Monitoria de Bioqumica 2005/2

RADICAIS LIVRES

Frederico B. Ribeiro AD2010

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HISTRICO
1969 - McKord and Fridovich:
Descoberta da Superxido dismutase e sugesto da existncia de superxido endgeno

1989 - Halliwell and Gutteridge:

Surge a definio atualmente aceita para radicais livres (RLs)

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DEFINIO
Molcula que possui um ou mais eltrons mpares (no-pareados) em sua rbita externa,...

Molcula estvel

RADICAL LIVRE

Espao vazio

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DEFINIO
...sendo uma molcula altamente instvel, tendo uma vida mdia muito curta (medida em microssegundos) e tentando parear-se a qualquer preo (atravs do paramagnetismo), retirando eltrons, assim, de molculas estveis... Assim, trata-se de uma molcula destrutiva!!!

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DEFINIO
Representao dos orbitais mais externos:
RADICAL LIVRE MOLCULA ESTVEL

composto normal:

ESTVEL

MOLCULA INSTVEL

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O NOME EST CERTO???

Na verdade, RADICAL LIVRE no o termo ideal para
designar esses agentes reativos, pois alguns deles no apresentam eltrons desemparelhados em sua ltima camada. Como em sua maioria so derivados do metabolismo do O2, costuma-se utilizar o termo espcies reativas do metabolismo do oxignio (ERMO) para se referir a eles.

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ERMOs

ERMOs & Radicais livres:

perxido de hidrognio (H2O2) cido hipocloroso (HClO) oznio (O3) oxignio singlet (1O2) + REATIVO, envolvido na defesa contra a infeco

superxido (O2 -) + COMUM

radical hidroxil (OH )

peroxil (ROO ) alcoxil (RO )

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DE ONDE VM???
FONTES EXGENAS:
herbicidas; antibiticos; poluentes do ar; raios X; raios ultravioleta; cigarro; lcool; alimentos.

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FONTES ENDGENAS:

DE ONDE VM???

So produzidos em organismos AERBIOS tanto em situaes NORMAIS quanto PATOLGICAS

Enzima xantina desidrogenase/oxidase

Relacionada com a produo de cido rico (endotlio de capilares da maioria dos tecidos)

Citocromo P-450
Relacionada com a ao antibactericida e com a fosforilao no-oxidativa de eltrons (principalmente na membrana do RE do hepatcito)

CADEIA RESPIRATRIA
ENERGIA

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O OXIGNIO
SEM ELE: PELO METABOLISMO ANAERBIO, O SALDO FINAL DE UMA MOLCULA DE GLICOSE DE 2ATP COM ELE: PELO METABOLISMO AERBIO, O SALDO FINAL DE UMA MOLCULA DE GLICOSE DE 38ATP

MAS...
acaba gerando RLs!!!

BALANO ENERGTICO *cada DA RESPIRAO piruvato AERBICA #MITOCNDRIA) (dependente de O

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2

1 glicose

gliclise

descarboxilao oxidativa

2 piruvatos

2 ATP

*acetil-coA C.K.
*1 NADH = 3 ATP NA C.R. *12 ATP (1 DIRETO E 11 NA C.R.)

#CITOSOL (independente de O2)

2 NADH = 6 ATP NA C.R.

BALANO ENERGTICO DA RESPIRAO AERBICA

Gliclise (diretamente e Atravs da C.R.) Descarboxilao e Ciclo de Krebs (diretamente e atravs da C.R. ambos na mit.)

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Gliclise: 4 ATP 2 ATP = 2 ATP (*citosol) 2 NADH2 x 3 ATP = 6 ATP (*na C.R. mit.) Rendimento total da gliclise 8 ATP
1 cido pirvico 1 acetil-coA: 1 NADH2 = 3 ATP Ciclo de Krebs: 3 NADH2= x 3 ATP = 9 ATP 1 FADH2 = x 2 ATP = 2 ATP 1 ATP (no prprio ciclo) = 1 ATP Rendimento total do Ciclo de Krebs 15 ATP e descarb. (x2 = 30 ATP)
30 ATP (ciclo e descarb.)+ 8 ATP (gliclise) = 38 ATP OU (duas maneiras de pensar) 2 ATP (citosol) + 36 ATP (mitocndria) = 38 ATP

Rendimento total da respirao aerbica

A cadeia respiratria a principal fonte de radicais livres

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A CADEIA RESPIRATRIA
prtons
COMPLEXO I
Substrato NAD FMN Coq

COMPLEXO III
2 Citb 2 Citc1 2 cit c

COMPLEXO IV
2 cit aa3

COMPLEXO II
Substrato FAD

+ eltrons + hidroxila =

gua metablica Devido configurao eletrnica do oxignio (muito eletronegativo), a hidroxila recebe os eltrons 1 de cada vez. Assim, at produzir a gua, formam-se intermedirios bastante reativos e, em 5% das vezes, esses compostos so desviados da cadeia, sendo nocivos...

