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Equipo 1 Ana Karen lvarez Velzquez Paula G. Valenzuela Ramrez Alan Garca Erick Elas Pedro Jos
PRCTICA
MANEJO DE DATOS
INTRODUCCIN
Cultivo bacteriano en medio lquido
Fase lag o de adaptacin: Metabolismo a nuevas condiciones ambientales. Abundancia de nutrientes. Fase exponencial o logartmica: Consumo de nutrientes. Fase estacionaria: Acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios.
Objetivo:
Manejar correctamente los datos generados en experimentos de crecimiento microbiano, as como datos de rendimiento de produccin y consumo de metabolitos.
Objetivos didcticos:
A travs del desarrollo de la metodologa propuesta, reafirmar los conocimientos adquiridos en otras asignaturas donde est involucrado el fenmeno de crecimiento bacteriano.
DATOS:
EN UN EXPERIMENTO DE CRECIMIENTO MICROBIANO ASOCIADO A PRODUCCIN DE CIDO LCTICO A PARTIR DE GLUCOSA SE COLECTARON LOS SIGUIENTES DATOS:
Tiempo (h) Densidad ptica 600 nm 0.010 0.015 0.023 0.050 0.090 0.164 0.250 0.362 0.460 0.541 0.610 0.724 0.850 0.881 Lectura de DNS Vol. de NaOH 0.1N para titular 50 mL de muestra (mL) 0.2 0.3 0.5 0.8 0.7 0.8 1.1 2.4 5.8 15.4 25.2 32.1 34.0 35.1
0.0 1.0 2.0 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 8.0 9.0
1.800 1.657 1.401 1.308 1.185 0.924 0.757 0.575 0.352 0.245 0.151 0.085 0.018 0.007
ACTIVIDADES
1. Construya las grficas de crecimiento microbiano y calcule la velocidad especfica de crecimiento () y el tiempo de duplicacin del microorganismo (t1/2).
Crecimiento Microbiano
1
0.9
0.8 0.7 Do(600) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
4
Tiempo (h)
10
N = No 2g
Llamando Td al tiempo de duplicacin y t al tiempo de cultivo transcurrido, la ecuacin anterior puede transformarse en la siguiente:
Sacando logaritmos:
Otra forma de representar la cintica es considerando el incremento en el nmero de clulas (dN) en un intervalo corto de tiempo (dt). En este caso, la ecuacin que describe la cintica es la siguiente:
= ln2/Td
Td= ln 2/
2 1 0 -1 0 Ln Do -2 -3
Ln DO vs T
10
-4
-5 ln DO= 0.5786 t 4.45 R2=0.925 Tiempo (h)
Velocidad especfica de crecimiento m = pendiente de la recta m= 0.5786 h-1 Tiempo de duplicacin T1/2 = In2/m T1/2 = 0.6931/0.5786=1.197h
2. Construya la grfica de concentracin de glucosa (mM) durante todo el experimento y diga la concentracin de glucosa inicial en porcentaje (% p/v).
Curva Patrn de glucosa
2
Lectura de DNS
20
50
0.716
1.723
Ejemplo de clculo para obtencin de la concentracin de glucosa a partir de los datos de la curva patrn.
[Glu cos a] DNS 0.0052 1.8 0.0052 52.023mM 0.0345 0.0345
Lectura DNS 1.8 1.657 1.401 1.308 1.185 0.924 0.757 0.575 0.352 0.245 0.151 0.085 0.018 0.007 Concentracin de glucosa (mM) 52.023 47.878 40.458 37.762 34.197 26.632 21.791 16.516 10.052 6.951 4.226 2.313 0.371 0.052
Concentracin de Glucosa
60
50
40 [Glucosa](mM)
30
20
10
0 0 1 2 3 4 5 Tiempo (h) 6 7 8 9 10
[52.023mmol][180mg/1mmol]=9364.14mg 9.36414g
[9.36414g/1000ml]x100=0.9364%p/v
3.
Construya la grfica de concentracin de cido lctico durante todo el experimento (mM) y diga el rendimiento final de la produccin de este metabolito con respecto a la fuente de carbono (g de c. lctico / g de glucosa).
Vol. de NaOH 0.1N
para titular 50mL de muestra (mL)
3.5
4.0 4.5 5.0
0.7
0.8 1.1 2.4
5.5
6.0 6.5 7.0 8.0 9.0
5.8
15.4 25.2 32.1 34.0 35.1
Grfico 5. Cambio de la concentracin de cido lctico con el tiempo durante todo el experimento.
Ejemplo de clculo para obtencin de la concentracin de cido lctico a partir de los ml de NaOH.
[ Ac.Lctico]
c. Lctico (mM)
0.4 0.6 1 1.6 1.4 1.6 2.2 4.8 11.6 30.8 50.4 64.2 68 70.2
c. Lctico %p/v
0.0036 0.0054 0.0090 0.0144 0.0126 0.0144 0.0198 0.0432 0.1044 0.2772 0.4536 0.5778 0.6120 0.6318
Rendimiento
0.0038 0.0057 0.0096 0.0153 0.0130 0.0154 0.0212 0.0462 0.1115 0.2962 0.4846 0.6173 0.6538 0.675
La produccin de cido lctico a partir de glucosa est asociada al crecimiento? Si, el cido lctico es uno de los productos del metabolismo de la glucosa, siempre y cuando se lleve a cabo bajo condiciones anaerobias. A mayor crecimiento de los microorganismos, mayor es la cantidad de cido lctico producido y por lo tanto, que podra cuantificarse, para relacionarse con el aumento en la poblacin de bacterias.
Obtencin de energa.
Sntesis de estructuras celulares. Al aumentar la poblacin de microorganismos, la concentracin de glucosa inicial disminuye. Prueba DNS mide la concentracin de azcares reductores.
Si. El metabolismo de glucosa en condiciones anaerobias produce cido lctico. El monitoreo de cido producido da idea del metabolismo de glucosa por parte de las bacterias.
CONSIDERACIONES FINALES
La dependencia lineal entre los valores medidos y la masa bacteriana solo se da en turbidimetra y nefelometra cuando se trabaja en la zona de muy baja densidad celular. Como la dispersin de la luz depende del dimetro, la forma y el ndice de refraccin de las partculas dispersantes, tambin de los componentes internos de la clula las relaciones entre los valores pticos y otras magnitudes ms directas como masa seca, contenido de nitrgeno o carbono son los siguientes:
= tasa de divisin (divisiones por hora), esta dada por = n / t = log N log N 0 / log 2 * (t t 0 ) Donde n = nmero de divisiones N = nmero de clulas despus de n divisiones N 0 = nmero inicial de clulas g = tiempo de generacin (tiempo necesario para un ciclo de divisin) definido por g = t / n = 1 / m = tasa de crecimiento, relacionada con el reciproco del tiempo de duplicacin o tiempo de generacin y la tasa de crecimiento m = ln 2 / g = * ln 2
Fundamentado en la reduccin de los grupos reductores con el reactivo de cido dinitrosalicilico (DNS). Los azucares reducen al cido dinitrosalicilico para la obtencin de amidas, mientras que el aldehdo es oxidado. No todos los azucares producen la misma intensidad de color, por lo tanto se hace una curva patrn para cada azcar a analizar. Esta prueba se basa en la colorimetra.
de acidez Conservador En cosmticos como alternativa al uso de glicerina como suavizante Materia prima para sntesis orgnica