Estructura del ADN

Estructura ARN/Comparación con ADN

FUNCIONES DE LOS ACIDOS NUCLÉICOS
´ ´ ´

Replicación: 1 ADN Transcripción: ADN

2 ADN ARNm

Traducción: ARNm/ARNr/ARNt Proteínas

Mutaciones Bacterianas Definición: cambio heredable en la secuencia de nucleótidos del genoma de un organismo Pueden ser: Inducidas o Espontáneas Se expresan raramente Se favorecen cuando se dan ventajas selectivas .

Mutaciones Bacterianas: Tipos Puntual: Transición: purina por purina o pirimidina por pirimidina (Ej.: A por G o C por T) Transversión: purina por pirimidina o viceversa Inserción/Delección Inversión .

Conjugación 3.Intercambio genético y recombinación ‡ Unidireccional: De donante a receptor ‡ Puede ser entre especies distintas ‡ Mecanismos: 1. Transformación 2. Transducción .

Streptococcus) .Transformación Definición: Transferencia de genes por incorporación ADN exógeno Factores que influyen: Tamaño. Haemophilus. concentración y estado del ADN Estado de Competencia del receptor (Bacillus. Neisseria.

Transformación ‡ Pasos .Adsorción del ADN .Capacidad fermentación .Resistencia antimicrobianos - .Penetración .Recombinación ‡ Características transformadas Antígenos .

Conjugación ‡ Definición: transferencia genética entre dos bacterias que requiere contacto físico celular ‡ Bacterias que intervienen: ² Donante ² Receptor Recipient Donor .

Plásmidos ‡ Definición: Elemento genético extracromosómico capaz de replicarse de forma autónoma .

Características de los Plásmidos ‡ Replicación autónoma ‡ Estabilidad ‡ Incompatibilidad ‡ Transferencia: ²Plásmidos conjugativos ²Plásmidos no conjugativos ‡ Integración (Episomas) ‡ Confieren distintas propiedades fenotípicas .

Conjugación en Gramnegativos .

Formación de pares efectivos 2.Conjugación en Gramnegativos 1. Transferencia de ADN í Origen de transferencia í Replicación cadenas ADN F+ F+ F+ F+ F+ FF+ F- .

Conjugación: Importancia ‡ Bacterias Gram íResistencia antimicrobianos íDiseminación rápida ‡ Bacterias Gram + íProducción de factores de adherencia íResistencia antimicrobianos .

Elementos Genéticos Transponibles ‡ Definición: Segmentos de ADN capaces de mudarse de una localización a otra ‡ Propiedades ² Movimiento al ´azarµ ² No poseen autorreplicación ² Transposición mediante recombinación específica ‡Transposasa .

Tipos de Elementos Transponibles ‡ Secuencias de Inserción (IS): Elementos que portan sólo los genes de transposición Transposasa GFEDCBA ABCDEFG ‡ Transposones (Tn): Elementos que portan otros genes además de los de transposición (IMPORTANTES en R) .

Transducción ‡ Definición: Transferencia de genes bacterianos a través de un bacteriófago ‡ Importancia ² Común en bacterias Gram+ ² Conversión lisogénica .

Estructura Fago Cabeza Collar contráctil Fibras Cola Placa basal .

Unión Irreversible 3. Contracción del collar 4. Adsorción 2. Inyección del ADN .Infección bacteriana por Fagos 1.

Ciclo Lítico de Multiplicación del Fago ‡ Eclipse ‡ Acumulación intracelular ‡ Lisis y liberación .

Ciclo Lisogénico de Multiplicación del Fago ‡ Integración (Profago) ‡ Replicación simultánea .

Transducción Generalizada Ciclos líticos Cualquier gen del donante tiene la misma probabilidad de ser transferido .

La transformación bacteriana en Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928) Rugosa Muerte por neumonía Cepa resistente Lisa No muere Muere 23 .

¿Cuál es el Principio transformante? Principio Rugosa Lisa 24 .

