyanidin 3-rutinoside
(C3R), chlorogenic acid (CA). Expression of inducible NO synthase (iNOS) and
cyclooxygenase-2 (COX-2) were analyzed by Western blot method.
 摘要 2/2

　 　　 BHE treatment significantly reduced the inflammatory cell

infiltration, the protein concentration, the levels of NO, TNF-α and
PGE2 in the aqueous humor and improved histologic status of the
ocular tissue. The number of activated NF-κB-positive cells was lower
in the iris-ciliary body treated with BHE at 3 h after LPS injection.

　　　 BHE significantly suppressed the production of NO, PGE2 and

TNF-α in the culture medium as well as the expression of iNOS and
COX-2 by LPS-stimulated RAW264.7 cells in a dose-dependent
fashion. C3G, C3R and CA showed no or weak inhibitory effects on the
level of inflammatory mediators and the expression of iNOS and COX-
2.

　　 　 These results suggest that BHE attenuates the degree of

inflammation in eyes with EIU by inhibiting the NF-κB dependent
signaling pathway and the subsequent production of proinflammatory
mediators.
 前言
　　 　 藍色 忍冬 屬植物 或甜 莓果忍 冬屬植 物 (Lonicera caerulea L ) 果子
廣泛 被收 穫在俄 國、 中國和 日本 。果子 形狀是 長卵 形，而 顏色 是藍紫 色。
他們 的味 道類似 越桔 、黑醋 栗， 和藍莓 。藍色 忍冬 屬植物 萃取 物 (BHE)
包含 高水 平酚類 化合 物，報 告中 有多種 生物特 性， 包括抗 氧化 、抗菌 、
抗發 炎等 。

　 　 　複 合性酚 類化合 物被 認為是 一種 新穎、 安全 、和 無副作 用的 藥方

，尤 其在 發炎症 狀中 來調控 NF-κb 。在很 多報 告中顯 示， 許多種 複合
性酚 類化 合物在 試管 內和在 體內 有效地 抗發炎 作用 。

藍靛 果忍冬
拉丁 學名：
Lonicera caerulea L. var. enulis Turcz et Herd
又名 藍靛果、羊 奶子、黑瞎 子果、山茄 子果、藍
果。
多年 生落葉小灌 木。
該果 中含有豐富 的 Vp 活性物 質，具有很 高的藥
用價 值。
　

　 　　 EIU (endotoxin-induced uveitis) ，一種 動物的 眼睛 經內 毒素而 導

致嚴 重的 發炎症 狀。 LPS (lipopolysaccharide) 是由 革蘭 氏陰性 的細 菌
細胞 壁所 組成， 釋放 出的內 毒素 會對人 體造成 危害 。 EIU 的特徵 是蛋
白質 會滲 漏到前 庭， 以及巨 噬細 胞與嗜 中性白 血球 滲透到 眼睛 。

　　 　在 感染 EIU 的老鼠 中，發 炎症 狀主要 顯現 在前 庭 ( 虹膜睫 狀體

炎 ) ，且 發炎 細胞也 會滲 入玻 璃體和 視網膜 。而 LPS 在 RAW264.7 細胞
( 老鼠 巨噬細 胞細 胞線 ) 主要 是受 到 BHE 和它 的主 要酚 醛樹脂 、
cyanidin 3 glucoside (C3G) 、 cyanidin 3 rutinoside
(C3R) 、 chlorogenic acid (CA) 的存 在或 缺乏影 響。 然而 iNOS 和
COX-2 的濃度可 利用 西方點 墨法 分析。

　　 　　研 究發 現 BHE 影響了 細胞 的滲透 作用 、蛋白 質外 滲、 TNF-

α 、 PGE2 與 NO 濃度 。為 了證實 其抗 發炎反 應， 我們在 經過 BHE 處理
過的 老鼠 虹膜睫 體調 查 NF-κ Ｂ的 作用 。另外 ，也 在 BHE 處理的
RAW264.7 細胞 觀察 了 NO 、 PGE2 、 TNF-α 、 COX-2 和 iNOS 的濃 度
。
 COX2 和 PGE2
COX 環氧化酶，分成 COX1 和 COX2