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A ADIO DOS ELTRONS E A FORMAO DA HIDROXILA

oxignio (O2)
ERMO + 2 prtons = ERMO perxido de hidrognio + (H2O2) 1 eltron = OH- + OH. +

1 eltron

nion superxido (O2.-)

+ 1 eltron Esse eltron provm, geralmente, do ferro e do cobre, componentes dos citocromos...

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A FORMAO DA GUA METABLICA

OH+ 1 eltron =

GUA

O OH. (radical hidroxila), que se formou junto com a o o on hidroxila (OH-), uma das espcies mais reativas que se conhece!!! O on forma gua e o radical pode atacar os compostos celulares...

ON HIDROXILA = OH RADICAL HIDROXILA = OH.

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OUTRAS FONTES ENDGENAS

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AO BACTERICIDA DOS LEUCCITOS

Reao de Haber-Weiss

+ O2-

O2 + OH- + OH.

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ENZIMAS CICLOOXIGENASE E LIPOOXIGENASE

cido araquidnico

PROSTAGLANDINAS
TROMBOXANOS

LEUCOTRIENOS
PROSTAGLANDINAS = controle da presso arterial, estimulao da contrao da musculatura lisa, induo da resposta inflamatria inibio da agregao plaquetria

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EFEITOS MICROSCPICOS (SOBRE OS LIPDEOS)

Os radicais livres podem provocar a alterao dos componentes lipdicos da membrana, num processo chamando LIPOPEROXIDAO e a membrana perde suas funes (permeabilidade, transporte, etc.)

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Causam desnaturao, inativao, polimerizao, etc., provocando diversas alteraes no metabolismo celular

EFEITOS MICROSCPICOS (NAS PROTENAS E ENZIMAS)

Alm disso, o lisossomo afetado, e acaba liberando suas enzimas digestivas, provocando a MORTE CELULAR

Os radicais livres tm ntima relao com mutao em gametas, causando diversas alteraes cromossmicas, entre elas a sndrome de Down (trissomia do cromossomo 21)

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Causam modificaes e ruptura das ligaes entredas bases nitrogenadas, resultando em mutaes, levando senescncia celular (ENVELHECIMENTO)
Como se acredita que com a idade, vamos acumulando as mutaes ocorridas em nosso organismo, diz-se que cncer em pessoas idosas mais comum
+ MUTAES GENES SUPRESSORES DE TUMOR PROTOONCOGENES ONCOGENES CNCER

EFEITOS MICROSCPICOS (NOS CIDOS NUCLICOS)

E AINDA TEM GENTE QUE RECLAMA QUE A VIDA LISOSSOMO CURTA!!!

NCLEO MEMBRANA PLASMTICA X X

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X
Com todas as nossas clulas sendo constantemente bombardeadas desse jeito desde que nascemos, como que vivemos tanto tempo???

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OH...

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EFEITOS MACROSCPICOS
NO SISTEMA RESPIRATRIO:

Enfisema;

Perfuso dos tecidos e conseqente isquemia).

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EFEITOS MACROSCPICOS
NO SISTEMA NERVOSO:

As protenas defeituosas se aglomeram (lipofuscina com ceride composto no degradvel: associada ao ENVELHECIMENTO) e interrompem o fluxo de material dentro da clula. Prejudica muito o SISTEMA NERVOSO (depende de fluxo intenso de NEUROTRANSMISSORES); Heat Shock proteins (HSP) podem impedir esse aglomeramento;

Essa protenas podem ser degradadas no lisossomo ou no proteossomo (marcadas com ubiquitina);
Causam mal de Alzheimer, esclerose mltipla e doena de Parkinson.

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EFEITOS MACROSCPICOS
NO SISTEMA DIGESTRIO:

lcera gstrica; lcera intestinal.

Locais mais afetados: artrias com grande presso (aorta e coronrias); s vezes nas cerebrais: AVC

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EFEITOS MACROSCPICOS
macrfago digere (clula esponjosa) e se rompe

NO SISTEMA CARDIOVASCULAR: Aterosclerose (acmulo de gorduras e de clulas nos vasos). RADICAIS LIVRES OXIDA O COLESTEROL LDL

Forma placa gordurosa, que pode calcificar, causando obstruo vascular, isquemia e dilatao vascular.

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DOENAS QUE GERAM RADICAIS LIVRES: Diabetes: diabticos tendem a produzir mais radicais livres; Artrite Reumatide: doena auto-imune com grande produo de radicais livres, provocando leso tecidual

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EFEITOS BENFICOS
So utilizados pelas clulas fagocticas e citotxicas para combater agentes estranhos e clulas tumorais (a prpria radioterapia baseia-se na formao desses compostos atravs da ruptura de ligaes covalentes)...

