CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Claudia E Barraza Z- curso 2012

Algunos conceptos bsicos...

Esterilizacin: eliminacin o muerte de microorganismos que contiene un objeto o sustancia. todos los

Bactericida: Agentes que destruyen y matan a las bacterias Bacteriosttico: Agentes que inhiben el crecimiento de las bacterias Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como mesadas de trabajo. Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre piel y/o mucosas

RAZONES PARA PRACTICAR CONTROL MICROBIANO

Prevenir transmisin de enfermedades Prevenir contaminacin

Agentes Fsicos
CALOR

RADIACIONES

FILTRACIN

Calor
Calor hmedo
Ambos pueden ser utilizados en procesos de esterilizacin

Calor seco

Calor hmedo
PROCESOS

Esterilizacin: Vapor saturado a presiones mayores que la atmosfrica Tindalizacin Pasteurizacin

MECANISMOS DE ACCIN Desnaturalizacin de protenas Destruccin de cidos nucleicos

Perfil de temperatura de un proceso de esterilizacin por calor hmedo

Temperatura C

120

110
100

3
Tiempo (min.)

15
Etapa de calentamiento Etapa de Etapa de enfriamiento mantenimiento

Calor Seco
Mecanismo de accin: Procesos de oxidacin Controles de proceso de esterilizacin Indicadores fsicos y qumicos Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis var. niger (D 160C = 0.3 a 1.8 min, Z=20C, tamao del inculo: 105 esporas)

Calor Seco
Aire caliente: Equipo:Hornos elctricos Alcance: Se consigue esterilizacin (170C, 60 minutos o 160C, 120 minutos) Usos:

a) Esterilizacin de:
Materiales resistentes al calor Sustancias no miscibles en agua (inyectables oleosos, siliconas, vaselina lquida) Polvos b) Despirogenizacion (250C 45 minutos o 180C 4hs, o 650 1 min)

 Incineracin:
Destruccin de material contaminado

Flameado :
Desinfeccin

Resistencia a calor
RESISTENCIA Priones Endosporas bacterianas Mycobacteria Virus sin envoltura lipdica Hongos Bacterias Virus con envoltura lipdica

Esterilizacin por filtracin

La esterilizacin por filtracin se logra por el paso de un lquido o un gas a travs de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La esterilizacin por filtracin se emplea para materiales sensibles al calor, tales como ciertos medios de cultivo, azcares, soluciones de antibiticos y otros medicamentos, etc.

Filtros de profundidad: Estos filtros estn elaborados por un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio) dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vas tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayora de los contaminantes presentes.

Filtros de superficie: Son filtros elaborados generalmente de acetato de celulosa o nitrato de celulosa y contienen poros de tamao uniforme. Este tipo de filtro tiene como ventaja que, al conocer exactamente el tamao de poro que presentan, se pueden seleccionar filtros capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una solucin. Sin embargo, se saturan rpidamente y la velocidad de filtracin a travs de ellos es lenta. La mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y luego se manipulan aspticamente al ensamblar el equipo.

FILTRACIN DE AIRE
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) Remocin de hasta el 99.97% de partculas mayores de 0.3 micrones de dimetro Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar CONTROL Retencin Mnima de un 99.97% de partculas generadas mediante ensayo DOP(di-octil-nftalato) en caliente con un dimetro de 0.3 micrones.

SE USAN PARA Lograr ambientes con nmero de partculas controlado: FLUJOS LAMINARES AREAS DE TRABAJO

Cabinas de Flujo Laminar Vertical

Salida de aire

Entrada de aire

Protege la muestra, el operador y el medio ambiente

Control por radiacin Radiacin NO Ionizantes

La radiacin ultravioleta incluye longitudes de onda entre 100 y 400 nm. La actividad microbicida de la luz ultravioleta depende entre otros factores de la longitud de onda utilizada y del tiempo de exposicin. Las longitudes de onda con mayor actividad microbicida estn entre 260-270 nm, longitudes de onda donde absorben los cidos nucleicos.

Una caracterstica de la luz UV es su bajo poder de penetracin. Slo los microorganismos que se encuentran en la superficie de los materiales expuestos a la luz UV pueden ser afectados

Radiaciones Ionizantes
Caractersticas: Alta energa, baja longitud de onda Gran poder de penetracin Ionizan tomos y molculas No requieren altas temperaturas Tipos: Rayos gamma (60Co o 137Cs) Rayos catdicos (electrones acelerados) Partculas beta

Procesos de esterilizacin
Agente Calor hmedo Condiciones 121C 15 min. (o equivalente) Usos Material termoestable Penetrable por vapor

Calor seco

160C 2 horas 180C 1 hora

Material termoestable No penetrable por vapor

Radiaciones ionizantes

25KGy 45KGy

Material termosensible Resistente al tratamiento

Filtracin

0.22 micras de poro

Material filtrable

Control de Esterilizacin

Controles del proceso Indicadores: Fsicos Qumicos Biolgicos

Post-proceso: TEST DE ESTERILIDAD !!!

Controles del proceso

Indicador fsico Ej: Temperatura, presin

Indicador qumico

Cambio de color

Indicador biolgico

Microorganismo resistente

Agentes qumicos de esterilizacin y control del crecimiento

Antispticos Alcoholes Iodo rgano-Mercuriales

Colorantes
Desinfectantes y/o Esterilizantes Cloro y Compuestos clorados Aldehdos Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos

Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas. Desorganizan la estructura fosfolipdica de la membrana. No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante.

Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre

Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o decontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.

rgano-Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.

Cloro y sus derivados

El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.

El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua.

El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo) y Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo. Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica

Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad enzimtica. Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas. El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.

Glutaraldehido

Paraformaldehido

Formaldehido

Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso

Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las protenas y fosfolpidos. El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el resido que queda luego de tratar las superficies.

Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.

Coeficiente del fenol