Protenas

Aspectos gerais

nome vem da palavra grega protos, a primeira a mais importante

macromolculas mais abundantes nas clulas

Ocorrem em todas as clulas e em todas as partes destas so constitudas por aminocidos, ligados atravs de ligaes denominadas ligaes peptdicas.

as clulas produzem protenas com as mais variadas estruturas e funes com 20 aminocidos bsicos.

Estrutura geral dos aminocidos

Aminocidos e Protenas

So macromolculas resultantes da condensao de molculas aminocidos atravs da ligao peptdica.

Nveis Estruturais das Protenas

Importncia

Juntamente com os glicdios e os lipdeos, as protenas constituem a alimentao bsica dos animais. No entanto, podemos dizer que as protenas so ainda mais importantes, pois so fundamentais na estrutura, funcionamento e reproduo de todas as clulas vivas.

Principais funes das protenas

-Enzimas; -Transportadoras -Armazenamento -Contrteis ou de motilidade -Estruturais -Defesa -Reguladoras -Outras

Protenas totais e sricas

Protenas totais Albumina Globulinas

Protenas totais

Existem mais de 300 protenas diferentes j identificadas no plasma sanguneo. Papis bioqumicos especficos, suas concentraes so afetadas por processos patolgicos Apenas algumas so avaliadas rotineiramente Amostras mais medidas: sangue, urina, LCR, lquido amnitico, peritonial, pleural ou sinovial, saliva ou fezes.

Protenas totais

Funes: - transporte - manuteno da presso coloidosmtica - tamponamento de pH - imunidade humoral - atividade enzimtica - coagulao - resposta da fase aguda

A quantificao das protenas totais determina grosseiramente todas as protenas presentes na poro de plasma do sangue.

Protenas totais

A concentrao das protenas plasmticas determinada por trs fatores: - Velocidade de sntese: A maioria produzida no fgado. Cerca de 25 g/dia num indivduo de 70 kg - Volume de lquido: Cerca de 250 g de protenas so encontradas no compartimento vascular de um homem de 70 kg, dando uma concentrao ao redor de 7,0 g/dl - Velocidade do catabolismo: As protenas totais so degradadas, liberando aminocidos para a sntese de protenas celulares

Protenas totais

Hiperproteinemia - Desidratao (vmito, diarria ou acidose diabtica) - Mieloma mltiplo - Cirrose heptica - Hepatite ativa crnica - Lupus eritematoso sistmico - Infeces bacterianas crnicas

Hipoproteinemia - Hemodiluio - Perda renal de protenas - Queimaduras severas -Desnutrio -Hipertireoidismo -Hemorragia grave

Protenas totais sricas

Determinao das protenas totais: - Mtodo do Biureto: O cobre, em meio alcalino, reage com a ligao peptdica. O produto apresenta colorao violeta proporcional a quantidade de ligaes peptdicas presentes. Interferentes: Substncias que possam reagir com o on cprico. Ex: Bilirrubina aumentada, triglicerdeos acima de 500mg/dl VR soro: 6,0 8,0 g/dl

Interao entre ons Cu 2+ e grupamentos amina dos aminocidos

Protenas totais

Outros mtodos: - Mtodo de Lowry - reagente Folin-Ciocalteau, sofre reduo quando reage com protenas, na presena de Cu2+ e produzindo um composto com absoro mxima em 750 nm. - Mtodo de Bradford - a interao entre o corante BG250 e protenas que contm aminocidos de cadeias laterais bsicas ou aromticas. Leitura a 595 nm. - Mtodo de Smith - reao de cobre (II) com protenas, em meio alcalino, produzindo Cu1+ e formando um complexo com o BCA. Leitura a 560 nm.

Cuidados: Paciente: Jejum de 8 horas Amostra: soro sem hemlise e no lipmico

Protenas totais na urina

-Protenas de baixa massa molecular so filtradas atravs da membrana glomerular reabsorvidas -Pequena frao aparece na urina -20 a 50% da protena urinria albumina

Protenas totais na urina Proteinria

Proteinria transitria desaparece Proteinria ortosttica (postural) - Adolescentes altos e magros, adultos com menos de 30 anos. At 1 g/dia Proteinria devido doena extra-renal - At 500 mg/dia. No indicativa de doena renal. Proteinria devido doena glomerular -Valores maiores que 500 g/dia. Associada com: Edema, hipertenso, hiperlipidemia. Proteinria devido a doena tubular - Protenas de baixo peso molecular (2-microglobulina)

Protenas totais na urina Proteinria

Determinao das Protenas Totais na Urina - Amostras: 24 h, mantidas em refrigerador sem preservativos. - Mtodos: Turbidimetria protena desnaturada e precipitada Corantes: absorbncia Biureto: menos usada. ons cobre se ligam s ligaes peptdicas. Indicador de pH protena se liga ao indicador provocando alteraes na cor.