Colin MacLeod El elemento transformante es el DNA (1944) Maclyn McCarty Oswald Avery Sólo DNA produce transformación 25 .

Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase con fagos (1952) Tema 6: Estructura y replicación del material genético Bacteriófago T4 El DNA es el material infeccioso 26 .

Componentes de los ácidos nucleicos adenina timina guanina citosina 27 .

Reglas de Chargaff 1. 3. A=T G=C 28 . Proporción de purinas = Proporción de pirimidinas A+G=C+T 2.

Watson y F. Crick resuelven la estructura tridimensional del DNA (Nature 171: 737737738) Watson y yo hemos encontrado el secreto de la vida 29 .1953. Año culminante: J.

Año culminante: Dos líneas de evidencia: ‡Reglas de Chargaff ‡Fotografías de difracción de rayos X 30 .1953.

Significado reglas de Chargaff Complementariedad de las bases 31 .

Difracción de rayos X Hemoglobina Linus Pauling 32 .

Franklin Crick 33 .Tema 6: Estructura y replicación X material Interpretación del patrón difracción de rayos deldel DNA genético Rosalind E.

La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las cadenas 34 . Watson y F. Crick Concluyen: La estructura del DNA es una doble hélice.Modelo en metal del DNA J. formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas).

Desnaturalización del DNA ‡Separación de las dos hebras por calor ‡Una mayor proporción G-C tiene una mayor temperatura de desnaturalización (¶fusión·) 100 Porcentaje G + C 80 60 40 20 70 80 90 100 110 35 Temperatura de fusión (desnaturalización) .

G.T.C) ‡El mecanismo de replicación exacta de los genes ‡La naturaleza química de las mutaciones ‡Por qué la mutación. la recombinación y la expresión génica son fenómenos separables a nivel molecular 36 .La estructura del DNA suministra una explicación asombrosamente simple del fenómeno de la herencia La estructura explica: ‡La naturaleza de la secuencia lineal de los genes (información digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monómeros A.

Esencial a la relación íntima entre estructura molecular y función genética del DNA es el concepto de molde La complementariedad de las bases nitrogenadas permite que la secuencia de una cadena sencilla de DNA actúe como un molde para la formación de una copia complementaria de DNA (replicación) o de mRNA (transcripción) 37 .

Esto es para mí la prueba verdadera de la existencia de Dios Salvador Dalí Antes pensábamos que nuestro futuro estaba en las estrellas. Ahora sabemos que está en nuestros genes.Y ahora las declaraciones de Watson y Crick sobre el ADN. James Watson 38 .

Replicación del DNA 39 .

40 .25 de Abril 1953 It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material.

Posibles modelos de replicación Tema 6: Estructura y replicación del material genético 41 .

Replicación del DNA Tema 6: Estructura y replicación del material genético ‡Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una nueva cadena ‡El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958) demuestra que la replicación es semiconservativa Mathew Meselson Frank Stahl 42 .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético 43 .

mecanismos de reparación adicionales la reducen hasta 10-10 44 . Sustituye bases mal emparejadas (10-5) por correctas (10-7). coli ‡DNA polimerasa I (rellena huecos y repara) ‡DNA polimerasa II y III (función principal en la síntesis) ‡Añade bases en ambas cadenas en la dirección 5· p 3· ‡Requiere un 3· OH final ‡Eucariotas ‡5 polimerasas ‡E y F principal en replicación ‡H. I y K exonucleasas ‡Corrección de pruebas: actividad 3· p 5· exonucleotídica.Replicación del DNA ‡Enzimas que sintetizan (replican) el DNA ‡E.

Las polimerasas conocidas añaden nucleótidos solamente en la dirección 5· p 3· Tema 6: Estructura y replicación del material genético 3· 5· 45 .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético 46 .

¿Por qué no hay una enzima que polimerice en la dirección 3 -> 5? No funcionaría la corrección de errores por falta de un trifosfato que suministre la energía de enlace covalente azúcar-fosfato 47 .