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EFEITOS BENFICOS
O xido ntrico (NO) formado, principalmente, pela ao da xido ntrico sintetase. extremamente importante para o nosso corpo (dilatao de vasos, sistema imunolgico, etc.), e um ERN (espcie reativa de nitrognio) e, como tal, pode gerar stress oxidativo quando em excesso atravs dos ons nitrosnio (NO+) e nitroxila (NO-)

DEFESAS CONTRA OS RADICAIS LIVRES: OS ANTIOXIDANTES

Qualquer substncia que retarda ou previne a deteriorao, dano ou destruio provocados pela oxidao. Podem ser:
Enzimticos (endgenos); No-enzimticos (vitaminas exgenas).

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ANTIOXIDANTES ENZIMTICOS
4 ons superxido (O2.-) 4 prtons
Pela ao da CATALASE no citosol (principalmente no PEROXISSOMO SOD 2 O2

2 perxidos de hidrognio
(H2O2) pode ser convertido a gua por 2 maneiras: Pela ao da GPX nas mitocndrias (raras vezes no citosol)

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ANTIOXIDANTES ENZIMTICOS

A enzima GPX (glutationa peroxidase) reage a glutationa (que se oxida) com perxidos, evitando que estes ataquem outros compostos celulares importantes.

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SEM O NADPH NO D...

A enzima GPX utiliza o NADPH como substrato para sua reao. Logo:
deficincia de glicose 6-P desidrogenase deficincia no ciclo das pentoses

(deveria produzir NADPH)

o organismo fica mais suscetvel ao danosa dos radicais livres

no ocorre a reao da GPX

... Como no h o poder redutor da clula (glutationa), o ferro da hemoglobina oxidado por um RL. A hemcia se hemolisa (j que ela no tem mais afinidade pelo oxignio), e o excesso da bilirrubina (resultado da degradao da hemoglobina) se acumula na pele e na esclera: ICTERCIA

ANTIOXIDANTES NOENZIMTICOS: VITAMINA E (ALFA-TOCOFEROL)

Possui um grupo hidroxila preso ao anel de ressonncia. Desse grupo hidroxila, se tira o eltron para estabilizar qualquer RADICAL LIVRE prximo, ficando, assim, instvel; Vitamina lipossolvel.

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ANTIOXIDANTES NOENZIMTICOS: VITAMINA C

...O eltron que a vitamina E perdeu para o RADICAL LIVRE, devolvido pela vitamina C (cido ascrbico)...
Mas, por que trocar uma vitamina instvel por outra????? Porque a vitamina C hidrossolvel e, assim, facilmente eliminada pelo organismo Ento, para que tenham efeito antioxidante eficiente, as vitaminas C e E devem ser ingeridas conjuntamente...

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ANTIOXIDANTES NOVITAMNICOS:
Compostos fenlicos: cidos fenlicos Flavonides Antocianos Taninos Presentes nas uvas e nos vinhos; exercem significativos efeitos protetores e profilticos nas reaes oxidativas que envolvem a aterognese e trombose. Em doses apropriadas (porque vinho tambm tem lcool, que uma fonte exgena de RLs ERMO alcoxil ), os vinhos possuem atividade varredora anti-radicais livres e regeneradora de antioxidantes

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OUTROS MECANISMOS ANTIOXIDANTES

Separao de espcies e stios envolvidos na gerao de radicais livres do resto da clula (COMPARTIMENTALIZAO CELULAR);
Existem reparos aos danos feitos ao DNA;

Os carotenides eliminam o oxignio singlet.

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FONTES DE ANTIOXIDANTES
VITAMINA C: frutas ctricas como laranja, limo,
morango e em vegetais como brcolis, repolho, couveflor, pimento verde. sementes, brcolis, beterraba, folhas verdes e cereais integrais

VITAMINA E: germe de trigo, abacate, manteiga,

CAROTENIDES: cenoura, batata-doce, abbora,

papaia, manga, carambola, nectarina, pssego , espinafre, brcolis, couve, agrio, nabo, mostarda, aspargo, ervilha, ameixa.

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STRESS OXIDATIVO
Ocorre quando os ERMOs so produzidos mais rpido do que so removidos pelos mecanismos de defesa das clulas. Os antioxidantes no conseguem ser eficientes o suficiente...
ERMO s

Antioxidantes

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BIBLIOGRAFIA
Ferreira, A.L.A.; L.S., Matsubara. Radicais livres: conceitos, doenas relacionadas, sistema de defesa e estresse oxidativo. Ass. Med. Brasil, 2002; 43 (1): 61-8 Murray, Robert K.; Granner, Daryl K.; Mayes, Peter W.; Rodwell, Victor W. - Harper: Bioqumica 9 ed. Marks DB, Marks AD, Smith CM. Basic Medical Biochemistry - A Clinical Approach. Lippincott Williams & Wilkins, 2004. Olszewer, Efrain - Radicais Livres em Medicina