Protenas totais na urina Proteinria

Protenas marcadoras da disfuno renal
-

Protenas com massa molecular > 100.000 daltons avanado comprometimento da membrana IgG Protenas 50.000 e 80.000 daltons defeito reversvel no glomrulo albumina e transferrina

Protenas < 50.000 daltons - normal

Albumina

Representa cerca de 60% das protenas do plasma humano. Meia vida de 15-19 dias Velocidade de sntese depende da ingesto protica e regulada por feedback negativo pelo teor de albumina circulante Produo de cerca de 15 g/dia

Albumina

Funes - Regulao osmtica - Transporte e armazenamento : cidos graxo, esterides; bilirrubina e frmacos Sntese : no fgado, na forma de pr-albumina. Degradao: mecanismo desconhecido, degradadas aleatoriamente (novas e velhas), provavelmente pelos endotlio dos capilares, medula ssea e sinusides hepticos.

Albumina
DOSAGEM Paciente : No consumir dieta rica em gordura por 48 h antes da prova

Amostra: soro, observar postura dos pacientes, pois em pacientes ambulatoriais o teor de albumina cerca de 0,3 g/dL maior que em pacientes hospitalizados. Interferncias: Elevao agentes citotxicos. Reduo Paracetamol, Aspirina, Ampicilina

Albumina

Hiperalbuminemia - rara - Encontrada em casos de carcinomatose metasttica, desidratao aguda, diarria, estresse, febre reumtica, meningite, osteomielites, traumatismo, tuberculose, hemoconcentrao, entre outros.

Albumina

Hipoalbuminemia - Reduo da sntese: dano hepatocelular - Cirrose - Ingesto inadequada de protenas: a sntese reduzida a um tero durante um jejum de 24 h - Perda protica extra-vascular: Sndrome nefrtica (proteinria massiva). - Queimaduras extensas : a pele o maior local de armazenamento extra-vascular da albumina

Albumina

Conseqncias da hipoalbuminemia: - Edema facial, macroglossia, ictercia conjuntival - Bradicardia, hipotenso, cardiomegalia - Hepato-esplenomegalia, ascites - Encefalopatias - Atrofia testicular - Ginecomastia, hipotermia

Albumina

Determinao da Albumina Srica:

Amostra: soro

- no consumir dieta rica em gordura 48 h antes do teste

evitar estase prolongada hemoconcentrao aumenta nveis de protenas plasmticas -postura pacientes ambulatoriais 0,3 g/dL maior. Mtodos: Corantes fixao Eletroforese

Fracionamento eletrofortico
A eletroforese de protenas (EFP) no soro:

tcnica simples de separao o teste de triagem mais utilizado para investigao de anormalidades das protenas sricas. Em condies normais, so separadas cinco bandas do soro: albumina, alfa-1, alfa-2, beta e gamaglobulinas. Eventualmente, pode ser observada a presena da pralbumina.

Fracionamento eletrofortico

Eletroforese

Albumina

Albuminria (albumina na urina)

- elevao da permeabilidade glomerular - normal menor que 30 mg/dL -microalbuminria 30 300 mg/dL - albuminria - > 300 mg/dL

Globulinas

Regio 1 Regio 2 Regio 1 Regio 2 Regio

Globulinas

Regio 1 -Alfa1-antitripsina (AAT)

Tem como funo a inibio de vrias proteases provenientes dos neutrfilos. Proteo contra destruio da parede alveolar VR: 20 - 60mol/L

Globulinas
- Alfa1-glicoprotena cida(AAG)
Tem como funo primria inativar a progesterona, alem de interagir com alguma drogas. Aumentada na artrite reumatide, Lpus, queimaduras e infarto. O papel exato da AAG no conhecido
-Alfa1-Fetoprotena (AFP) Usada para detectar defeitos de tubo neural em fetos, examinado atravs do lquido amnitico VR lquido amnitico: 5 a 25 mg/dl -Alfa 1- Lipoprotena Transportadora de lipdeos

