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Plan du cours

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Introduction Classification Caractres bactriologiques Epidmiologie Pouvoir pathogne Diagnostic bactriologique Elments de thrapeutique
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1. Introduction

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Dfinition
Cocci Gram (+) Groups en amas AAF Catalase (+) Oxydase (-) Espce type: Staphylococcus aureus

Intrt de la leon
Frquence leve des staphylococcies Toxi-infections collectives Infections nosocomiales Formes trs graves Staphylococcie maligne de la face Septicmies Problmes des souches mti-R

2. Classification

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2.1. Micrococcaceae

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Anciens genres
Micrococcus Stomatococcus Planococcus Staphylococcus Pibram et al., 1929

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Restructuration
Sous-ordre: Micrococcineae Ordre: Actinomycetales Sous-classe: Actinobacteridae Classe: Actinobacteria Stackebrandt et al., 1997

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Nouveaux genres
Arthrobacter Kocuria Micrococcus Nestenkonia Renibacterium Rothia Stackebrandt et al., 1997
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Sont exclus de la famille


Staphylococcus Planococcus Stackebrandt et al., 1997

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2.2. Staphylococcus

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2.2.1. Situation actuelle

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Nouvelle famille
En attente Staphylococcus Planococcus Famille nest pas encore dfinie

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Staphylococcus, 2002
Staphylococcus 36 espces 9 sous-espces Critres Taux hybridation ADN/ADN Stabilit des hybrides Caractres phnotypiques
Ensemble des taxonomistes
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6 groupes
Groupe Groupe Groupe Groupe Groupe Groupe S. S. S. S. S. S. epidermidis saprophyticus simulans sciuri hyicus intermedius
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2.2.2. Six groupes

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Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus epidermidis capitis warneri saccharolyticus caprae hominis haemolyticus pasteuri
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Staphylococcus saprophyticus
Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus saprophyticus cohnii xylosus gallinarum kloosii equorum arlettae
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Staphylococcus simulans
Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus simulans carnosus felis piscifermentans

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Staphylococcus sciuri
Staphylococcus sciuri Staphylococcus lentus Staphylococcus vitulinus

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Staphylococcus hyicus
Staphylococcus hyicus Staphylococcus chromogenes

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Staphylococcus intermedius
Staphylococcus intermedius Staphylococcus delphini Staphylococcus schleiferi

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2.2.3. Non classes en groupe

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Anciennes espces
Staphylococcus aureus Staphylococcus auricularis Staphylococcus lugdunensis

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Nouvelles espces
Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus muscae lutrae succinus condimenti fleurettii pettenkoferi
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Site web

List of Bacterial Names with Standing in Nomenclature http://www.bacterio.cict.fr Auteur: JP. Euzby

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3. Caractres bactriologiques

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3.1. Morphologiques

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Forme
Cocci Gram (+) Forme arrondie Groups en Amas, grappe de raisin Intra/extra leucocytaires

Appendices
Asporuls Immobiles Capsule, glycocalyx

Glycocalyx dans un tissu

3.2. Culturaux

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3.2.1. Milieux de culture

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3.2.1.1. Gloses

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Gloses non slectives

Glose ordinaire Mueller Hinton: MH Trypticase soja Mannitol/mobilit

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Gloses slectives
Chapman Agar NaCl 75g/l Mannitol Indicateur pH: rouge phnol Baird Parker
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Gloses didentification
Plasma de lapin Mannitol/mobilit Viande-foie: VF Glose au sang frais Glose ADN .

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3.2.1.2. Bouillons

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Bouillons non slectifs


Bouillon ordinaire Bouillon cur cervelle Bouillon trypticase soja

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Bouillons slectifs
Bouillon sal

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3.2.2. Conditions dincubation

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Atmosphre dincubation
Arobie Humide T optimale: +35C Culture (+) entre 20C et 40C Certaines souches exigent du CO2

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Dure dincubation
Dlai moyen 18H 24H Majorit des espces Dlia 36H S. aureus subsp. anaerobius S. saccharolyticus, S. auricularis S. equorum, S. vitulinus S. lentus
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3.2.3. Colonies

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3.2.3.1. Aspects des colonies

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Colonies de type S
Lisses Bombes Brillantes Rgulires Diamtre sur glose = 1-3 mm

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Particularits
Colonies de petite taille Staphylococcus auricularis Staphylococcus capitis Colonies de taille variable S. xylosus, S. sciuri S. lugdunensis
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Pigmentation
Pigments Jaune or: S. aureus Blanchtre: S. epidermidis tudie sur glose ordinaire, MH Riches en acides gras, lait Incubation prolonge T ambiante

