Pembuatan Coomb`s Control Cells (CCC)

Oleh : Erlina Kusumastuti Faiz Mundzir A Febri Wulan Dari

Tujuan
Untuk mendapatkan Reagen Coomb`s Control Cells Positive

Dasar Teori
CCC adalah sel O normal Rh positif yang telah disensitisasi oleh Anti-D Ig G CCC digunakan untuk memastikan apakah prosedur kerja yang dilakukan pada Coomb`s Test benar atau tidak (untuk menghindari hasil negatif palsu pada Coomb`s Test ) CCC ditambahkan ke setiap hasil coomb`s test negatif , dan hasilnya harus positif setelah penambahan CCC.

Dasar Teori
Jika hasil tetap negatif menunjukkan coomb`s test tidak valid Negatif palsu dapat disebabkan oleh - Pencucian eritrosit sebelum penambahan serum coomb`s kurang sempurna - Salin terkontaminasi oleh protein/ globulin - Lupa menambahkan serum coomb`s - Reagen / serum coomb`s buruk

Prinsip
Anti-D Ig G diencerkan dan dilekatkan pada permukaan sel O normal 2-5% kemudian dilakukan pencucian dan dibuat suspensi sel 5%.

Alat
- Inkubator (waterbath) 37o C - Centrifuge - Mikroskop - Timer - Rak Tabung - Tabung reaksi ukuran 12 x 75mm - Pipet pasteur / pipet transfer - Botol semprot - Beaker glass ( gelas pembilas) - Wadah limbah

Bahan
1. Sel golongan darah O Rhesus positif normal 2 5 % 2. Anti-D IgG (monoclonal) 3. Coomb`s Serum ( A.H.G) 4. Saline (NaCl 0,9 %)

Prosedur
1. Titrasi Anti Rhesus (anti-D)
Anti-D Ig G adalah suatu antigen monoklonal yang bersifat sebagai antibodi inkomplit dan memiliki titer yang cukup tinggi Tujuan : Untuk mengetahui titer inkomplit Anti-D dan mendapatkan CCC yang ideal Titrasi terhadap anti-D dengan cara Double dilution (pengenceran berganda/serial) Nilai pengenceran anti-D (reaksi 2+) yang akan digunakan dalam pembuatan CCC

1. Titrasi anti Rhesus (anti-D)

Nomor tabung Pengenceran Saline (mL) 1 2 0,5 2 4 0,5 0,5 5 tts 3 8 0,5 dst.. 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 5 tts 4 16 0,5 5 32 0,5 6 64 0,5 7 128 0,5 8 256 0,5 9 512 0,5 10 1024 0,5

Anti-D (mL)
Suspensi sel O Rh Pos 2-5% * 0,5 ml = 10 tetes

0,5
0,5 5 tts buang 5 tts 5 tts

Kocok dengan baik

Ink 37oC 30 menit

Cuci 3 kali dengan saline

Supernatan dibuang

Baca hasil reaksi (makroskopik) dan catat gradasi aglutinasi

Putar 2000 rpm 20 detik

Kocok dengan baik

+ 2 tetes AHG

Pelaporan Akhir Titrasi

Contoh hasil titrasi :
Double dilution anti-D IgG Titer Antibodi Inkomplit 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024

4+

4+

4+

4+

3+s

3+

2+s

2+

1+

Hasil : Titer inkomplit anti-D adalah 512 Pengenceran anti-D yang akan digunakan untuk pembuatan reagensia CCC adalah 1/128 Untuk mendapatkan hasil pembuatan CCC yang baik (reaksi optimal 2+, anti-D IgG tersebut harus diencerkan terlebih dahulu hingga 128 kali

2. Teknik Pembuatan CCC

1 tetes Anti-D IgG 127 tetes saline 64 tetes sel gol O Rh Positif 5%

Kocok dengan baik

Ink 37oC 30 menit

Cuci 3-4 kali dengan saline

Reaksi Aglutinasi minimal 2+

Diuji dulu dengan Coomb`s Serum

Sedimen sel disuspensikan menjadi 5 % dalam saline

Catatan
Perlu diperhatikan keadaan reagen yang digunakan (expired date,kejernihan) dan cara kerja pembuatan yang sesuai dengan SOP Pada pembuatan CCC digunakan sel O normal dikarenakan pada permukaan sel O normal tidak memiliki antigen Sel O yang digunakan dengan konsentrasi 2-5% agar pengamatan mikroskop jelas