Globulinas

Regio 2
-Haptoglobina (HAP) Transportadora de Hb para o retculo endotelial para ser degradada. Aumentada durante os processos inflamatrios e diminuda em sndromes hemolticas. - Alfa2-macroglobulinainibidora de proteases. Aumentada durante a infncia e na sndrome nefrtica e est diminuda em hepatopatias crnicas. - Ceruplasmina (CER) fixadora de cobre. Est diminuda nas anemias e aumentada em neoplasias malignas; protena de fase aguda tardia.

Globulinas

Regio 1
-Transferritina (TRF)Transporta o ferro do intestino at a medula ssea. Est aumentada na depleo de ferro e diminuda nas perdas proticas e hepatopatias crnicas. -Hemopexina (HX) Transporta o grupamento Heme at o fgado -Beta-lipoprotena Transportadora de lipdeos -Complemento C4 Resposta humoral, participa da via clssica do complemento. A deficincia resulta reduo da resposta a infeces.

Globulinas

Regio 2
- Fibrinognio Substrato da trombina, no encontrado em fracionamentos eletroforticos pois a amostra usada o soro -Complemento frao C3 Atua na resposta imunolgica humoral - Beta2- microglobulina (BMG) Protena usada para testar a funo tubular renal. Elevada em IR

Globulinas

Regio
-Protena C reativa Marcador no-especfico de leso tecidual, infeco ou necrose celular associada com infarto ou malignidade VR: 80-800 g/dl

Globulinas

Regio
- ImunoglobulinasSintetizadas pelo sistema imune em resposta a uma partcula estranha. -Reconhecem, reagem, neutralizam bactrias, vrus e protenas estranhas. -Constitudas por protenas com estrutura em y. -4 cadeias: 2 leves(L) e 2 pesadas(H) - Antgeno se liga a regio varivel das cadeias. - IgG, IgM, IgA, IgD e IgE

Globulinas

Imunoglobulinas IgG (1,2,3,4)85% das Ig totais, atravessa a barreira placentria VR:800-1800mg/dl IgM 5-10% das Ig totais VR: 50-150mg/dl

IgE importante papel na atopia e imunidade antiparasitria VR:0-0,2mg/dl

Globulinas

Hipogamaglobulinemia -Imunodeficincias hereditrias -Imunodeficincia adquirida: neoplasias linfides, IR, terapia imunossupressiva -Mieloma mltiplo, leucemia linfoctica crnica -Crianas prematuras -Frmacos: Fenitona, carbamazepina, c. Valprico

Globulinas

Gamopatias policlonais -Aumentos difusos das gamaglobulinemias -Causado por: lepra, tuberculose, cirrose biliar primria, cirrose portal, hepatite crnica ativa, doena de Crohn, lpus eritematoso sistmico

Gamopatias monoclonais -Encontrada em: Mieloma mltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrm, doena da cadeia pesada (doena de Franklin)

Globulinas

Eletroforese de protenas sricas em gel de agarose, (1) hipergamaglobulinemia em processo inflamatrio; (2) e (3): fracionamento normal; (4) gama monoclonal no mieloma mltiplo.

Globulinas

Perfis eletroforticos patolgicos: -Mau fornecimento protico: albumina , 1 e 2, , -Perdas proticas Sndrome Nefrtica: albumina , 1, 2, , (varia) -Hepatite crnica: albumina, -Hepatite aguda: albumina ou normal, 1, 2 normal ou , e -Cirrose: albumina , 1,2 normal ou , , fuso das fraes e

Globulinas

Protenas totais e sricas

Bibliografia - Motta, Valter Bioqumica clnica para o laboratrio: princpios e interpretaes 4ed. Porto Alegre: Editora Mdica Missau;2003 -Ravel, Richard Laboratrio clnico- 6ed.Rio de Janeiro: Editora Guanabara Koogan; 1997 - Zaia,D.A.M et al Determinao de protenas totais via espectrofotometria: vantagens e desvantagens dos mtodos existentes. Qumica nova 21(6), 1998. -Laboratrio AutoLab. Disponvel em: www.laboratorioautolab.com Acesso em 25/07/2007 - LabTest. Disponvel em: www.labtest.com.br Acesso em 23/08/2007