3.2.3.2. Caractre hmolytique

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3.2.3.2.1. S. aureus

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Milieux dtude
Gloses MH, trypticase soja Ordinaire Sang Humain Lapin, mouton, buf, cheval Staphylolysines responsables: , , ,
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Staphylolysine
Glose au sang 5% Sang de Mouton, lapin, buf Sang dfibrin et lav Incubation +35C Large zone hmolyse complte Hmolysine produite par 95% souches
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Staphylolysine
Glose au sang 5% Sang de Mouton, buf, humain Sang dfibrin et lav Incubation +35C Hmolyse totale mais faible

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Glose au sang 5% Sang de Mouton, buf, humain, lapin , cheval Sang dfibrin et lav Incubation +35C; puis +4C Zone dhmolyse Incomplte, faible +35C Totale aprs incubation supplmentaire +4C hot cold haemolysis
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Staphylolysine

3.2.3.2.2. Autres espces

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Donnes incompltes
Type dhmolyse Totale Partielle Type de sang Humain, mouton Buf, lapin Staphylolysines responsables: mal connues
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Espces hmolytiques
Production 100% souches S. haemolyticus, S. epidermidis S. capitis, S. simulans Production variable S. cohnii, S. intermedius, S. caprae S. kloosii, S. equorum, S. gallinarum S. lugdunensis, S. delphini, S. schleiferi
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Production varie selon type de sang

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3.2.4. Culture en bouillon

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Aspect du bouillon
Trouble homogne Agitation ondes moires

3.3. Biochimiques

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3.3.1. Caractres dorientation

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Catalase
Cest une oxydorductase Prsente chez procaryotes Rle: R la bactricidie par le peroxyde dhydrogne (H2O2) Dgrade leau oxygne (H2O2) Non recherche partir glose au sang
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Catalase positive

Oxydase
Cytochromes = pigments hmoprotiques Prsents plupart cellules vivantes Bactries AAF +++ Rle dans mtabolismes doxydorduction Cytochromes c: dtects par test oxydase

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Fermentation des sucres


Glucose Glycrol (arobiose) Maltose D-Trhalose Mannitol Saccharose

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Autres caractres
Sensible Lysostaphine 200 g/ml Lysozyme Arobie anarobie facultatif

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3.4. Antigniques

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3.4.1. Antignes structuraux

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Protine A
Se lie au fragment Fc des Ig Inhibe lopsonophagosome Recherche lors diagnostic rapide Rle dans adhsion Cellule cutane Endothlium vasculaire Critre taxonomique
Associe au peptidoglycane

Acides teichoques, lipoteichoques


Colonisations des cellules Ncrose Fivre Thrombopnie

Capsule
Capsule Produite par 90% souches S. aureus Il existe 11 srotypes capsulaires Srotypes 1 et 2 Sont les plus virulents Scrtes une capsule paisse, visible Rle Controvers dans la virulence Induisent des anticorps protecteurs

Glycocalyx
Composition Exopolysaccharides Englobant la bactrie Rle Forme un biofilm Permet survie germe au site colonisation

Antignes de surface
Protine A Adhsines Acides teichoques, lipoteichoques Antignes de: capsule, glycocalyx
Adhsines = protines de liaison la fibronectine, au fibrinogne, au collagne

Protine de liaison au fibrinogne


Dnomination Clumping factor Coagulase lie Rle Agrge bactries en prsence plasma Facteur de virulence sur les plaies et infections sur corps trangers Nom scientifique: Clfa

Autres protines de liaison


Liaison la fibronectine: FnBP Caillots plasmatiques Biomatriaux: cathters, prothses Liaison au collagne: Cna

3.4.2. Enzymes

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Coagulase libre
Protine extracellulaire Se lie la prothrombine Forme un complexe = staphylothrombine Mcanisme daction Staphylothrombine active la thrombine Fibrinogne est transform en fibrine Do: caillots, thrombophlbites
Pas dargument formel rle dans virulence

Coagulase (+)

Coagulase (-)

Staphylokinase
Mcanisme daction Active le plasminogne Dissout les caillots des thrombophlbites Formation micro-embols dissmination Synonyme = fibrinolvysine

