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El procesamiento del ARN sirve para generar (en el caso de los genes que codifican para protenas) un ARNm maduro ARNt o ARNr funcionales, a partir del trascripto primario. El procesamiento del ARNm inmaduro involucra los siguientes pasos:
Capping (poner un sombrero): Se aade 7-methylguanylato (m7G) al extremo 5'. Poliadenilacin: Se agrega una cola de poli-A al extremo 3. l Empalmado (Splicing): El proceso de quitar los intrones y juntar los exones.
CAPPING
El proceso de capping ocurre poco despus de que la transcripcin se inicia. La estructura qumica del gorro (cap) se muestra en la figura de la diapositiva siguiente, en donde el m7G es unido al primer nucletido mediante una union especial 5-5 trifosfato. En la mayora de los organismos el primer nucletido es metilado en el OH 2 de la ribosa. En los vertebrados, el segundo nucletido tambin se mmetila.
CAPPING
CAPPING
POLIADENILACIN
La terminacin de la transcripcin ocurre solamente despus de que la polimerasa del ARN transcribe una secuencia consenso AUAAA que es el sitio de poliadenilacin. Pasando de 10-30 nucletidos se agregan alrededor de 100 a 200 resduos de adenina al transcripto de ARNm: la cola de poly(A). La enzima poly(A) polimerasa es la que cataliza sta reaccin. La cola de poly(A) proporciona estabilidad al ARNm.
POLIADENILACIN
Splicing signal
Most introns start from the sequence GU and end with the sequence AG (in the 5' to 3' direction). They are referred to as the splice donor and splice acceptor site, respectively. However, the sequences at the two sites are not sufficient to signal the presence of an intron. Another important sequence is called the branch site located 20 - 50 bases upstream of the acceptor site. The consensus sequence of the branch site is "CU(A/G)A(C/U)", where A is conserved in all genes. In over 60% of cases, the exon sequence is (A/C)AG at the donor site, and G at the acceptor site.
The detailed splicing mechanism is quite complex. In short, it involves five snRNAs and their associated proteins. These ribonucleoproteins form a large (60S) complex, called spliceosome. Then, after a twostep enzymatic reaction, the intron is removed and two neighboring exons are joined together (see Alberts et al.). The branch point A residue plays a critical role in the enzymatic reaction.
Expression of the b-globin gene is a typical process. This gene contains two introns and three exons. Interestingly, the codon of the 30th amino acid, AGG, is separated by an intron. As a result, the first two nucleotides AG are in one exon and the third nucleotide G is in another exon.
Sexual differentiation in Drosophila (fruit fly) is regulated by a protein called sex-lethal (sxl) protein. The female embryo expresses functional sxl proteins whereas the male embryo expresses non-functional sxl proteins. Their difference is a result of alternative splicing as shown in the following figures.
OMISION DE EXONES
ENFERMEDAD DE FABRY
La enfermedad de Fabry (MIM 301500) es una enfermedad hereditaria que se caracteriza por la alteracin o ausencia de actividad de la enzima alfa-galactosidasa lisosomal (alfa-Gal). Esta falta de actividad enzimatica provoca la acumulacin progresiva de glucoesfingolipidos, como el sustrato globotriaosilceramida (GL-3) en la pared de los vasos sanguneos. La acumulacin de GL-3 en los tejidos provoca una alteracion progresiva de la funcin de diversos rganos y tejidos del organismo. La causa de la falta de actividad enzimatica de la alfa-galactosidasa reside en alteraciones del gen alfa-Gal, que codifica para esta enzima.
ENFERMEDAD DE FABRY
El gen de la alfa-galactosidasa GLA esta situado en el cromosoma X en la posicin xq22, ocupa unas 12 kb y contiene 7 exones con un tamao inferior a 300 pb cada uno1. Este gen fue clonado por Bishop, et al. en 1986 y codifica un precursor proteico de 429 aminocidos. Se han descrito mas de 200 mutaciones (Hunam Gene Mutation Database, http://archive.uwcmac.uk/uncm/mg/hgnd0.html ) que afectan a este gen y que son responsables del desarrollo de la enfermedad en sus portadores. En la mayora de casos, los defectos en el gen alfa-Gal son transmitidos de padres a hijos en el seno de una familia portadora, sin embargo, las mutaciones pueden aparecer de nuevo en un paciente sin que existan antecedentes familiares.