ADICIÓN 5¶ 3¶ 48 .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético P P P 5 P P P P P P P P P 3 P P P + H2O P P P P P P P P P P P P OH P P P P OH OH OH 49 .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético ADICIÓN 3¶ 5¶ (HIPOTÉTICA) 50 .

P P P P P P P P P P OH 51 3 5 P P + H2O P P P P P P P P ADICIÓN 3¶ 5¶ (HIPOTÉTICA) P P P P OH OH P P OH P P P P P P P P P P P P .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético CORRECCIÓN DE ERRORES 52 .

P P P 5 P P P P P P P P P 3 P P P + H2O P P P P P P P P P P P P P P P OH ADICIÓN 5¶ 3¶ 53 P OH OH OH .

P P P P P P P P 3 5 ADICIÓN 3¶ 5¶ (HIPOTÈTICA) OH 54 Tema 6: Estructura y replicación del material genético P OH P P P P P P P P .

enlace fosfodiéster) 55 . ‡Fragmento de Okazaki por DNA pol III (1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas) ‡Pol I elimina cebador 3· -> 5· y llena huecos (gap) ‡Ligación (DNA ligasa.Replicación del DNA (2) Tema 6: Estructura y replicación del material genético ‡Replicación: continua (cadena adelantada. cebador sólo inicio) y discontinua (cadena retrasada) ‡Discontinua ‡Cebador (pequeño RNA 2-60 nucleótidos añadido por enzima primasa o RNA pol que provee 3· OH.

56 .

Tema 6: Estructura y replicación del material genético 57 .

ssb (Unión Y.Replicación del DNA (3) El replisoma: complejo enzimático de la replicación que coordina la síntesis de las dos cadenas. maquinaria molecular ‡Dímero de la DNA pol III (núcleos catalíticos) ‡Primosoma: formado por dos enzimas ‡Primasa ‡Helicasa (desenrolla el DNA) ‡Proteína de unión a cadena sencilla. estabiliza el DNA de cadena sencilla) ‡Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena) y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA ligasa -> Relajación del superenrollamiento 58 .

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria 59 .

60 .

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva 61 .

El replisoma: una Tema 6: Estructura y replicación del material genético maquinaria de replicación extraordinaria 62 .

Topoisomerasas 63 .

Replicación del DNA (4) Tema 6: Estructura y replicación del material enético ‡Origen de replicación: ‡Secuencia reconocida (Ori C en E. Varios orígenes en eucariotas ‡La replicación es bidireccional Horquilla replicación 64 . coli) por proteínas iniciadoras.

La replicación es bidireccional 65 .En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en levaduras y 60000 en mamíferos). Cada unidad de replicación es un replicón.

EXPRESIÓN GÉNICA .

« Conocer los factores de transcripción y su rol en la expresión génica. . « Entender la relación entre los factores de transcripción y los procesos de transducción de señales. « Entender la regulación de la expresión génica y las moléculas envueltas.OBJETIVOS ´ Al finalizar el estudiante podrá: « Conocer las diversas fases de la expresión génica.

EXPRESIÓN GÉNICA ´ Transcripción « « « Iniciación Extension Terminación Iniciación Extensión Terminación ´ Traducción « « « .

Complejo pre-iniciador ¹ Complejo abierto « Extensión ² Razón de 20 a 30 nucleotidos/segundo « Terminación ² RNA polimerasa se disocia del DNA .CICLO DE TRANSCRIPCIÓN ´ Síntesis de RNA mensajero « Iniciación ² RNA ¹ polimerasa localiza y se une al cromosoma.

FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN ´ Sistema de regulación de genes « Procariotas ² Señales del ambiente ¹ ¹ Temperatura Concentración de nutrientes « Eucariotas ² Regulación genética ¹ Factores de transcripción ° 30% genoma humano .