Lipases (FAME)
FAME: Faty Acid Modifying Enzyme Produite par 90% S. aureus Facteur de virulence dans les abcs Mcanismes daction Modifie les lipides antibactriens et les acides gras bactricides de la peau Favorise survie des staphylocoques Types: estrases, lipases

Dsoxyribonuclase
Proprits Nuclase thermostable Activit endo et exonuclasique Dtruit ADN et ARN Production variable: espces et souches

Hyaluronidase
Hydrolyse le tissu conjonctif Favorise la diffusion de linfection Dans les tissus

Sidrophores
Nature Composs de faible poids molculaire Captent/transportent fer dans bactrie Rle du fer pour bactries Essentiel croissance bactrienne Or peu disponible dans organisme humain Homme se dfend en fer disponible

Mcanisme du fer
Transferrine et lactoferrine Se lient au fer Diminuent sa concentration locale Moyen de contournement par staphylocoque Exprime sa surface des rcepteurs de la transferrine Qui se complexent au fer des cellules Fer est alors transfr dans bactrie

3.4.3. Toxines

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3.4.3.1. A activit membranaire

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Toxine
Forme des pores central et/ou petits Sortie contenu cellule Entre cations monovalents Consquences Mort cellulaire Scrtion cytokines choc septique
Facteur majeur de virulence

Toxine
Cest une sphingomylinase Altre membranes riches en lipides Dtecte grce action sur GR mouton Souches productrices Souches animales Lors mammites bovines +++ Pas chez souches humaines en gnral

Toxine
Petit peptide Produit par majorit Souches de S. aureus Rle dans virulence: inconnu

3.4.3.2. Leucocidines

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Classification
Leucocidine de Panton-Valentine Hmolysine Leucocidine ED Leucocidine bovine LukM Une toxine de S. intermedius Famille de toxines synergohymnotropes

Composition
Ce sont des protines Constitues de 2 parties non associes Agissant en synergie sur les membranes Des cellules cibles

Cellules cibles
Polynuclaires Monocytes Macrophages rythrocytes (hmolysine )

Mcanisme daction
Mcanisme Formation canaux membranaires (pores) Entrer de cations divalents par ceux-ci Causes de lextension des lsions Inhibition des fonctions phagocytaires Destruction des granulocytes
Responsables des lsions dermoncrotiques

3.4.3.3. Entrotoxines

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Classification
Entrotoxine classiques (1960) A,B C1, C2, C3 D, E Entrotoxines rcentes Variantes toxine C de S. aureus H, J, G, I, M, N, O, K, L, Q Ce sont des protines

Implication en pathologie
Diarrhe simple Entrocolites ncrosantes Toxi-infection alimentaire isole, collective

3.4.3.4. Autres toxines

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Exfoliatines
Impliques dans Peau bouillante ruption scarlatiniformes Types A et B

Toxines du choc toxique staphylococcique


TSST Choc toxique menstruel Choc toxique non menstruel Souches Humaines, bovines, ovines Espces varies; coagulase (+) ou (-)

Activit super antignique


Existe avec Entrotoxines TSST Super antignes Molcules provoquant Une activation polyclonale Des lymphocytes T V Affinit pour Ag classe II du CMH II

Rsum sur les toxines


Toxines sont produites par S. aureus et autres espces Souches humaines et non humaines Souches lors de portage ou dinfection Supports gntiques des toxines Gne chromosomiques Gnes plasmidiques

3.5. Sensibilit antibiotiques

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Rsistance aux antibiotiques


Souches mecA (+) R pnicilline, mticilline R associe: ofloxacine, rythro, kana Souches MODSA: Modified S. aureus Bas n de R mticilline Par modification PLP normales Pnicillinase: oxacillinase, mticillinase
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Rsistance aux antiseptiques


Gnes qac Origine plasmidique Nombreux et varis Spectre de la rsistance Mtaux lourds Antiseptiques Gnes qac pnicillinases
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4. Epidmiologie

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4.1. Habitat

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Homme
Peau Aisselles Mains Prine Muqueuses Nez Intestin Voies gnitales Flore commensale peau et muqueuse

Environnement
Eaux Aliments Sols Bactrie commune homme, animal, volaille

4.2. Transmission

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Modes
Contact direct Peau Muqueuses Contact avec objets souills, salive

Voies
Arienne Digestive Sexuelle Cutane Iatrogne

4.3. Staphylococcus aureus

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pidmies frquentes
Zone de survenue Services de ranimation Nonatologie, crches Communaut Types Infections nosocomiales Toxi-infection alimentaire