COX1 維持體內正常生理反應

COX2 產生 PGE2 ，發炎反應

NF-κB
核轉錄因子
LPS
IL-1β
IκB kinase TNF-α

PP
IκBα IκBα IκBα
p50
p65 p50 Degradation
p65
CYTOPLASM
p50
p65 mRNA
NUCLEUS
p50
p65

Target Gene
 實驗方法
• 將老鼠劃 分了成每 5 個小組 ，每組 14 隻鼠 ( 八隻鼠為 體液測
試，六隻 鼠為組織測 試 ) 。利用足蹼 注射 200 mg LPS 導致了
EIU 。之 後，再將 1 、 10 、 100 mg 的 BHE 進行 靜脈注射。
• 體液組注 射 LPS 24H 之後， 利用血球計 數盤在顯微 鏡下計算
細胞活性 ，觀察滲入 細胞的數量、 蛋白質含量 。
• 利用 1 mg/ml LPS 刺激 RAW264.7 細胞 ( 老鼠巨 噬細胞細 胞
線 ) ，接著 再個別加 入 1, 10,100 mg/ml 的 BHE 與 100
mg/ml of C3G, C3R, CA 。
• 利用亞硝 酸鹽比色法 (nitrite colorimetric assay kit) 分析 NO
的含量。
• 利用 ELISA 測量細 胞腫瘤壞 死因素 (TNF)- α 和前列 腺素 (PG)-
E2 的濃度。
• 將眼睛組 織使用 HE （ Hematoxylin-Eosin stain) 染色後，用
光學顯微 鏡觀察前庭 、虹膜睫狀體 、玻璃體和 視網膜， 評估
發炎的程 度。
• 利用西方 點墨法分析 ， COX 與 iNOS 蛋白質濃度。
• 在老鼠的 虹膜睫狀體 ，使用雷射掃 瞄共厄焦顯 微鏡 ( laser
scanning confocal microscopy ) 分析 NF-κ Ｂ。
 結果
　　 　
　　 　 本 研究的 結果顯 示， BHE 成功地壓 制 LPS 引起 的 TNF-α 與 NF-
κb 的活化作 用。 除 TNF-α 以外， NF-κb 也能 調控 iNOS 和 COX-2 ，兩
者可 以各 自地誘 導 NO 和 PGE2 。

　　 　 研 究中， TNF-α 、 NO 和 PGE2 皆被 BHE 抑制並 且有 效地降 低濃

度， 這些 資料說 明了 ， BH E 能抗發 炎是 因為抑 制了 這些發 炎因 子。

　　 　 經 過 LPS 刺激的 RAW264.7 細胞裡 ，發 現了 BHE 能抑 制 iNOS 和

COX-2 的表 現，以 及其 產生的 NO 和 PGE2 。因 此， BHE 藉由 抑制
iNOS 和 COX-2 的表現以 減少 NO 和 PGE2 的生 產。然 而，
C3G 、 C3R 和 CA 對 iNOS 和 COX-2 的影 響， 顯示出 無效 或微弱 的抑
制作 用。
 結論
　　　

　　 　 在本 研究中 ， BHE 大量 減少 了發 炎細胞 滲透 活動、 蛋白質 含量

、 NO 濃度 、 TNF-α 與 PGE2 ，且明 顯地 改善了 眼睛 組織狀 態。 BHE
劑量 越大， 越是 能壓制 EIU 的發 炎反應 。由 結果可 得知 ， EIU 的產 生與
嗜中 性白血 球所 誘導的 發炎 因子 有關係， 例如 ： TNF-α, PGE2 and
NO 。

　　　 眾 多的資 料証明 ， EIU 產生 的症 狀主 要是腫 瘤壞 死因素 (TNF)-α 影

響。 其中 iNOS-NO 與 COX-2 、 PGE2 也被發 現與 EIU 發病原 理有關
，然 而 iNOS 、 COX-2 、 TNF-α 的產生 是由 NF-κB 調控 。

　　　 因 此，抑 制 NF-κb 的活化 可用 來說 明 BHE 對 EIU 的治 療作用 。總

之， 藉著抑 制 NF-κb 和發炎 因子 ， BHE 能有效 地抑 制 EIU 在老 鼠眼 睛
組織 中的發 炎作 用。
~ 謝謝聆聽 ~