REGIONES PROMOTORAS ´ ´ Región del DNA que regula la expresión del gen. . depende de: « « las secuencias reguladoras Concentración de los factores de transcripción. Clasificación « De acuerdo a su función ² Promotores fuertes ¹ Producto es abundante Producto es raro o no abundante ² Promotores débiles ¹ ´ El nivel de expresión varia de célula a célula.

´core regionµ sobrelapa el codón inicial del gen. Región que precede a los codones del gen. Posee secuencias conservadas ² TATA Box ¹ ¹ ¹ ´ Promotor de la Pol II « « TATAAAA 30 pb al frente de la secuencia iniciadora (TAC) Equivale al ´Pribnow boxµ de los procariotas ² Región Iniciadora . 100 pares de bases antes del codón inicial.REGIONES PROMOTORAS ´ Promotor de la Pol I « « « Región que precede a los codones del gen.

¹ ² tRNA ² 5S ¹ rRNA C Box ¹ Centro de la región codificadora .REGIONES PROMOTORAS ´ Promotor de la Pol III « Dos tipos A Box ¹ B Box ¹ 15 pb a partir del terminal 5·.

REGIONES PROMOTORAS .

FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN Factor ´ Generales « « « No. subunida des Función « GTFs Altamente conservados TATA Box ²Binding Protein ² TFIID Tabla 15-1 Asignada TFIIA TFIIB TFIID TBP TFIIE TFIIF TFIIH Pol II TOTAL 3 1 12 1 2 2 9 12 42 Estabiliza unión de TBP y TFIIB Selecciona sitio de iniciación Recluta la polimerasa II Interacciona con factores de regulación Reconoce el ³TATA Box´ Recluta TFIIH Une Pol II y TFIIB Desenrrolla el DNA del promotor Cataliza la síntesis de RNA .

.FACTORES DE RNA POL II INICIACIÓN ´ Formación del complejo preiniciador « TFIID ² Se (TBP + TAFs) unen al ´TATA Boxµ « TFIIA ² Estabiliza el complejo TFIID-TATA Box ² Evita la unión de represores « TFIIB ² Se ¹ une al TBP y DNA al frente y después del ´TATA boxµ Determina el tamaño entre el ´TATA boxµ y la secuencia iniciadora.

FACTORES DE RNA POL II ´ RNA polimerasa II .3· y 3· .5· ² Adenosina trifosfatasa dependiente de DNA ² Actividad de kinasa ² Reparar el DNA ´ TFIIE y TFIIH « « .TFIIF « « Estabiliza la interacción de la RNA Polimerasa II con el TFIIB y TBP El TFIIF previene que la RNA Polimerasa II se una a lugares no promotores Estabiliza el complejo proteína y DNA TFIIH ² Helicasa 5·.

Promotores de genes snRNA (small nuclear RNA) ´ Existen sistemas auxiliares de transcripción « « .INICIACIÓN (CONT) ´ Hay tres sistemas clásicos de transcripción « « « RNA Pol I RNA Pol II RNA Pol III Requieren del uso de TBP aunque carecen de TATA Box en su promotor.

INICIACIÓN (CONT) .

EXTENSIÓN Comienza con el proceso de limpieza del promotor ´ promoter clearenceµ ´ Asociado a cambios estructurales en la RNA polimerasa ´ Regulado por factores de extensión ´ Reacción general ´ « (NMP)n + NTP (NMP)n+1 + PP ´ Proceso estable .TRANSCRIPCIÓN .

TRANSCRIPCIÓN TERMINACIÓN ´ Mediada por factores de terminación « « Interaccionan con la RNA polimerasa Polimerasa posee tres opciones .

ELEMENTOS DE REGULACIÓN ´ Promotores proximales « « « « Proteínas reguladoras TATA box ² RNA Pol II CCAAT box ² Herpes Virus GGGCGG ² ´house keeping genesµ .

ELEMENTOS REGULADORES IDENTIFICACION Identificacion de Secuencias reguladoras del Promotor -Delecion o Mutacion -Gen Reportero .CAT -CCAAT -GCGCG -TATA .