Staphylococcus aureus Muqueuse nasale: 10-40% portage Muqueuse vaginale: 8-15% portage Prine Autres espces S. capitis: cuir chevelu, oreille S. epidermidis, haemolyticus, hominis: front, visage S. epidermidis: trs disperse peau, mqse
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Rpartition des espces

5. Staphylococcies

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5.1. Physiopathologie gnrale


Staphylococcus aureus

5.1.1. Rponse inflammatoire

Production de cytokines
Facteurs bactriens inducteurs Exopolysaccharides capsulaires Peptidoglycane Protines de membrane Exoprotines Cellules productrices humaines Monocytes, macrophages Polynuclaires neutrophiles

Support de linflammation
Cytokines IL1, IL-6, IL-8 TNF- Autres molcules Super antignes bactriens Leucocidine de Panton-Valentine Petits peptides cationiques humains

5.1.2. Rgulation des facteurs de virulence

Facteurs de virulence
Exoprotines Protines de surface Toxines, enzymes Capsule, glycocalyx

Tous les antignes de S. aureus

Systmes rgulateurs
Systme agr : accessory gene regulator Rgulateur global Structur en 2 composantes Agit comme un systme quorum sensing Autres systmes rgulateurs staphylococcal accessory regulator: sar extracellular protein regulator: xpr S. aureus exoprotein expression: sae

Mcanisme gnral
Rpression dbut phase croissance Protine A Coagulase Stimulation phase exponentielle croissance Hmolysines, leucocidines Entrotoxines, exfoliatines, TSST Srine protase, DNAse

Systme agr
Faible densit bactrienne Systme agr non activ ce qui Facilite expression facteurs dadhrence Do la colonisation Forte densit bactrienne: systme agr Diminue expression facteurs dadhsion Stimule expression facteurs dinvasion et de dissmination Systme agr agit comme un quorum sensor

5.1.3. Apoptose cellule pithliale

Sites de lapoptose
Phagocytes Macrophages Monocytes Autres Ayant ingr Staphylococcus spp.

Mcanisme
Adhsion Ingestion fibronectine (FnBP) Libration dans cytoplasme cellulaire Survie bactrie + multiplication Consquences Modification morphologie cellule Fragmentation ADN cellule Apparition s/population colonies naines Small colony variants: SCVs

5.1.4. Facteurs de virulence-AB

Synthse toxine-
Stimule par Mticilline +++ Fluoroquinolones Inhibe par Clindamycine Macrolides Aminosides

Synthse TSST
Molcules suivantes Clindamycine flucloxacilline Gentamicine Inhibent sa synthse

Libration fragments de paroi


Augmente par -lactamines Azithromycine: bactricide intra PNN Non augmente par rythromycine Clindamycine Gentamicine

Rle du biofilm
Antibiotiques peu efficace prsence biofilm Glycopeptides Pfloxacine Insensibles prsence biofilm Rifampicine Autres molcules

Production de sidrophores
Augmente par Amikacine En milieu pauvre en fer Diminue par lassociation Mticilline Amikacine

5.2. Tableaux cliniques

Infections suppuratives
Peau et tissus mous Tractus respiratoire Systme nerveux central Tractus urinaire Systme vasculaire Muscle et les os

Toxmies
Pneumonie ncrosante staphylococcique Syndrome choc toxique staphylococcique Scarlatine staphylococcique Syndrome de la peau bouillante Imptigo bulleux; syndrome de Reiter nn Toxi-infections alimentaires Entrocolite ncrosante pseudo-membrane Syndrome de Kawasaki

Infections staphylocoques non aureus


Angine Otite Sinusite Mastodite Conjonctivite Septicmies

6. Diagnostic bactriologique

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6.1. Produits pathologiques

Produits pathologiques usuels


Scrtions pharynges Sang, pus, LCR Liquides de ponction Scrtions gnitales, urines Aliments

Examen microscopique
Cocci Gram (+) Groups en amas; grappe raisin Capsuls: non visible au MO Asporuls

6.2. Dtection rapide dans produits

Recherche de la DNAse
Hmoculture (+) Chauffer 2 ml bouillon: 15 bullition Incuber 2H +37C Dtecte aussi staphylocoques non aureus Rsultat Sensibilit = 85% Spcificit = 93% Alternative: test ELISA

Espces DNAse (+)


Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureus caprae capitis carnosus hyicus intermedius simulans lutrae schleiferi lugdunensis

Recherche coagulase libre


Hmoculture (+) 100 l bouillon dans un tube Ajouter 0,5 ml plasma lapin Incuber 2H +37C Dtecte surtout S. aureus Rsultat Sensibilit = 92% Spcificit = 100%

Test Rapidec staph bio Mrieux


Hmoculture (+) Centrifuger bouillon pendant 5 50 l surnageant + ractif Incuber 2H +35C Lecture fluorescence sous ultra violet Rsultat Sensibilit = 98% Spcificit = 100% Dtecte S. aureus; S. schleiferi: faux (+)

Culture sur milieu chromogne


Milieu CHROMagar Staph aureus Incubation +37C pendant 24 partir de produits polymicrobiens Rsultats Pigmentation rose des colonies Sensibilit = 98,5% Spcificit = 97%

Biologie molculaire
Sondes ARNr, ADN PCR pralable Produits pathologiques LCR, sang (hmoculture) Liquide pritonal Sensibilit = 100%; spcificit = 96%

Dtection dans les aliments


Milieu de Baird-Parker-RPF Rabbit Plasma Fibrinogen Test Incubation de 24H +37C Lecture Activit coagulase halo opaque Autour des colonies Sensibilit non value

6.3. Culture

6.3.1. Isolement - Identification

Ensemencement
MH, TS, GO Avec ou sans sang Avec ou sans acide nalidixique Bouillons Cur cervelle, TS Ordinaire Chapman, CHROMagar, Baird Parker

Caractre dorientation
Mtabolisme Catalase (+) Oxydase (-) Glucose ferment Glycrol ferment Rsistance Lysostaphine et lysozyme Nitrofuranes, bacitracine, O/129 Cocci Gram (+) en amas

Identification de lespce
Coagulase libre Coagulase lie ou Clumping factor Protine A DNAse thermostable Antignes de capsule

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Tests complmentaires
Rsistance la novobiocine -glucosidase, -galactosidase, glucuronidase ODC, sensibilit polymyxine B Test synergie dhmolyse Biologie molculaire Galerie API pou staph non aureus
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Staphylocoques coagulase (+)


Staphylococcus aureus aureus aureus anaerobius intermedius hyicus delphini lutrae schleiferi coagulans PG HL CF DNA TH + + + + + + + + d + + + + + + + + + + -

PG: pigment; HL: hmolyse; CF: clumping factor; TH: trhalose

Staphylococcus aureus
Pigment jaune-or Hmolyse (+) Mannitol ferment D-Trhalose acidifi Maltose acidifi Prsence de protine A Coagulase (+) Clumping factor (+) 04/05/2012 DNAse (+)

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6.3.2. Antibiogramme

Molcules tester
-lactamines Aminosides MLS Fluoroquinolones Cyclines Rifampicine Cotrimoxazole Glycopeptides
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Tests systmatiques
Rsistance la mticilline Tester loxacilline Tests de Biologie molculaire Scrtion de la pnicillinase
Souches mti-R; souches mti-S

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6.4. Dtection des toxines

Chez les souches isoles


Toxines Procdure Dtection des toxines Identification des toxines Tests utiliss ELISA, latex Cytomtrie de flux Inoculation souriceau nn Gnes tox: PCR + hybridation

Dtection dans les aliments


ELISA Latex Inoculation souriceau nn

6.5. Diagnostic srologique

Anticorps recherchs
Anti Anti Anti Anti Anti TSST toxine capsulaire entrotoxines acide -ribitol teichoque Intrt faible

Tests disponibles

ELISA

7. lments de thrapeutique

Porteurs sains de SARM


Dtection systmatique chez malades Soins intensifs Chirurgie cardiovasculaire Hmodialyse Traitement Isolement gographique Mupirocine pommade nasale 2%

Infection svre souche mti-S


Association -lactamines (oxacilline ou cloxacilline) Aminoside Association Vancomycine Aminoside Autres: tenir compte pharmacologie AB
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Souches mti-R
Association Vancomycine + gentamycine Vancomycine + cotrimoxazole Vanco + rifampicine + ciprofloxacine Choix repose sur donnes ABG

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Nouvelles molcules
Oxazolidinones Linzolide (Zyvoxid) Molcules trs active Synergistine injectable Quinupristine ou Dalfopristine Nom commercial: Synercid Lipopeptide cyclique Daptomycine
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Prvention des SARM


Hygine individuelle et collective Isolement malades porteurs Lutte contre infections nosocomiales Hygine des aliments

Merci
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