Localización « « « Al principio En el medio Al final ´ ´ ´ Funcionan en cualquier orientación No se encuentran asociados a todos los genes.ENHANCERS ´ ´ ´ Responden a estrés celular Aumenta la razón de iniciación del promotor. Responsable de un efecto sinergístico .

ENHANCERS .

Niveles de regulación .

Regulación de la expresión génica Genes constitutivos y genes regulados No todos los genes se expresan simultáneamente ni al mismo nivel Genes constitutivos: se expresan al mismo nivel independientemente de las condiciones ambientales Genes regulados: se expresan a distintos niveles (o no se expresan) dependiendo de las condiciones .

Expresión génica en procariotas: ARNs policistrónicos

Regulación de la expresión génica en procariotas El operón

Regulación de la expresión de los genes estructurales

Operón lac: control negativo inducible lac: .

Operón lac: control negativo inducible lac: .

Operón lac: control positivo inducible lac: .

Operón trp: control negativo reprimible trp: .

Niveles de regulación en eucariotas .

‡Estas controlan la estructura de la cromatina y la tasa de transcripción reguladores .Regulación de la expresión génica en eucariotas Genes monocistrónicos La iniciación de la transcripción en eucariotas requiere: ‡Factores de transcripción generales que se unen al promotor ‡Factores de transcripción reguladores activadores (mayoritariamente) o represores. que se unen a secuencias intensificadoras o silenciadoras que pueden actuar a gran distancia y en cualquier orientación.

Regulación de la expresión génica en eucariotas hélice-vueltahélice Dominios proteicos clásicos de unión a ADN cremallera de leu .

Selección del gen que se transcribe 2.Regulación de la expresión génica en eucariotas Regulación a nivel transcripcional. 1. Uso de promotores alternativos .Modificación de la tasa de expresión 3.

Niveles de regulación en eucariotas .

Regulación post-transcripcional post- ‡Modificación del extremo 3·: Poliadenilación y uso de secuencias de término alternativas ‡Splicing alternativo ‡Edición del RNA .

Regulación post-transcripcional postProcesamiento (splicing) alternativo .

Regulación post-transcripcional postProcesamiento (splicing) alternativo .

Regulación post-transcripcional postEdición del ARN .

Regulación transcripcional y post-transcripcional múltiple post- .

Niveles de regulación en eucariotas .

Regulación traduccional y post-traduccional post- ‡Silenciamiento de ARN ‡Velocidad de síntesis de proteínas ‡Velocidad de degradaciónse proteínas ‡Modificaciones postraduccionales ‡Destino diferencial .

Regulación traduccional y post-traduccional postsiARN .

Regulación epigenética (heredable) Metilación de citosina en islas CpG e Imprinting .

Regulación epigenética (heredable) AcetilaciónAcetilación-desacetilación de histonas .

inmunoglobulinas) c) Exclusión alélica por mecanismos desconocidos (ej.Exclusión alélica independiente del origen cromosómico (al azar) a) Exclusión alélica por Inactivación del cromosoma X b) Exclusión alélica por reordenamiento programado del DNA (ej.Exclusión alélica (expresión selectiva de uno de los alelos) Algunos genes expresan sólo el alelo paterno o sólo el alelo materno. pero no ambos.Exclusión alélica dependiente del origen cromosómico: imprinting genómico (impronta) . receptores olfativos) 2. El otro alelo es reprimido 1.

se han según la constante ley de la gravitación. a partir de una molécula helicoidal asombrosa. se han desarrollado y se están desarrollando. a partir desarrollado y se están desarrollando... de un comienzo tan sencillo. infinidad de infinidad de formas cada vez más bellas y formas cada vez más bellas y maravillosas maravillosas Charles Darwin Charles Darwin Tema 6: Estructura y replicación del material genético 111 ... que mientras este planeta ha ido girando que mientras este planeta ha ido girando según la constante ley de la gravitación. Hay grandeza en esta concepción de la vida...Hay grandeza en esta concepción de la vida.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful